醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)重點匯總范文

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關(guān)鍵詞：突發(fā)公共衛(wèi)生事件；病例定義；假說

1 突發(fā)公共衛(wèi)生事件的分類

1.1重大傳染病疫情 短時間內(nèi)發(fā)生，傳染范圍廣，出現(xiàn)大量的病死或死亡，其發(fā)病率超過往年水平。例如，青海市2004年發(fā)生的鼠疫疫情，上海1988年發(fā)生的大規(guī)模感染甲型肝炎。

1.2重大食物中毒和職業(yè)中毒事件 是指由于食物被污染或者職業(yè)危害的原因，導(dǎo)致人數(shù)眾多的傷亡中毒事件。2002年在保定市發(fā)生一起苯中毒事件，箱包生產(chǎn)的數(shù)名生產(chǎn)工人出現(xiàn)中毒癥狀，并有6例工人死亡，這就屬于職業(yè)中毒事件。2002年南京發(fā)生一起特大投毒事件，導(dǎo)致395例食物中毒，42例死亡。

1.3群體性不明原因疾病。是指在某一區(qū)域內(nèi)連續(xù)出現(xiàn)相同的臨床表現(xiàn)，短時間內(nèi)不能明確診斷該疾病，同時病例人數(shù)逐漸增多，范圍也在擴大。我國2003年爆發(fā)的非典，發(fā)病之初并不明確病原體，非典傳播速度很快，很多患者都出現(xiàn)相同的臨床癥狀，這起事件就屬于群體不明原因疾病。

1.4新發(fā)傳染性疾病 是指一個國家或地區(qū)新發(fā)生的、新變異的或新傳人的傳染病。世界上新發(fā)現(xiàn)的32種新傳染病中，有半數(shù)左右已經(jīng)在我國出現(xiàn)，新出現(xiàn)的腸道傳染病和不明原因疾病對人類健康構(gòu)成的潛在危險十分嚴重，處理的難度及復(fù)雜程度進一步加大[2-3]。

1.5群體性預(yù)防接種反應(yīng)和群體性藥物反應(yīng) 是指接種疫苗或者服用藥物以后出現(xiàn)異常反應(yīng)，出現(xiàn)該事件可能是由于藥物疫苗存在質(zhì)量問題，或者是人體自身生理過敏反應(yīng)。

1.6重大環(huán)境污染事故 是指化學(xué)品在生產(chǎn)、運輸、使用、廢棄物處理等因管理不當，出現(xiàn)化學(xué)品污染環(huán)境造成人員的傷亡。

1.7自然災(zāi)害 因為自然力引起的設(shè)施破壞、嚴重經(jīng)濟損失、人員傷亡、人的健康狀況及社會衛(wèi)生服務(wù)條件惡化超過了所發(fā)生地區(qū)的所能承受能力的狀況。

1.8核事故和放射事故。是指核泄露、放射物質(zhì)泄露威脅到公眾的生命健康。

2 突發(fā)公共衛(wèi)生事件的現(xiàn)場調(diào)查步驟

2.1初步調(diào)查 首先要進行核實診斷，有些突發(fā)事件的臨床癥狀是以前未曾出現(xiàn)過的，情況較為特殊。事故發(fā)生后要第一時間到現(xiàn)場了解患者的情況，主要了解患者的臨床癥狀、體征，還有現(xiàn)場的環(huán)境情況，本地的流行病史，患者的年齡、職業(yè)、人群預(yù)防接種情況，患者的各項檢查指標。不同類型的突發(fā)事件核實診斷的方法有差異，要根據(jù)具體情況做調(diào)整。同時對周圍居民、群眾進行調(diào)查，了解發(fā)病的情況，當?shù)鼐用駥Νh(huán)境比較熟悉有助于工作人員進一步了解事件發(fā)生的原因。登記在現(xiàn)場群眾的個人資料，如果該事件屬于傳染性疾病，可以盡早對可疑患者進行診斷治療。突發(fā)事件一般比較突然，現(xiàn)場群眾和附近居民心理會恐慌，相關(guān)工作人員要對群眾進行心理疏導(dǎo)，幫助有需要心理輔助的人員，同時在場有專業(yè)人士回答群眾的疑惑，避免群眾出現(xiàn)盲目的恐慌心理，群眾的積極配合有利于突發(fā)事件的控制。

2.2收集病例及相關(guān)資料 登記患者的基本資料，姓名、年齡、居住地、民族、聯(lián)系方式，重點了解患者的發(fā)病情況、臨床癥狀、發(fā)病時間。還包括當?shù)氐貐^(qū)單位靜態(tài)人口資料，人口總數(shù)，對于流動人口較大的區(qū)域要了解爆發(fā)前的人口數(shù)。比較發(fā)病者和不發(fā)病者相關(guān)因素有何不同，從中可以尋找發(fā)病的原因。

2.3建立病例定義 通過前面的調(diào)查了解，可以比較清楚發(fā)病患者有何臨床特征，建立準確的病例定義有利于發(fā)現(xiàn)疑似患者，有利于疾病的控制。病例定義主要包括兩個方面，一個是描述突發(fā)事件的信息，包括時間、人群、地區(qū)分布、具體的地理環(huán)境。另一個是描述患者的癥狀、體征、實驗室檢測指標。定義的語言盡可能的簡單、方便應(yīng)用，對于不明原因的疾病要避免武斷的病例定義。建立病例定義是可以參考一下幾點：①臨床癥狀明顯和不明顯的比例是多少；②是否有比較明顯的臨床癥狀或體征，可以和其他疾病有區(qū)別的；③哪種診斷方法最簡單、實用，例如微生物學(xué)、化學(xué)分離鑒定、血清學(xué)方法等[3]。

2.4提出假說 根據(jù)事件資料的匯總，對患者的發(fā)病特征、現(xiàn)場的環(huán)境，再結(jié)合文獻回顧性分析，提出突發(fā)衛(wèi)生事件的原因。例如該地區(qū)發(fā)生大規(guī)模的傳染性疾病，可以假設(shè)這一傳染病是由某種微生物所引起的。經(jīng)過初步調(diào)查對事件的發(fā)生還不是很深入了解，提出假說可以為進一步研究指明方向。

2.5深入調(diào)查，驗證假說 觀察現(xiàn)場環(huán)境，對可以傳播的方式、傳播因素進行現(xiàn)場勘查，以了解疾病暴發(fā)的原因。分析患者的各項檢測指標如血清學(xué)、病原微生物。例如，假說提出本次突發(fā)衛(wèi)生事件是由流感病毒傳染所引起的，研究員可以通過采集患者的呼吸道樣本，對采集樣本進行病毒學(xué)實驗鑒定，最后可以判斷患者是否是感染流感病毒。

2.6采取控制措施 特別是針對傳染性疾病，要控制傳染源、傳播途徑和易感人群[4]。對于化學(xué)污染等情況，要盡快的清楚污染物，保護水源，已經(jīng)被污染的水源要實時監(jiān)控禁止居民使用污染水，防治再次發(fā)生中毒事件。同時要加強群眾對突發(fā)公共衛(wèi)生事件的認識。

3 完善現(xiàn)場調(diào)查檢驗方法

為了完整、準確評價流行爆發(fā)的流行特征，需要尋找更多的病例，更加準確的評價一個新的檢驗方法的檢出病例的技術(shù)，提高病例鑒別的敏感性和特異性。后續(xù)，研發(fā)診斷試劑盒、檢測儀器，可以更加高效的診斷。新發(fā)傳染性疾病可能是由于病毒變異所引起的，根據(jù)臨床癥狀不能很準確的診斷疾病，近年來興起分子生物學(xué)診斷試劑盒。其原理是根據(jù)病毒特異性抗體，生產(chǎn)能特異性檢測該抗體的試劑盒，還有一種方法是根據(jù)病毒的特異性核酸序列，研發(fā)檢測序列的試劑盒。傳染病的流行是和季節(jié)有關(guān)的，下次疫情再次發(fā)生的時候診斷試劑可以及時對疾病進行監(jiān)控，對感染患者盡早治療，控制疾病大流行。分子生物學(xué)診斷和臨床癥狀診斷想比較，分子生物學(xué)診斷特異性更好，診斷時間快，準確性高。

參考文獻：

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[2]谷亞紅，張智斌，李長紅.學(xué)校突發(fā)公共衛(wèi)生事件研究綜述[J].疾病控制，2011，8（36）：129-131.

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[關(guān)鍵詞] 肺結(jié)核；PCR；抗酸染色法；診斷

[中圖分類號] R4 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2016）05（c）-0077-02

[Abstract] Objective To compare the accuracy of PCR technique and acid-fast staining in diagnosis of pulmonary tuberculosis pathology. Methods 60 cases of patients suspected with pulmonary tuberculosis treated from March 2014 to October 2015 were selected， and the lung alveolar fluid and lesion tissue strips were obtained by the ultrasonic fiber bronchoscope， and then sent for PCR technique and acid-fast staining. Results Of the 43 cases with pulmonary tuberculosis， the positive rate of PCR technique is superior to that of acid-fast staining （83.72% vs 41.86%）， and the difference had statistical significance， （χ2=16.125 0， P

[Key words] Pulmonary tuberculosis； PCR； Acid-fast staining； Diagnosis

肺結(jié)核病是有結(jié)核分枝桿菌引起的一種肺部感染性疾病，該病傳播性強，致殘率高，嚴重影響人民健康，是我國重點防治疾病之一[1]。在肺結(jié)核病的治療中，盡早治療可避免肺功能下降，而目前隨著結(jié)核桿菌對耐藥性的增強，在臨床上如何建立快速、準確的結(jié)核分支桿菌菌種的鑒別，根據(jù)檢測結(jié)果選擇敏感性藥物，是治療和控制結(jié)核病的必要前提[2]。PCR技術(shù)、抗酸染色是肺結(jié)核病常用診斷方法，該研究方便選擇2014年3月―2015年10月該院收治的60例疑似肺結(jié)核病患者，觀察和比較上述兩者優(yōu)缺點，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選擇2014年3月―2015年10月該院收治的60例疑似肺結(jié)核病患者，其中男38例，女22例，年齡16～76歲，平均年齡（39.4±8.9）歲，經(jīng)臨床病史、影像學(xué)分析及病理組織學(xué)檢測，最終確診為肺結(jié)核病43例，非肺結(jié)核病患者17例，包括彌漫性肺炎12例，肺癌4例，肺氣腫3例。該研究經(jīng)該院倫理委員會批準，所有納入研究者均簽署知情同意書。執(zhí)行操作時無一例退出。

1.2 方法

在超聲纖維支氣管鏡下，尋找病灶，用細針先注入10～20 mL生理鹽水，再回抽獲得肺泡灌洗液；用切割活檢針獲得條狀組織，將后者沖洗后石蠟包埋?？顾崛旧ǎ簩⒉糠址闻莨嘞匆弘x心處理，或?qū)@得的石蠟切片脫蠟處理，初染用石炭酸品紅，在70 ℃下孵育30 min，酒精脫色，復(fù)染用0.5%亞甲藍，水洗后用無水酒精脫水，二甲苯透明封固，放置于高倍鏡下觀察。于巨噬細胞周圍發(fā)現(xiàn)微細桿狀紅染現(xiàn)象則為陽性。PCR法檢測：選用7900實時熒光定量PCR基因擴增儀，由PCR熱循環(huán)儀、熒光檢測系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)及反應(yīng)板組成，由新加坡 LIFF THECHNOLOGIES HOLDINGS PTE LTD 生產(chǎn)，公司地址Block 33，Marsiling Industrial Estate Road3，#05-03，Singapore739256，英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司，國食藥監(jiān)械（進）字2010第3401880號，先將獲得的肺泡灌洗液與2倍4%NaOH溶液混合，或?qū)⑹炃衅撓?、液化后再與2倍4%NaOH溶液混合。將上述混合液離心、沉淀，加入50 μL 的DNA提取液混勻，100 ℃煮沸10 min，1.2×104轉(zhuǎn)離心10 min，取2 μL上清液，用于基因擴增。預(yù)變性93 ℃2 min，變性93 ℃ 45sec，退火、延伸55 ℃120sec，上述過程共執(zhí)行30個循環(huán)。CT值

1.3 統(tǒng)計方法

所有數(shù)據(jù)均采用SAS9.2統(tǒng)計學(xué)軟件處理。兩種檢測方法準確性比較采用%表示，組間比較采用χ2檢驗。P

2 結(jié)果

最終確診為肺結(jié)核病43例中，PCR法結(jié)果陽性為83.72%高于抗酸染色法結(jié)果陽性為41.86%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P

3 討論

細菌培養(yǎng)法是結(jié)核分枝桿菌確診的金指標，但其耗時較長即便是快速培養(yǎng)，也需要7～10 d[3]。抗酸染色法具有簡便、廉價、對設(shè)備要求不高等特點，但該法檢出率較低。趙晶等[4]報道在88份痰標本中僅有20例顯示抗酸染色陽性，這表明抗酸染色敏感性較差。分子生物學(xué)檢查是近年來發(fā)展起來的快速、準確診斷技術(shù)，常見的檢測方法包括聚合酶鏈式反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析、反向斑點雜交法、、聚合酶鏈式反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)[5]等，但上述步驟繁瑣、容易產(chǎn)生污染，故不利于臨床廣泛應(yīng)用[6]。熒光PCR技術(shù)是融合了核酸擴增技術(shù)、DNA雜交技術(shù)和光譜技術(shù)，首先將特異性目的基因片段在數(shù)小時內(nèi)擴增數(shù)百萬倍[7]，然后利用特異性探針，對目的基因片段進行識別，這就大大提高了診斷的敏感性，在細菌培養(yǎng)困難較大的案例中其診斷價值更為突出。此外，該研究采用標本是通過超聲纖維支氣管鏡獲得的病灶組織條及肺泡灌洗液，因直接取材于病灶處及周圍支氣管肺泡，肺泡灌洗液中的細菌含量較高，污染幾率低，該標本檢測的優(yōu)勢還包括適用于在痰培養(yǎng)結(jié)果為陰性但仍有證據(jù)懷疑為肺結(jié)核案例，肺結(jié)核與其他類肺部病變及無痰者[8]。

該研究結(jié)果顯示60例患者中PCR法診斷符合率88.33%優(yōu)于抗酸染色法58.33%，43例肺結(jié)核患者匯總PCR的檢出率83.72%，略低于吳國蘭[8]報道的86.7%，但差別不到。該研究結(jié)果提示與抗酸染色法相比，PCR技術(shù)的檢出率較高，可在肺結(jié)核早期診斷與治療中發(fā)揮更大作用。另外，PCR法的診斷仍不能達到100%，對其漏診率的分析對PCR法的改進及輔助臨床診斷有重要意義，值得進一步研究。

[參考文獻]

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