教練合同范文

導語：如何才能寫好一篇教練合同，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

乙方(受聘人) ： (以下簡稱乙方)

甲乙雙方根據國家和本市有關法規、規定，按照自愿、平等、協商一致的原則，簽訂本合同。

第一條合同期限

1.合同有效期：

(1)自 ，合同期為 年。合同期滿聘用關系自然終止。

2.聘用合同期滿前一個月，經雙方協商同意，可以續訂聘用合同。

第二條 工作崗位

1.乙方受聘為兼職 ,全面負責教練部業務及管理工作。

2.根據工作需要及乙方的業務、工作能力和表現，甲方有權調整乙方的工作崗位。

第三條工作條件和勞動保護

1. 甲方實行每周工作 時，每周6天的工作制度。

2. 甲方為乙方提供符合國家規定的安全衛生的工作環境，保證乙方的人身安全及人體不受危害的環境條件下工作。

3. 乙方一旦受聘,為了便于宣傳推廣包裝,甲方有權免費使用乙方圖片及視頻作為永久宣傳使用。

第四條工作報酬

1. 經甲乙雙方協商，乙方的工作崗位是兼職健身教練，每月工資參照績效制度，每月發工資時間為次月的15號。

第五條工作紀律、獎勵和懲處

1.乙方應遵守國家的法律、法規。

2. 乙方應遵守甲方規定的各項規章制度和勞動紀律，自覺服從甲方的管理、教育。

3. 乙方如違反甲方的規章制度、勞動紀律，甲方按市府和單位的有關規定給予處罰。 第六條聘用合同的變更、終止和解除

1.聘用合同依法簽訂后，合同雙方必須全面履行合同規定的義務，任何一方不得擅自變更合同。確需變更時，雙方應協商一致，并按原簽訂程序變更合同。雙方未達成一致意見的，原合同繼續有效。

2.聘用合同期滿或者雙方約定的合同終止條件出現時，聘用合同即自行終止。在聘用合同期滿一個月前，經雙方協商同意，可以續訂聘用合同。

3.甲方單位被撤消，聘用合同自行終止。

4.經聘用合同雙方當事人協商一致，聘用合同可以解除。

5.有下列情形之一的，甲方可以解除聘用合同，但應提前十天以書面形式通知受聘人。

A.乙方患病或非因工負傷醫療期滿后，不能從事原工作，也不愿從事甲方另行安排適當工作的。

B.乙方不能勝任該工作崗位,連續兩個月不能完成私教績效任務的。

C. 乙方不履行聘用合同的。

6.有下列情形之一的，甲方不能終止或解除聘用合同

A.乙方患病或負傷在規定的醫療期內的;

B.女職工在孕期、產期、哺乳期內的(符合《實施意見》第三條第5款規定者除外);

C.法律、法規規定的其他情形。

7. 乙方要求解除聘用合同，應當提前三十天以書面形式通知甲方。并且乙方負責協助甲方招聘相應人員代替乙方工作方可執行。

第七條違反和解除聘用合同的經濟補償

1.乙方不能勝任工作，經過調整工作崗位仍不能勝任工作，由甲方解除聘用合同的，甲方扣除相當于半個月的工資作為乙方給甲方的經濟補償金。

2.乙方需遵守競業規則，若乙方在職期間或離職后去同行業其他公司，乙方不得以任何原因引導教練員及私教客戶去他方，否則乙方須賠償五萬元作為甲方的經濟損失補償，同時，甲方保留追究一切經濟損失的權利。

篇2

一、根據學生的年齡特點采取合適的發聲訓練

合唱隊在發聲練習時要求要以姿勢、口形、呼吸、發聲等方面進行嚴格的訓練，通過訓練達到掌握一定的技能技巧，并運用到歌曲演唱中去。但每次發聲練習的時間不能過長，一般在10―15分鐘左右。

姿勢――不論坐和站，頭部要保持正直，脖頸自然放松，不可伸長，以免影響喉部器官的正常運用。上身挺直，有精神，雙肩自然放松，稍向后但不聳肩，使胸腔不受拘束和壓力。腿不彎曲，不蹺不歪。

口形――不能過扁過寬，而要象豎著的鴨蛋，下顎要完全放松，不使運動過度而妨礙發聲。嘴唇要靈活有彈性和舌頭配合演唱，比說話時的動作稍稍夸張一些。

呼吸――呼吸是唱歌發聲的基礎動力，歌者應運用正確的呼吸動作并進行呼吸練習，由淺入深逐漸引導大家掌握好強、弱、快、慢各種氣息的運用。歌唱的呼吸要深一些，氣息控制在下肋周圍，形成歌唱發聲的支持點。要經常糾正呼吸緊張，吸氣過多，發出聲響，聳肩頸粗等不良習慣。

發聲――發聲練習要以中聲區為主。低聲區的訓練比較容易見效，因為練低音的呼氣壓力較小，聲帶很自然地放松，用“mo”的母音下行練習，再用“ha”、“ho”母音從弱到強找準位置擴大共鳴。在掌握了一定的方法之后，再逐步向高音擴展。高聲區的訓練難度較大，因為聲音愈高呼氣壓力愈大，容易造成聲帶和喉頭緊張，此時必須打開喉嚨，抬高軟腭，用半音向上的方法，和“lu、lo、lü”的母音，輕聲高位地尋找頭腔共鳴位置，不斷鞏固、擴大音量。聲音要求圓潤明亮，位置集中稍靠里一點，即高位置發聲練唱。發聲練習要從柔和的富有彈性的音階練習開始，經常注意克服喊叫、喉音等壞習慣。

二、要有針對性地進行視唱練耳，難度要適宜

視唱練耳是解決識譜、音準、節拍、節拍感的一種練習。它要求由易到難，循序漸進。先從簡單的音階練習到各種節拍的練習曲，包括音程和聲的練習，還可選擇一些聲部合唱練習，根據合唱隊的水平自選自編，長期系統地練習。在合唱訓練中，練習曲的難易程度在很大程度上決定了學生練習時的情緒，在經過學生練到三遍能基本掌握時，學生學得比較開心，興趣地高了，因為他們體會到了收獲的喜悅；當一首曲子唱上四五遍還未能掌握時，他們就開始顯得浮躁、不耐煩，產生了厭煩的情緒；反過來，太簡單一唱就會的學生會感到乏味。因此，在視唱訓練中，練習曲的難易程度一定要適當。

三、二聲部合唱的練習要有針對性

1．加強音準訓練。統一和諧是合唱對聲音的要求，所以合唱對音準的要求非常高。童聲合唱的音準訓練應由淺入深地進行，先練習音階、音程、旋律。通過訓練使學生的音準能力得到提高，為二聲部訓練打下扎實基礎?？焖贂r要防止音趨高，慢速時注意音偏低；強音要防止音趨高，輕聲注意音偏低；遇到難唱的音程，必須重點突破，把好音準關。

2．輔助訓練，在教學中二聲部合唱可以先由老師擔任第二聲部，與第一聲部的學生合作。第二聲部的學生先輕唱，再慢慢放開聲音跟老師唱，漸漸地讓兩聲部合起來。

四、培養學生對合唱的興趣，使學生在歌唱時始終保持專注投入的精神狀態

為了更好地表現合唱藝術作品，除了要對學生加強發聲、視唱、練耳等基礎性的訓練之外，還應要求學生在歌唱時，始終保持專注投入的精神狀態。

1．教師要對學生傾注自己滿腔的熱情和真摯的愛，使學生樂意與教師進行交往，并在教師那里找到溫暖和鼓舞。

2．合理地安排各種演唱形式，給學生一些實踐的機會，進行一些觀摩和學習活動。如觀看專業童聲合唱團的錄像、光盤或對錄音進行欣賞學習等，開闊學生的視野，提高他們的欣賞水平。從而使學生始終保持對合唱濃厚的興趣和旺盛的活力。

篇3

2021年半年來，我執法大隊治理車輛超限超載工作在縣委、縣政府、縣交通局的正確領導下，認真貫徹落實《交通運輸部辦公廳公安部辦公廳關于印發規范公路治超執法專項整治行動工作方案的通知（交辦公路〔2017〕130號）》以及《省交通運輸廳、省公安廳關于印發治理車輛超限超載聯合執法常態化制度化工作方案的通知》（黔交政法〔2018〕2號），積極推進部門聯動執法，有力推動治超各項工作持續深入開展，有效打擊了車輛超限超載違法行為。現將我執法大隊治超有關工作情況報告如下：

一、主要做法及成效

（一）落實工作責任，制定方案。

2020年9月，我局和縣公安局結合實際，研究制定《黎平縣治理車輛超限超載聯合執法常態化制度工作方案》，明確責任主體職責,強化交通執法工作的職能，及時與貨運源頭企業簽訂目標責任書，將源頭治超任務分解落實到位。并組織執法人員深入貨運源頭企業，強化貨運源頭監管，組織執法人員深入重點建設項目工地和沙石場開展貨運源頭治超監管，與企業簽訂責任書，使治超工作順利開展。

（二）加大宣傳力度，營造社會氛圍。

通過懸掛宣傳標語、派發宣傳單、召開座談會等多種形式開展宣傳活動，在全縣主要治超路段和源頭企業共懸掛治超橫幅20多條，向廣大車主派發宣傳單1000多份，利用縣新聞中心在有線電視網絡宣傳治超工作相關政策等方式，把宣傳工作貫穿治超工作的全過程，形成正面引導，做到群眾理解、社會支持和車主配合，營造了良好的治超氛圍。

（三）強化源頭管理，全面推進治超工作。

1、各方聯動，推進源頭治理。我大隊認真落實源頭單位巡查制度，經常深入貨運、物流、維修企業及大型廠礦企業開展日常巡查，分別與15家貨運源頭單位簽訂了治超責任書，組織執法人員到貨運企業開展源頭治超宣傳，加強對道路貨物運輸源頭的監督管理。組織人員深入到重點建設項目工地和沙石場開展貨運源頭治超監管，明確路政執法中隊管轄區域及責任，加強了對企業的巡查監管，對裝載量較大的貨源單位進行了排查摸底，為貨源單位公示工作打好基礎。同時我局與公安局各負其責，各司其職，明確各自分工，共同做好治超工作。

2.突出工作重點，加大執法力度。我局加強動靜態監控，堅持以流動治超為依托，重點加大對G356線、S242線等地方的治超力度，特別是三什江以及矮枧等重要路段的打擊力度。我大隊通過加強部門聯動，以流動巡查和舉報相結合的執法方式打擊超限超載車輛，逐步形成全縣監控治理網絡，同時嚴格執法處罰，認真執行省交通運輸廳新頒發的超限超載認定標準進行處罰。半年來共出動治超執法人員64人次，出動執法車輛8輛，檢查車輛163輛次，卸載42噸。未發“百噸王”貨車。

二、下步工作措施

（一）繼續強化工作領導。按照“政府主導、部門聯動、齊抓共管、綜合治理”的總體要求，貫徹落實省、市、縣決策部署，把治超工作責任落實到有關部門，加強治超工作領導，把治超工作列入年度計劃，作為一項重要工作任務來抓，明確職責，制定方案，實行目標責任制和責任追究制度，堅持綜合治理，推進治超工作有序開展。

（二）進一步落實聯合執法機制。貫徹落實全國治超整治專項行動的新規定，加強交通運輸執法部門與公安交通管理部門協調溝通，相互支持配合，制定細化執勤計劃，合理調配執法力量，做好相關的執法銜接工作，按照各自職責分工，落實工作流程的每個環節，做到緊密協作。

（三）進一步強化路面治理力度。堅持路面執法與源頭監管并重的治超方針，交通、公安等部門積極配合，采取部門聯動與區域聯合相結合的方式，加強對主要干線、危橋及其他車輛超限超載嚴重、群眾投訴多的地點和路段。著重加強對車貨總重超過49噸以上的違法超限超載車輛的查處，保持嚴管態勢。

篇4

隨著現代生活節奏的加快，父母們開始變得忙碌了，特別是農村孩子的父母們，為了改善生活條件，背井離鄉，外出務工掙錢，像我們2014級中班，就有80%的幼兒家長外出打工，留守在家的兒童就由爺爺奶奶或是外公外婆照看了。

由于爺奶輩所具有的育兒觀念陳舊，幼兒的生活衛生習慣養成較差，農村的爺爺奶奶們除了照看接送孫子外，為了生計，還要忙著田間地頭的農活，孩子無人接送，有的是一個村的孩子的家長輪流接送，或者托鄰居接送，家長來幼兒園的次數少，與老師的聯系就少了，給老師的家園聯系工作帶來一定的困難。

記得開學的第一次家長會，家長們像逛自由市場一樣，有的早早的來了，有的中途來，還有的家長散會了才來，更離譜的是還有一位家長在家長會后三天才來問：“老師，聽說要開家長會？”

不與老師聯系的家長是少數的。對于這些家長，我們通常采用電話通知聯系，要求家長再忙也要到幼兒園參加活動，如果家長沒有電話，就用小紙條的形式通知，使得家長的到會率盡可能的提高。當然，為了更好的吸引家長參與幼兒園教育，最大限度的調動家長的積極性，更新家長的育兒觀念，指導家長科學育兒，使得家庭、幼兒園、社區教育形成合力，我在家園合作中進行了以下幾個方面的努力。

召開班級家長會

每期在開學和期末各召開一次班級家長會。

開學時的家長會主要向家長介紹本期的保教工作計劃和目標，建立家長委員會，聽取家長對幼兒教育工作的要求，同時向家長宣傳科學育兒知識，講解《3-6歲幼兒學習與發展指南》，推進提出課題要求和目標，要求家長在衛生、安全、保健方面配合幼兒園教育孩子。

期末的家長會則是向家長回報本期工作情況，讓幼兒展示本期所學知識和本領；評選表彰好家長；聽取家長的呼聲和意見，同時也宣傳科學育兒知識和安全保健常識。

舉辦家長學校講座

農村家長，特別是爺爺奶奶們受的教育少，他們大多不識字，吃了不識字的苦頭，他們就想自己的孫子來上幼兒園了，要多認幾個字，早點會做幾道算術題。他們疼愛孫子，但往往是方法欠妥，有的溺愛過頭，對孫子的要求百依百順；有的信奉“黃棍下出好人”，動輒拳腳棍棒相加，對孩子的教育方式簡單，方法粗暴。通過老師有目的、有計劃的宣傳與介紹，幫助家長樹立正確的家教觀念，同時也向家長進行保教知識宣傳，提高家長的教養質量，對切實保護幼兒生命，維護幼兒健康起到了良好的退進作用。三、精心創設家園聯系欄。

我根據本班的具體情況和學期教學教育內容，在家園欄中創設有“家教快訊”、“故事車廂”、“周日計劃”、“主題活動網絡圖”“月計劃”、“小喇叭”和“夸一夸”等欄目，可以讓家長及時了解幼兒園的教育內容和保教方法，使得家園教育取得同步。如“周日計劃”了解本周的教育目標和每天的保教內容，月計劃讓家長對每月的工作有所了解，“主題活動網絡圖”讓家長參與主題進程?！靶±取笨梢园l動家長收集主題活動所需材料。通過小喇叭的宣傳發動，有很多家長積極參與幼兒園組織的活動，支持幼兒園的保教工作。我班鄧鑫小朋友的外婆心靈手巧，她結合本期主題活動“傘的世界”給我班小朋友制作了幾把精美的紙傘，把教室裝扮得十分漂亮，其他的家長也做了很多玩具到幼兒園供小朋友玩耍，極大的豐富了孩子們的活動材料，也激發了其他家長的參與熱情。

針對個別幼兒，及時進行家訪

在發現有不良行為習慣的幼兒，老師就及時家訪，與家長交換意見、看法，達成教育共識，及時矯正幼兒的缺點與錯誤，讓其根正苗紅。有一段時間，我班的劉翼翔小朋友總愛打人，放學路上欺侮其他小孩，還有一次把糞便涂到了胡漢小朋友的衣褲上，胡漢小朋友的家長很氣憤，來找老師評理。我及時進行家訪，與劉翼翔小朋友的家長交談分析原因，同時對胡漢的家長做解釋工作，是孩子淘氣瞎玩。最后家長與老師共同對劉翼翔指出“這樣做是不對的，以后絕對不可以了”，要求他改正錯誤。經過家長與老師的共同努力，劉翼翔小朋友改正了錯誤，不再攻擊其他小朋友了。

電話溝通聯系

現代通訊的發達為老師與家長溝通搭起了方便的橋梁。在每學期開學，認真的登記好每一位幼兒家長的電話號碼，遇到有孩子缺席了、生病了，就可以及時的打電話向家長了解情況，如果孩子在幼兒園生病了，也能及時的通知到家長。一次，我班的李雄林小朋友沒有入園，我就翻出電話號碼本，向家長打電話詢問，結果家長說“孩子一早就出門上幼兒園來了”。我說：“幼兒園沒有孩子，一定在路上玩了?！弊尲议L去找。家長及時發現了，把孩子找到了。我班上有小朋友生病了，老師通過電話詢問孩子的病情，并告訴幼兒，說“老師和小朋友都很想你”。小朋友病好了特別喜歡上幼兒園了。

QQ空間溝通聯系

篇5

【關鍵詞】高校；合唱；聲音統一

合唱是高等院校中一項重要的活動，很多校園晚會及其他活動中都會安排合唱節目。但是合唱表演的參加者往往來自不同的院系，其中絕大多數同學都并非音樂專業出身，甚至很多人都沒有系統學習過音樂知識。因而如何保證合唱中的聲音統一性就成為了一個教學和表演中的難點。以下我們對此問題加以討論，希望能夠對相關的教學和演出實踐有所幫助。

一、高校合唱表演對聲音的要求及其難點

合唱是多聲部音樂的一個品種，其表演的基本形式是群體歌唱。這種聲樂表演形式所追求的是差異性和一致性的有機統一。一方面，它要求參加的成員將各種不同的聲音組合成一個有機的整體；另一方面，這個整體又并不是由完全一樣的聲音構成的，不同成員聲音的差異依然存在。從這個角度來說，合唱這種藝術形式帶有一定的辯證性。但這種差異性是服從于一致性的。首先，合唱聲音中不應出現基礎性的問題，音準、節奏必須準確無誤，各個不同聲部的聲音可以被清晰地分辨出來；其次，參加者不同的音色應凝成一個有機的統一體，圓潤飽滿，而不顯得突兀。進一步來說，則是對聲音的層次感和對比性有要求。不同的聲部應該層次分明，不同的音色、力度、速度之間形成對比，和聲部分應充盈、堅實，對旋律線條起到有力的支撐作用。但這樣的表演要求在高校的合唱演出實踐中卻并不容易達到。由于參加演出者絕大多數都并非音樂專業出身，甚至缺乏一定的音樂訓練，因而很多同學在基本的音準、節奏上都存在一些問題，更不要說追求音樂表現力了。在實際演出中，我們經常能夠遇見聲部混亂、音高不一致、節奏不穩的情況。簡單地說，合唱中的聲音統一對高校合唱演出來說是一個必須正視的重要問題。這就要求我們在教學與排練中有針對性地進行訓練，從而彌補這一缺陷。

二、高校合唱中聲音統一訓練的具體方法

（一）氣息訓練

合唱歌曲中經常會出現一些比較長的樂句，有時因為表現力的需要，還要在同一個樂句中變換節奏的快慢和力度的強弱。在這類樂句的表演中，演唱者應保證自己氣息的平穩，不能因為換氣影響歌曲的表演。這就對表演者控制氣息的能力提出了一定的要求。對于非音樂專業而且又沒接受過相關的專門訓練的同學來說，這樣的要求并不容易達到。因而我們有必要在事前的教學、排練中對此進行專門的訓練。相關的訓練方法很多。比如可以讓學生想象自己的面前有一朵花，然后模擬出自己在吸氣聞花的香氣的狀態，以此來讓學生熟悉聲樂表演中的吸氣方式。在呼吸的節奏上，可以讓學生伴隨著節拍進行吸氣——呼氣的練習，要保證吸氣的量和呼氣的量相等。節拍可以先從簡單的拍子如二二拍、二三拍等開始。在學生能夠伴隨著特定的節奏進行有規律的呼吸后，再逐步提升拍子的復雜程度，如使用四四拍等。同時，在訓練的初期，可以讓學生雙手叉腰作為輔助。在學生能夠按照特定的節奏進行吸氣——呼氣之后，可以讓他們增大吸氣和呼氣的量。再進一步，則可以讓他們在呼氣時放慢速度，做到速度慢、均勻、穩定。在具體的呼氣方式上，讓學生微微張開嘴，用舌尖抵住上排的牙齒，發出“S”的聲音。通過這樣的練習，可以讓學生掌握聲樂表演中基本的呼吸技巧，從而在實際表演的過程中不會因為換氣的問題而影響演出的效果。另外，需要注意的是，上面所說的吸氣——呼氣練習一定要在特定節拍的配合下進行。目前很多高校的合唱訓練中都忽視了這一點，這是不正確的。因為參加合唱表演的學生絕大多數都沒有接受過專業的音樂訓練，所以他們對節奏的感知能力比較弱?；蛘哒f，他們對節奏的認知帶有很強的主觀性，不同的同學所理解的節拍是不同的。如果只是單純進行吸氣——呼氣的練習而沒有和節拍結合起來，那么在排練及實際演出的時候，就很容易出現大家呼吸的節奏不一致，從而影響歌曲的節奏的情況。

（二）音準及節奏訓練

不論是聲樂還是器樂，音準及節奏都是音樂表演中的核心內容。離開了音準、節奏，也就沒有音樂可言了。我們說音樂是一門時間的藝術，而在時間中流動并帶給聽眾藝術享受的，就正是音準和節奏。由于參加高校合唱表演的同學大多沒有接受過專業的音樂訓練，所以他們對音準、節奏的認知能力并不強。事實上，絕大多數同學都只是憑借自己的直覺來認知音準、節奏。有些同學可能相關的天賦比較高或是平時受到的影響多一些，感知能力就好一點；反之，則會差一點。因而，我們在進行合唱教學、排練時，一定要重視音準、節奏這樣的基礎性練習。音準方面，可以讓學生分成幾組，跟隨鋼琴演唱音階?？紤]到現實中合唱曲目的選擇，這里演唱的音階不需要很長。也就是說，并不要求學生具有多寬廣的音域。特別是在高音和低音上，教師不必做出過高的要求。而應該把重點放在音準問題上。即學生跟隨鋼琴聲唱出的音階在音高上必須準確無誤。節奏方面的訓練也與此類似。在講清楚了基本的節奏型之后，可以讓學生分成若干組，分別跟隨著教師的手勢發出“啊”的音。在實際訓練中，可以先從簡單的拍子開始，循序漸進，由淺入深?？紤]到合唱曲目的特點，一切比較復雜的節奏型，如混合拍子、散拍子都可以不做要求。這方面需要注意的是重音的問題。有些教師在進行節奏方面的訓練時，往往只在意學生對不同節奏型的理解和掌握，而對節奏中的強弱問題重視不夠。這是不正確的。缺乏強弱變化的節奏是不能夠傳達出藝術感染力的。因而，在指導學生進行節奏練習之初，教師就應該加強節奏型中強弱音的練習，如三拍子的“強——弱——弱”、四拍子的“強——弱——次強——弱”等。只有讓學生在這方面養成了習慣，將強弱變化與節奏型結合在一起，他們才能在實際演唱的過程中自覺地將節拍中的強音和弱音表現出來。

（三）音量及音色訓練

很多學生由于沒有接受過相關的訓練，而且也缺少登臺演出的經驗，所以在表演合唱時往往不能很好地控制自己的音量。而且學生自身的性格因素也會對此有所影響。如有些學生性格外向，樂于表現自己，就會在合唱時音量比較大；而有些學生性格比較靦腆，就會聲音小一些。作為教師，應該在教學及排練的過程中對此進行很好的協調，讓參加表演的同學們控制好自己的音量，以免過于突出，以至于影響整體的演出效果。音色方面的訓練也很重要，同時這也是很多教師容易忽略的一點。從聲學的角度來說，音色的不同與振動發聲的物體的材質有關。由于每個人的天然條件不同，因而他們所展現出來的音色也必然各不相同。教師應該讓學生對合唱這一藝術形式有明確的認識，知道合唱是一種群體性表演的藝術，個人的聲音應服從于整體的需要，不能讓自己的聲音過于明顯、突兀，以至于破壞整體的藝術效果。

（四）多聲部訓練

在合唱演出中，通常都會用多聲部的結構，以此來提升音樂表演的層次感、立體感和藝術性。相比齊唱，這也是一個難點所在，因為很多同學并沒有相關的演唱經驗。這就需要教師在這方面進行特別的訓練。首先，要讓合唱的參加者對歌曲的結構和表演形式非常熟悉，讓他們知道自己所要演唱的段落應該在什么時候開始，這樣才不會出現銜接不當的情況。此外，每個演唱者也應牢記自己所屬的聲部，不要在表演時聲音過高或過低，以至于影響整體的演出效果，而應該控制好音高、音量，這樣才能很好地表現自己所在聲部承擔的歌曲內容。在具體的訓練方式上，教師可以在鋼琴上隨機彈出將要演出的歌曲的某一片段，讓學生來分辨這是屬于哪一個聲部的。這種方法可以很好地檢驗以及提升學生對歌曲的熟悉程度。此外，還可以讓學生經常觀摩多聲部音樂的演出視頻，以此來強化他們對這種音樂表演形式的認識。另外，需要特別說明的，就是在高音聲部，一定要設置統一的標準。有些女生因為自身條件較好，音域較廣，能唱出的最高音比其他人要高一些。這時一定要強化其音準觀念，做到整個聲部協調一致，不能在演出時出現聲部中某幾個人的聲音特別高的情況。

三、結語

各個參加者的聲音協調統一是合唱這一群體性音樂表演形式的內在要求。由于高校合唱中的很多參加者之前缺少相關的音樂訓練，因而教師需要在這方面特別地加以注意。既要讓每個同學都能夠把自己的音樂才能發揮出來，又要維持整體藝術表現的和諧統一。

參考文獻：

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[2]王茜婷.合唱藝術形式的審美研究[D].湖南師范大學,2014.

[3]翟曉勇.統一性原則在合唱實踐中的運用[J].交響?西安音樂學院學報,2005,(03).

篇6

連線報道也可以稱為電話連線采訪報道，是以聲音為主要傳播載體。電話為媒介，由廣播記者在新聞現場以口述或是互動對話的形式。把新聞信息通過直播間直接播報出去。作為與廣播消息稿、錄音報道并用的一種手段，以記者口語化的描述，勾勒出新聞事件的畫面，把現場氛圍呈現出來，使聽眾如臨其境，具有現場感，增強了廣播新聞的吸引力和感染力。

首先，“交通廣播”連線報道，經驗的總結。作為“交通廣播”記者，在近幾年的采訪報道中，深刻體會到了，連線報道在制作程序上比錄音報道更簡便，表現形式比消息稿更加生動，所以成為當下廣播新聞的重要表現樣式。

1.“交通廣播”連線報道要講究策劃?，F場連線，雖然只是一種簡單的現場采訪形式。但是要做好這種連線。也需要我們前期有一個相對完整的策劃。在實踐中，每一次與對方的接觸都是采訪過程，做訪談、做錄音采訪要提前做好充分準備，同樣，“交通廣播”連線報道現場連線也需要我們策劃。記者需要按照訪談的內容來做準備，經過現場了解從中進行篩選，找出最有現場連線價值的內容。再進行連線。

2.“交通廣播”連線報道要注意發揮。在實踐操作中，我們經常會遇到一些突況，尤其是“交通廣播”連線報道做現場連線，有些事情是我們不可預知的，這時一個記者的現場發揮能力就顯得尤為重要?！敖煌◤V播”連線報道每一次成功的現場連線，背后都是記者現場發揮能力的體現，現場發揮有時候要比準備的內容更豐富、更精彩?！敖煌◤V播”連線報道對突發新聞而言，搶占時間上的制高點非常重要。廣播記者必須時刻牢記的就是連線意識，當記者到達一個突發現場時，在對事件進行采訪、了解事件的來龍去脈后，就應該立即理清思路、組織語言，第一時間發回連線報道。

3.“交通廣播”連線報道要有層次感、完整性?，F場連線，它不是一個簡單事實的陳述，需要我們對各種因素進行重新過濾，然后篩選出有一組有層次感，相對完整的內容。如：為了方便駕駛員對道路狀況的了解。在城管監控指揮中心的大屏幕。每天記者通過十一次電話連線報道，針對哈爾濱市區各主要路段的交通通行狀況，中山路、尚志大街等機動車密集的地方，現場通過連線報道，介紹交通流量與行車情況。把駕駛員最需要最關心的路面出行信息?！敖煌◤V播”連線報道第一時間更直觀更可信的傳播出去。使信息性新聞鮮活生動起來。也使得交通廣播新聞更加富有層次感。

4.“交通廣播”連線報道要注意溝通。不僅是與采訪對象的溝通，包括采訪前、采訪中和采訪后，而且還是與主持人的溝通?，F在，做“交通廣播”連線報道，現場連線我們也經常會發現一些溝通不暢的情況，這一來是主持人與記者默契程度不夠。二來是溝通太少。主持人不知道現場情況，記者不知道主持人介紹情況。三來是配合失誤，有些是很小的錯誤，卻可能出現非常不好的效果。如：“交通廣播”連線報道，采訪前與采訪對象的溝通，在連線報道前把要做連線報道將要提出的問題一一列出，消除采訪對象的緊張感，使得連線報道更順利。“交通廣播”連線報道與主持人的溝通，可以先通過導播溝通，導播在導播間的電腦同屏顯示功能可以傳達給主持人將要連線報道的情況和交流內容。這樣可以充分減少連線報道帶來的小錯誤，從達到良好的播出效果。體現“交通廣播”連線報道的可聽性。

其次，“交通連線”對記者的素質要求更高。連線報道并不是記者到了現場隨便講幾句，以證明自己到過現場，是對記者提出了更高的要求。由于突發事件發生的不可預測性，事先很難做準備。記者沒有現成的稿子可念，而必須在現場口頭描述自己的所見所聞。連線報道具有即時性、一次性以及不可剪輯的特點。簡單來講，連線報道也是記者口頭“撰寫”的一則新聞稿，同樣必須具備新聞的基本要素?！敖煌◤V播”連線報道最重要的就是要有現場感，最簡單與最常用的做法是在有背景聲的現場直接播報。

記者做“交通廣播”連線報道時也并非現場聲響越多越好。如果現場非常嘈雜。完全掩蓋了記者的聲音或是記者需要聲嘶力竭地播報是不合適的?！敖煌◤V播”連線報道的場地選擇也檢驗著一個廣播記者的經驗和能力。記者在事件現場不僅要采集聲音、觀察環境，在相對混亂的狀況下找到當事人或是知情者。在各種不利采訪因素的干擾下獲得有用的信息。在獲得一手新聞素材后，還要立即整理這些素材，形成稿子，很快就要用語言生動地作直播報道。這就是廣播記者不僅要具備最基本的新聞采訪基本功、新聞敏感性、政策理論水平、迅速的文字組織能力。還要具備生動流暢的語言表達能力。連線時口語化的語言。盡量通俗易懂，多用現在進行時態來報道新聞。要做好連線報道，要注意大量細節描述?！敖煌◤V播”連線報道，多路記者在繁華地區、路面地勢低洼地區、車輛集中地區進行現場報道時，再加上些細節：某地積水已經沒過膝蓋了。幾十人正在水中相扶的通過街道；地道過往車輛進水熄火多少臺車了，請駕駛員師傅注意不要再向這個地區行駛了；路人打著傘，身上全被淋濕等細節描述，這樣就讓聽眾感同身受了。

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[關鍵詞] 血管擴張劑;硝酸甘油;聯合應用;心絞痛

[中圖分類號] R972+.3[文獻標識碼]C [文章編號]1674-4721(2010)05(c)-050-02

心絞痛是心血管系統的常見病、多發病。近年來,血管擴張劑的應用在臨床中日益廣泛,它對冠狀動脈血流和心肌灌注的影響特別適用于心絞痛的治療[1]。因此,血管擴張劑的應用對心絞痛的臨床治療有很大意義,可以有效防止心絞痛的發生和并發癥,提高冠心病的治愈率。由于血管擴張劑的藥物種類較多,本院2006年3月~2009年7月對57例心絞痛患者采用硝酸甘油、阿司匹林、硝苯地平聯合用藥取得良好效果,現將臨床應用介紹如下:

1 資料與方法

1.1 一般資料

本院2006年3月~2009年7月共收治114例心絞痛患者,隨機分為治療組(硝酸甘油聯合應用組)和對照組(硝酸甘油組),治療組57例,男35例,女22例,年齡36~73歲,平均54.6歲,病程為3~7年,采用硝酸甘油、阿司匹林、硝苯地平聯合應用;對照組57例,男32例,女25例,年齡33~69歲,平均56.3歲,病程為2~7年,采用硝酸甘油單一治療,兩組患者均給予復方丹參注射液或紅花注射液靜脈滴注。其中,初發勞力性心絞痛11例,勞累性心絞痛38例,自發性心絞痛49例,臥位性心絞痛25例,梗死后心絞痛18例,有52例合并高血壓、糖尿病。

1.2 治療方法

治療組和對照組均用硝酸甘油10 mg加入5%葡萄糖或0.9%氯化鈉250 ml中靜脈滴注,并給予復方丹參注射液或紅花注射液20 ml加入5%葡萄糖或0.9%氯化鈉250 ml中靜脈滴注。治療組在對照組的基礎上加用阿司匹林100 mg,每日1次,硝苯地平10 mg,每日2次。待病情穩定后,可將硝酸甘油改為舌下含服,每次10 mg,每日2次。

1.3療效標準

顯效:胸悶、心悸、氣促,心絞痛癥狀完全消失;有效:胸悶、心悸、氣促,心絞痛癥狀基本消失;基本有效:胸悶、心悸、氣促,心絞痛癥狀稍有改善,但仍感覺不適,不能活動;無效:胸悶、心悸、氣促,心絞痛癥狀沒有任何改善或加重。

1.4 統計學方法

數據由SPSS 14.0軟件系統處理,兩組間資料比較采用χ2檢驗,以P

2 結果

2.1兩組療效比較

見表1。

2.2兩組患者經治療后心電圖變化

見表2。

2.3 不良反應

63例(治療組23例,對照組40例)患者在服用硝酸甘油后出現頭昏、頭脹痛、低血壓等癥狀,減少藥物劑量后反應消失,未出現嚴重的副作用。

3 討論

冠心病心絞痛主要是由于左心室細胞至冠狀動脈之間血流下降引起動脈管腔狹窄、硬化,使局部血流量明顯下降,促使心臟心肌缺血缺氧,加重心臟的病變,由于動脈管腔狹窄、收縮,出現心絞痛并伴有血壓升高[2]。而且由于斑塊內纖維帽出現裂隙,表面上有血小板聚集或刺激冠狀動脈痙攣[3],導致缺血性心絞痛。所以治療心絞痛的目的是緩解心絞痛的癥狀,控制心臟心肌缺血,防止心肌梗死和心臟猝死的發生。

血管擴張劑具有擴張血管,改變心臟的供血和血流,降低心臟的耗氧量等作用。硝酸甘油屬于硝酸脂類藥物,可以松弛血管平滑肌,從而改善體循環和冠狀動脈循環[4]。舌下含服吸收快,生物利用度高,舌下給藥5 min就能產生最大效應。主要經肝腎循環代謝。阿司匹林通過不可逆的抑制血小板和內皮細胞內環氧化酶的通路,阻止血栓環素A的形成,從而抑制血小板聚集和血栓的形成,減少血管的粘連和冠狀動脈痙攣[5]。血管擴張劑聯合應用是治療心絞痛的重要措施,聯合用藥可使藥物產生協同作用,降低心肌耗氧量,同時對抗有些藥物引起的反射性心動過快,降低不良反應的發生。

總之,冠心病心絞痛是臨床上常出現的疾病,血管擴張劑聯合應用不僅可以消除單一藥物使用時產生的耐藥性,還能有效減緩耐藥性發生,降低不良反應,增加心絞痛的治療效果,提高治愈率,延長患者的生命,值得在臨床上廣泛應用和推廣。

[參考文獻]

[1]趙玉杰,玄軍,閻素華.5-單硝酸異山梨醇酯治療勞力性心絞痛[J].新藥與臨床,1996,15(1):34-36.

[2]曹在新.不穩定型心絞痛的治療與分析[J].中國醫藥導報,2008,5(13):185-186.

[3]國家“九五”攻關課題組.小劑量尿激酶溶栓治療不穩定性心絞痛的臨床療效[J].中華心血管雜志,2000,28(6):413.

[4]何惠玉.冠心寧注射治療不穩定型心絞痛27例療效分析[J].中國現代醫生,2007,45(1):32.

[5]陳國偉,鄭宗鄂.現代心臟內科學[M].長沙:湖南科技出版社,1997:908-921.

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1.使用“硝酸戊四醇酯+復方丹參滴丸”預防心絞痛發作

李女士今年54歲，患心絞痛已經5年了。每當到了秋冬季節，她的病情就會頻繁地發作。去年夏天，她來我科進行診治時，我讓她同時服用硝酸戊四醇酯和復方丹參滴丸來預防此病的發作。李女士在堅持服用這兩種藥物一段時間后，心絞痛發作的次數明顯地減少了。

硝酸戊四醇脂也叫硝酸季戊脂，屬于長效硝酸脂類抗心絞痛藥。此藥是預防心絞痛復發的首選藥，其功效與硝酸甘油相似，但起效緩慢、藥效持久。硝酸戊四醇脂的用法是：每次服10―30毫克，每天服3―4次。復方丹參滴丸是由丹參、三七、冰片制成的中成藥，具有擴張冠狀動脈、增加心肌供血量、增強心肌收縮力的作用。此藥比復方丹參片更易被人體吸收，其藥效持久，副作用很小，在與硝酸戊四醇脂合用時可起到理想的預防心絞痛復發的作用。復方丹參滴丸的用法是：每次服10粒，每天服3次。除了使用“硝酸戊四醇脂+復方丹參滴丸”進行治療外，心絞痛患者還可選用“布庫洛爾+復方丹參片”、“丁四硝脂+心脈寧”、“消心痛+心血康”等聯合用藥的方法來預防心絞痛的發作。

2.使用“硝酸甘油+心得安”治療心絞痛合并心率增快

王先生今年57歲，患心絞痛已經兩年了。半個月前，他因天氣變冷而誘發了心絞痛，并出現了心率增快的癥狀，服用硝酸甘油后其病情未能緩解。來我科檢查后，我建議他同時服用硝酸甘油和心得安進行治療。在用藥5分鐘后，王先生心絞痛和心率增快的癥狀就得到明顯緩解，在20分鐘后這些癥狀就全部消失了。

硝酸甘油屬于血管擴張藥，具有松弛血管平滑肌、擴張全身血管、減少心臟的前后負荷和心肌的耗氧量、降低左心室的壓力、改善心內膜的血液循環等作用。在臨床上，此藥常用于治療急性發作的心絞痛。硝酸甘油兼有降壓的作用，因此非常適合同時患有高血壓的心絞痛患者使用。此藥的用法為：每次舌下含服300―500毫克，在用藥無效時可每隔30分鐘再服藥一次。心得安也叫普萘洛爾，屬于β-受體阻滯劑，具有良好的減慢心率的作用，其用法為：每次服10毫克，每天服3次。將此藥和硝酸甘油聯合起來使用，可有效地治療合并心率增快的心絞痛。除了選用“硝酸甘油+心得安”以外，心絞痛合并心率增快的患者還可選用“心痛定+維拉帕米”、“尼群地平+異搏定”或“洛爾地平+心律平”進行治療。

3.使用“心可定+安定”治療心絞痛合并早搏

劉先生今年45歲，患心絞痛已經兩年了。不久前，他因工作壓力大，精神過度緊張而出現了心絞痛急性發作和早搏的癥狀，經自服硝苯地平其癥狀未能緩解。來我院進行檢查后，我建議他同時服用硝苯地平和安定進行治療。在服用這兩種藥物30分鐘后，他的病情明顯好轉。在用藥1個小時后，他的臨床癥狀就全部消失了。

心可定也叫雙苯丙胺，是治療心絞痛合并快速型心律失常（如早搏、心動過速等）的首選藥。此藥具有抑制心肌的收縮力、松弛血管平滑肌、增加冠狀動脈的血流量、降低冠狀動脈的耗氧量、促進側支循環形成等作用。在臨床上，此藥主要用于治療心絞痛，尤其在治療伴有早搏、室性心動過速的心絞痛時效果最佳。心可定的用法是：每次服15―30毫克，每天服3次（在癥狀緩解后可改為每次服15毫克，每天服2―3次）。安定屬于苯二氮卓類鎮靜劑，具有抗焦慮、鎮靜的作用，是緩解精神緊張的首選藥。此藥的用法是：每次服2.5―5毫克，每天服3次或在睡前服1次。將此藥與心可定聯合起來使用，可有效治療因精神緊張而誘發的早搏和心絞痛。除了使用“心可定+安定”進行治療以外，合并早搏的心絞痛患者還可選用“香豆丁心安+苯巴比妥”、“雙環己哌啶+利眠寧”、“尤心利安+安寧”進行治療。

4.有咳嗽、咳痰癥狀的心絞痛患者可聯合使用“硝酸甘油+毛冬青”進行治療

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關鍵詞 寡核苷酸； 藥代動力學； 定量； 核酸雜交； 酶聯橋接分析系統

1 引 言

反義（Antisense，AS）寡核苷酸（Oligodeoxynucleotide，ODN）、免疫刺激基序（CpG）ODN等分子，在抗腫瘤、抗病毒治療等基因治療領域中占據重要地位。迄今，ASODN與CpG ODN類藥物經美國FDA批準上市，已有多種該類藥物處于臨床前和臨床試驗階段\。

目前，生物樣品中ODN藥物的定量分析方法最為成熟，其中應用最多的是非放射性同位素標記定量分析方法， 包括毛細管電泳（Capillary electrophoresis， CE）和高效液相色譜法（High performance liquid chromatography， HPLC）。CE方法對于ODN的檢測具有高分辨率、可分辨相差一個核苷酸的ODN，其在血漿基質中對ODN的最低定量限（Lower limit of quantification， LLOQ）約在70 g/L（約12 nmol/L）\水平。本課題組曾利用改良的毛細管非膠篩分電泳方法對硫代修飾ASODN進行藥代動力學研究\，可描述5 mg/kg以上劑量給藥后獼猴的血漿動力學行為，但該方法對于末端消除相數據的獲得不甚理想，對于更低劑量下（如1 mg/kg）給藥后的藥時曲線描述更是無能為力。HPLC方法的分辨率和靈敏度與CE方法相比略低。目前ODN類藥物通常在較低劑量下（≤1 mg/kg \）給藥即能發揮藥效，這對定量分析方法學的靈敏度提出越來越高的要求。上述方法的靈敏度難以達到對ODN在血漿和組織中藥代動力學（Pharmacokinetics，PK）終末消除相的定量能力（濃度通常低于10 nmol/L） \。此外，上述兩種主流分析方法還有一個共同的缺陷，即樣品前處理過程相當復雜，絕對回收率低，分析周期長、成本高，應用受限\。

核酸分子雜交的酶聯橋接（Enzymelinked bridging assay，ELBA）法基于核酸雜交原理，利用一個錨定的、3′端與待測反義寡核苷酸（Test ODN）序列互補的俘獲探針俘獲生物基質中的Test ODN，再通過連接酶將檢測探針（序列與俘獲探針5′端互補，3′端偶聯酶標顯色系統）與上述核酸雜交復合物相連，建立橋接體系。S1核酸內切酶是單鏈特異性的核酸內切酶，可以降解雙鏈核酸中的單鏈或缺口處切割雙鏈 DNA，在上述橋接體系中，可以通過酶切將不能與檢測探針連接從而構成完整雙鏈的差減ODN序列（即ODN的降解產物，其3′端與檢測探針5′端之間有1個以上的堿基缺口）去除，以保證橋接系統的序列長度特異性。最終利用檢測探針3′端偶聯的酶標顯色系統，對Test ODN原形進行定量。酶聯橋接分析系統的的原理如圖1所示。該方法在靈敏度、特異性以及適用性上均較傳統的定量分析方法具有優勢\，因此，基于核酸雜交的ELBA系統在寡核酸類藥物PK研究中具有巨大的應用前景。本研究對所建立ELBA系統中的諸多條件，包括親和素包被、俘獲探針與檢測探針濃度比、T4連接酶及S1核酸酶用量、生物基質效應、稀釋效應以及顯色系統等進行了細致的優化，使系統更具穩定性與通用性。

圖1 酶聯橋接分析系統的原理

Fig．1 Principle of enzymelinked bridging assay （ELBA）

2 實驗部分

2.1 儀器與試劑

HeraeusBB5060培養箱（上海賀利氏公司）；超純水系統（美國MILLIPORE公司）；微量振蕩器（國華電器有限公司）；微量加樣器（美國Gilson公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京長風公司）；MK 3酶標儀（德國Thermo公司）。

鏈霉親和素（Streptavidin，SA, Promega公司）；鏈霉親和素包被酶標板（StreptavidinCoated 96well plate, Cayman Chemical公司）；T4 DNA 連接酶（NEB公司）；S1核酸酶（Invitrogen公司）；酶標抗地高辛抗體（Antidigoxigeninalkaline Phosphatase，ADAP, Roche公司）；中性親和素包被的酶標板（ReactiBind NeutrAvidin Coated），封閉液（SuperBlock Blocking buffer）和顯色液（pNitrophenyl phosphate，PNPP）均購自Pierce公司。

本研究中采用ODN及其核酸探針由上海生工生物工程技術服務有限公司合成，其序列結構見表1。其它生化試劑：TrisHCl, HCl, Na2HPO4，NaCl, NaHCO3, Tween20, EDTA和曲拉通等均為分析純試劑。

L，加入反應孔中，18 ℃過夜連接。洗滌后加入一定酶活單位的S1核酸內切酶，37 ℃酶切1.5 h后洗板。

2.2.3 顯色反應 封閉液在37 ℃反應30 min后，加入酶標抗體（1∶1500稀釋于2%牛血清白蛋白中），室溫振蕩反應30 min。洗滌后加入新鮮配制PNPP顯色液，37 ℃反應15～30 min。加入2 mol/L NaOH終止，用酶標儀檢測405/630 nm處光吸收值（Optical density，OD）值。

2.3 實驗條件的優化

2.3.1 親和素包被的條件選擇 100 nmol/L Test ODN經二次蒸餾水（ddH2O）倍比稀釋至0.39 nmol/L，隨行零對照，各濃度復孔，重復3次?？疾炝?種親和素包被條件對靈敏度和響應值的影響：（1）Pierce公司中性親和素包被酶標板；（2） CAYMAN CHEMICAL公司鏈霉親和素包被酶標板；（3） 鏈霉親和素25 mg/L和50 mg/L包被的96孔板（包被緩沖液：15 mmol/L Na2CO3，35 mmol/L NaHCO3，pH 9.6）。

2.3.2 優化探針濃度 從兩個角度優化俘獲探針和檢測探針濃度: （1）Test ODN濃度為5 nmol/L時，考察俘獲探針在100 nmol/L條件下，不同濃度（50，75，100，150和200 nmol/L）檢測探針對應OD值變化曲線，反之考察俘獲探針的最優濃度。（2）倍比稀釋12.5 nmol/L Test ODN至0.78 nmol/L，檢測探針與俘獲探針比例分別為150∶100，150∶150 和 150∶200對方法線性的影響。

2.3.3 優化PNPP顯色時間 獼猴血漿倍比稀釋12.50 nmol/L Test ODN至0.39 nmol/L，按照優化后的反應條件，考察PNPP顯色步驟中不同顯色時間（15， 20和30 min）對定量曲線線性的影響。

2.3.4 S1酶用量的優化 獼猴血漿倍比稀釋 Test ODN 12.50 nmol/L至0.39 nmol/L，加零對照，考察S1酶不同加入量（5，10，20，40，80和100 U/孔）對線性的影響。

2.4 生物基質的影響

分別以獼猴全血漿和ddH2O為基質倍比稀釋12.5 nmol/L Test ODN至0.39 nmol/

L，并將另行配制的兩份同濃度的血漿樣品稀釋1倍和10倍，對比考察生物基質對檢測結果的影響。

2.5 利用ELBA和CE方法對獼猴體內低劑量給藥PK研究

4只獼猴單次靜脈滴注（v.d.）1 mg/kg Test ODN，30 min內恒速靜脈滴注完畢，分別于給藥前（0 min）以及滴注開始后0.2，0.3，0.5，0.35，0.75，1.0，1.25，1.5，2.0，2.5，3.0，4.0，6.0 和8.0 h，在給藥部位對側后肢靜脈取血，血樣均用EDTAK2抗凝管采集，3000 g 離心收集血漿樣品于80 ℃保存待測。ELBA對樣品測定時同板隨行標線和質控樣品，根據標線對生物樣品中 Test ODN進行定量分析。

CE定量的樣品前處理和測定方法參見文獻\。單次靜脈滴注5 mg/kg Test ODN，給藥方式和血樣采集同ELBA方法。

血漿樣品中對Test ODN 原形、3′N1和5′N1降解產物進行12.5 nmol/L至0.39 nmol/L的倍比稀釋，通過計算交叉反應性確定該方法針對原形藥物測定的特異性，計算公式為：降解產物的半數效應濃度（EC50）/Test ODN 原形的半數效應濃度（EC50）。

2.6 數據處理

用EXCEL2007對所得數據進行整理并用ORIGIN 5.0對整理后數據進行擬合作圖，藥代動力學參數使用WinNonlin進行計算。3 結果與討論

3.1 實驗條件優化

3.1.1 不同包被條件對定量范圍的影響

鏈霉親和素包被酶標板（CAYMAN CHEMICAL公司）與自制兩種鏈霉親和素包被量的酶標板反應性能相同，在10 ～100 nmol/L較高濃度范圍可呈良好線性，提示增加鏈霉親和素包被量并不能提高靈敏度。與鏈霉親和素包被相比，中性親和素包被酶標板（Pierce公司）本底較低，靈敏度高；在0.5 ～7.5 nmol/L可呈線性遞增趨勢（圖2A）。中性親和素和鏈霉親和素分子量相同，均可與生物素結合，但是前者與生物素結合時非特異性結合最低，可以大大提高特異性和靈敏度。本研究以建立高靈敏度的定量分析方法為目標，選擇Pierce公司中性親和素包被的酶標板進行后續實驗。

3.1.2 優化探針濃度 固定 Test ODN濃度為5 nmol/L，檢測探針濃度為100 nmol/L的條件下，俘獲探針在100 nmol/L 以下信號值與濃度呈明顯正相關，大于100 nmol/L呈飽和趨勢，同樣在固定 Test ODN為5 nmol/L，俘獲探針在100 nmol/L的條件下，檢測探針濃度在100 nmol/L以下信號值與濃度呈明顯正相關，到達100 nmol/L后呈飽和趨勢（圖2B）。俘獲探針與檢測探針的不同濃度比例對該方法定量范圍的影響結果表明，當兩者比例為2∶3時， Test ODN濃度在0.78 ～12.5 nmol/L范圍內與響應值呈正相關關系，且響應值較高（圖2C）。

圖2 實驗條件的優化

Fig．2 Optimization of experiment conditions

A． 不同包被條件對響應值的影響 （Effect of different coating conditions on response）; B． 俘獲探針和檢測探針濃度的優化 （Optimization of concentrations of capture probe and detection probe）; C． 俘獲探針和檢測探針最佳比例 （Optimization of concentration ratio of capture probe and detection probe; D. PNPP顯色時間的優化（Optimization of pnitrophenyl phosphate （PNPP） coloration time）。

3.1.3 優化PNPP顯色時間 PNPP顯色時間延長可以增強各濃度標準品下的信號強度，但是對標準曲線的線性影響較大，因此檢測中將顯色時間定為15 min（圖2D）。

3.1.4 優化S1酶用量 S1 核酸酶的用量是影響所建方法的線性范圍和特異性（原形和降解產物的區分）的關鍵因素。S1酶用量過少不能完全去除單鏈檢測探針以及降解產物引起的背景信號，過多則會對結合的雙鏈雜交分子非特異降解，原形ODN的信號值下降明顯，且線性較差。根據優化結果，本研究在Test ODN在40 U/孔的酶量下，可以獲得最優線性范圍（圖3），并具有良好的特異性，能區分原形和降解產物。S1酶對3′N1降解產物的作用更為特異，交叉反應性＜10%，對5′N1降解產物的交叉反應性＜25%（圖4），而生物體內ODN的大部分降解產物均由3′外切核酸酶產生ODN，即以3′端降解產物為主。

圖3 S1酶用量的優化

Fig．3 Optimization of S1 nuclease amount

圖4 Test ODN原形與其3′N1 和5′N1降解產物的區分

Fig．4 Distinction between parent ODN and its 3′N1 and 5′N1degradation products

3.2 生物基質對定量分析的影響

生物樣品中定量分析的難點在于生物基質的干擾效應，常規解決辦法是對樣品進行適當稀釋以降低信噪比，提高響應值。本研究發現，低濃度生物樣品進行稀釋處理會導致靈敏度下降無法檢測，與以ddH2O為基質相比，100%獼猴血漿中同濃度 Test ODN的響應值并未受到影響（圖5），證明ELBA方法不受血漿基質干擾，反義寡核苷酸血漿樣品不需任何樣品前處理可直接應用ELBA方法進行定量分析。

3.3 方法學確證

3.3.1 定量范圍、精密度、準確度 獼猴血漿中配制標準品（12.5， 6.25，3.13，1.56，0.78，0.39，0.20和0.10 nmol/L）制備標準曲線，批間重復5次。隨行配制高（5 nmol/L）、中（0.50 nmol/L）、低（0.15 nmol/L）質控樣品考察精密度和準確度。ELBA方法對Test ODN在獼猴血漿中的定量范圍為0.10～6.25 nmol/L（R2＞0.99）（圖6），較CE方法的靈敏度提高了近1000倍。 5批樣品的批內和批間質控樣品測定結

圖5 生物基質對ODN定量分析的影響

Fig．5 Effect of biological matrix on quantitative analysis of ODN

圖6 血漿中Test ODN定量標準曲線

Fig．6 Standard curve of quantification of Test ODN in plasma by ELBA

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摘 要 “A+H”模式上市公司在關聯方及關聯交易披露方面由于受到企業會計準則、上交所和深交所上市規則以及港交所主板上市規則三重法規的監管且規定內容不盡相同，往往無所適從，本文通過對三項法規關于關聯方及關聯交易分類異同的分析，以供“A+H”模式上市公司參考使用。

關鍵詞 上市公司 關聯方 關聯交易 分類

近年來，越來越多的境內公司赴香港交易所上市，同時也有許多早年在香港上市的H股公司回歸到A股市場。截至2012年底，市場上大約有“A+H”模式上市公司81家（其中深市15家、滬市66家），“A+H”模式在擴大融資渠道、提高市場影響力、開拓國際視野方面發揮了重要作用，但與此同時，作為公眾上市公司，“A+H”模式上市公司也同時受到不同上市地會計準則和監管規則的約束，披露成本大大提高，尤其是在關聯方及關聯交易披露方面，由于不同法律法規的規定內容往往不盡相同，存在一定程度上的差異，導致“A+H”模式上市公司在進行相關數據整理和履行披露義務時往往無所適從或者出現遺漏的情況，輕者影響上市公司聲譽和誠信狀況，重者受到監管機構嚴厲懲戒和譴責，使上市公司陷入“披露危機”。為此，筆者通過對《企業會計準則》、《香港交易所主板上市規則》、《上海證券交易所股票上市規則》、《深圳證券交易所股票上市規則》等法律法規中有關關聯方及關聯交易的表述內容進行深入剖析、研究，求得其中關于關聯方及關聯交易分類異同，以供“A+H”模式上市公司參考使用。

一、關聯交易產生的背景、原因及利弊分析

伴隨著世界各國公司組織形式與治理結構的演變，關聯交易這種交易方式在母子公司、總分公司、其他具有資本紐帶關系的企業之間、以及依托控制、共同控制、重大影響為基礎的企業群中得到廣泛應用，關聯交易金額也非常巨大，在公開披露的2012年年報中，“A+H”模式上市公司華能國際（SH600011/HK902）關聯交易總額179.14億元、東方電氣（SH600875/HK1072）關聯交易總額129.51、中國石化（SH600028/HK386）關聯交易總額達到5，182.06億元。關聯交易在市場經濟條件下產生并存在，但它與市場經濟的基本原則卻不相吻合。按市場經濟原則，一切企業之間的交易都應該在市場競爭的原則下進行，而在關聯交易中由于交易雙方存在各種各樣的關聯關系，有利益上的牽扯，交易并不是在完全公開競爭的條件下進行的。

關聯交易客觀上可能給企業帶來或好或壞的影響。從有利的方面講，交易雙方因存在關聯關系，可以節約大量商業談判等方面的交易成本，并可運用行政的力量保證商業合同的優先執行，從而提高交易效率。從不利的方面講，由于關聯交易方可以運用行政力量撮合交易的進行，從而有可能使交易的價格、方式等在非競爭的條件下出現不公正情況，形成對股東或部分股東權益的侵犯。

二、關聯方關系及其交易披露的意義

隨著我國企業改革持續深入，產權日益多元化，資本市場快速發展，機構投資者及其他投資者隊伍日益壯大，對會計信息的要求日益提高，在這種情況下，投資者更加關心其投資的風險和報酬，他們需要會計信息來幫助其做出決策，正是由于關聯交易的普遍存在，以及它對企業經營狀況有著重要影響，上市公司如果運用關聯交易進行不當的操作會嚴重損害相關利益者的利益，致使上市公司的關聯交易引起廣泛關注。

從會計準則的角度來看，關聯方關系及其交易的披露，有助于會計信息使用者了解企業真實的財務狀況和經營成果，進而影響財務報告使用者對上市公司的評估結果；從上市規則的角度來看，關聯方關系可能對上市公司的經營成果和財務狀況產生影響，關聯方之間可能會發生與非關聯方不會進行的常規交易。在關聯方交易中，也會因各種利益，利用各自存在著的控制和影響關系，使關聯企業相互之間通過轉移定價等不同方式實現利潤的轉移，從而損害交易對方或其他非關聯人的利益，損害正常的社會秩序。

基于上述原因，無論從會計準則還是上市規則的角度出發，完善和健全關聯交易制度，提高上市公司關聯交易信息披露的透明度，保護投資者、債權人的合法權益，準確區別和判斷關聯方交易都是十分必要的，因此，企業會計準則、上交所、深交所、港交所的上市規則和相關指引都對關聯方關系和關聯交易作出了明確規定，盡管規定不盡相同，但是總體原則趨同，都是要求上市公司在進行關聯交易時能夠顧及全體股東的整體利益。

三、關聯方定義及分類分析

關聯方是《企業會計準則》中關于關聯關系的定義，其對于關聯關系的認定是以控制、共同控制或重大影響為前提條件的，《企業會計準則》中關于關聯方的定義適用于所有在中華人民共和國境內設立的企業；中國證監會頒布的《上市公司信息披露管理辦法》以及《上海證券交易所股票上市規則》、《深圳證券交易所股票上市規則》中將這種關聯方稱之為關聯人，其適用范圍為在上交所和深交所上市的公眾公司；《香港交易所主板上市規則》第十四A章中則將這種關系定義為關聯人士，其適用于在香港交易所主板上市的企業。上述法規中關于關聯方關系在定義上的差異只是表象，仔細分析其中對于關聯方的范疇的劃分，可以將其終結歸納為下表：

（二）上交所、深交所股票上市規則對于關聯人的規定

上市公司的關聯人包括關聯法人和關聯自然人，具體如下：

1.直接或者間接控制上市公司的法人或其他組織；

2.由上述第1項直接或者間接控制的除上市公司及其控股子公司以外的法人或其他組織；

3.由上市公司的關聯自然人直接或者間接控制的，或者由關聯自然人擔任董事、高級管理人員的除上市公司及其控股子公司以外的法人或其他組織；

4.持有對上市公司具有重要影響的控股子公司10%以上股份的法人或其他組織 ；

5.持有上市公司5%以上股份的法人或其他組織；

6.直接或間接持有上市公司5%以上股份的自然人；

7.上市公司董事、監事和高級管理人員；

8.第5、6項所述人士的關系密切的家庭成員；

9.第1項的董事、監事和高級管理人員；

10.持有對上市公司具有重要影響的控股子公司10%以上股份的自然人 ；

11.根據與上市公司或者其關聯人簽署的協議或者作出的安排，在協議或者安排生效后，或在未來十二個月內，將具有關聯法人和關聯自然人情形任意情形之一的；

12.過去十二個月內，曾經具有關聯法人和關聯自然人情形任意情形之一的。

（三）港交所主板上市規則對于關聯人士的規定

1.上市發行人的董事、最高行政人員或主要股東；

2.交易日期之前12 個月內曾任上市發行人董事的任何人士；

3.中國發行人的監事；

4.上述第1、2、3、項所述人士的密切家庭成員及其單獨或合計持有30%及以上投票權的公司（包括合同式合營公司）及其子公司；

5.上市發行人的任何關聯人士持有10%及以上表決權的上市發行人任何非全資附屬公司及其子公司。

四、關聯交易定義及分類分析

《企業會計準則》中將關聯方交易定義為關聯方之間轉移資源、勞務或義務的行為。上交所、深交所上市規則中將發生交易的主體界定為上市公司或者其控股子公司與上市公司關聯人之間。香港交易所主板上市規則將交易范疇擴大到“任何交易”，