藥品微生物研究范文
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關鍵詞：食品安全 微生物檢驗 內容 質量 必要性
中圖分類號：TS207.4 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5336（2013）22-0010-02
近年來頻發的食品安全事故使得人們越來越關注食品安全與健康，食品安全監測備受人們關注。而在食品安全的相關項目中，微生物及其衍生的各種霉素對食品的污染最受人們的關注，食品微生物檢驗也順應潮流發展而備受人們關注。在食品的生產過程中，微生物會隨著食品的生產、加工、包裝、運輸、儲存等環節進入到食品中去，進而使食品在短期內變質，失去使用價值，甚至還會對人體造成一定的傷害，所以說，必須進行嚴格的食品微生物檢驗，確保食品安全。
1 食品微生物檢驗的基本內容
隨著科學技術的快速發展，食品微生物檢驗技術越來越先進了，檢驗步驟也越來越簡化了，目前常用的檢驗技術主要有：電阻抗法、核酸探針技術、PCR技術、免疫酶技術等。而檢驗的內容則主要是食品樣品中的指示菌和致病菌。
（1）指示菌。檢驗食品中的菌落總數和大腸菌群。菌落總數表明食品的受污染程度，從而得出食品的保質期是多長。而大腸菌群多產生于糞便中，因此也可以將其作為食品受污染程度的指標之一。飲用水和食品中的大腸菌群的定義是不一樣的，在飲用水中，大腸菌群是指1000ml飲用水中所檢驗出來的菌群數量；而在食品中則指100ml中檢驗出來的菌群數量。通過檢驗食品中的菌落總數和大腸菌群，可以為食品的安全質量做出科學評價。
（2）致病菌。在食品檢驗中，相關法律法規明確規定了霉菌毒素、酵母菌、沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌的含量，一旦超過就會危及到人體的健康。比如說：食品中的霉菌毒素超標，那么就有可能帶來腹瀉、嘔吐等不良反應，帶來食物中毒現象。
2 食品微生物檢驗的必要性
食品微生物檢驗是保證食品安全的一道重要門檻，其檢驗質量直接關系到我國食品安全監測的工作效果，關系到國計民生。一般而言，食品生產出來之后，就要以最快的速度流入市場，使消費者得到最為新鮮的食品。因此，食品微生物檢驗必須快速、準確，盡快得出檢驗結果，從而確定食品安全是否達標，對預防食源性疾病、提高食品質量起到重要作用，維護老百姓的身心健康。
如果沒有食品微生物檢驗，市場上就很有可能出現許多不合格的食品，在人們食用后帶來嚴重的不良社會影響。通過食品微生物檢驗，相關人員可以獲知食品的清潔指數以及受污染程度，確定食品是否安全，確定食品的安全保質期，從而使人們在食品變質前使用，既讓老百姓吃到健康食品，又減少經濟損失。因為，一旦某種不合格的食品大量流入市場之后，在造成嚴重的食品中毒、致病等食品安全事故之后，就會導致人心惶惶，流入市場的食品也必須銷毀，帶來了嚴重的社會影響和經濟損失。所以說，食品微生物檢驗對提高食品質量、減少經濟損失起到重要作用。
如果沒有食品微生物檢驗，當發生食品安全事故后，醫護人員無法迅速得出病因，不利于患者迅速恢復健康。而食品微生物檢驗的數據資料可以成為衛生學上的評價依據，所以說，進行食品微生物檢驗是非常有必要的。而《食品衛生檢驗方法微生物學部分》則明確提出了微生物檢驗中的各項指標要求，這推動了微生物檢驗的標準化和規范化。進行食品微生物檢驗時，嚴格按照有關法律法規的要求進行檢驗，從而有效減少誤差，提高檢驗數據的正確性，更好的進行食品安全監測工作，為老百姓帶來放心食品，促進社會穩定。
沒有食品微生物檢驗，食品安全就會受到極大威脅，而頻繁發生的食品安全事故又會給人們帶來焦慮感，不利于社會穩定，進而不利于社會主義建設的健康發展。我們都知道，食品在生產、加工、包裝、運輸、儲存等環節中極容易受到細菌的污染，影響到老百姓的身體健康。而食品微生物檢驗則正好可以得出食品的受污染程度，從而為食品的衛生管理提供合理化建議。而且，通過微生物檢驗，我們還可以獲知食品是在哪些生產環節中遭受細菌污染的，從而改善食品生產的環境，生產出更多合格的食品，減少經濟損失，保證老百姓的身體健康。
食品安全關系到國計民生，沒有食品安全，老百姓的正常生活就會受到極大影響，影響社會穩定，進而不利于我國社會主義建設的可持續發展。食品微生物檢驗為食品安全工作提供必要的科學依據，科學評價食品衛生質量，有助于保證老百姓的飲食衛生安全。
3 食品微生物檢驗的發展
國家越來越重視食品安全，而食品微生物檢驗也在這種形勢下迅速發展起來，出現了越來越多的先進檢驗技術，檢驗的質量也越來越高。比如說：分子生物學技術、電阻抗法等技術就是食品微生物檢驗的新方法。在未來，微生物檢驗將會變得高效、快速、精確，檢驗的步驟將會逐漸簡化，檢驗質量受自然環境的影響也會越來越小。比如說：全自動微生物分析檢驗系統是一種非常高效的檢驗系統，是未來微生物檢驗技術的一個重要發展方向。而檢驗條件也將隨著檢驗技術而發展，標準化和規范化的檢驗條件，提高檢驗的精確度和靈敏度。
4 結語
食品微生物檢驗是食品安全監測中的一個重要環節，它對保證食品安全起到重要作用，對促進社會穩定、減少經濟損失起到重要作用。只有不斷運用先進科學技術成果來提高檢驗的質量和效率，才能不斷提高食品安全檢驗效果。而食品微生物檢驗質量的影響因素多，檢驗人員必須以高度責任感和使命感做好檢驗工作，提高檢驗的質量，為食品安全提供科學依據。
參考文獻
[1]閆莉莉.淺談食品微生物檢驗體系[J].大家健康（下旬刊），2013，7（10）.
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關鍵詞：微生物限度；無菌檢查；方法驗證；影響因素；微生物檢測
微生物學檢查方法包括微生物限度檢查法和無菌檢查法。微生物限度檢查法是檢查非規定滅菌制劑及原輔料受微生物污染程度，包括細菌、霉菌等菌種的數目及控制菌檢查。無菌檢查法是檢查藥典要求的無菌藥品、原輔料等是否無菌。如外用制劑須檢查和驗證銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌；若制劑含藥材原粉等， 還需檢查和驗證大腸菌群和（或） 沙門菌。通過不同給藥途徑，因此臨床給藥途徑在微生物限度檢查和方法驗證中有著舉足輕重的地位。
1 方法驗證的模式及影響因素
1.1 培養基的無菌檢查及菌株準備 使用時應仔細觀察培養基碟子， 檢查是否有微生物污染或干燥收縮。經過預培養的培養基按照相應測定的微生物， 選擇標準菌株（不超過5代） 試驗?？刂凭€應設定對照組， 以檢測其專屬性。
1.2 微生物方法驗證的內容
1.2.1 細菌、霉菌、酵母菌計數方法的驗證內容 至少進行3次平行試驗， 分別計算每次各試驗菌的回收率。驗證菌株為大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、枯草桿菌。驗證方法分試驗組、菌液組、稀釋劑對照組以及供試品對照組，方法如下：試驗組：采用平皿法計數時，每株試驗菌均制備2個平皿；也可采用薄膜過濾法計數。菌液組：應檢測添加的試驗菌數。稀釋劑對照組：檢查供試液制備時，微生物受污染程度，采用薄膜過濾法計算其菌數。供試品對照組：定量取供試液，采用薄膜過濾法計算其供試品本底菌數。無菌檢查可采用：①薄膜過濾法：采用微孔濾膜攔截細菌，去除可溶性成分。驗證重點：確定濾膜的適用性、沖洗方法以及沖洗液用量。②中和法：中和劑應對微生物無毒性，與抑菌性成分結合后的產物，也應對微生物無毒性。驗證重點：確定中和劑有效，并證明對污染微生物無毒性。
1.2.2 控制菌檢查法的驗證內容 控制菌檢查包括大腸菌群、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、沙門菌、銅綠假單胞菌和梭菌檢查。試驗菌株嚴格按照規定檢查的控制菌，選取相應的驗證菌株。方法如下：試驗組：按照相應控制菌檢查法進行檢查。采用薄膜過濾法時，添加試驗菌應選在最后一次沖洗液后， 過濾后方可注入培養基中。對照組：驗證該檢查方法的專屬性。
1.2.3 細菌、霉菌、酵母菌計數方法的驗證結果判斷指標 根據上述試驗結果，可計算供試品組的菌回收率、稀釋劑對照組的菌回收率。如果任意一次試驗中試驗組的菌回收率，低于70%，應采用培養基稀釋法、薄膜過濾法等方法消除供試品的抑菌活性，并重新驗證。
1.2.4 控制菌方法驗證的結果判斷 按《中國藥典》2005年版規定，陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。如果試驗組檢出試驗菌，則按照相應方法進行控制菌檢查。如果試驗組未檢出，則需重新驗證。控制菌檢查還應設有專屬性試驗。驗證試驗及結果的判斷：①目標菌陽性對照管菌和供試品加目標菌管生長良好；②陰性對照管以及陰性菌對照必須無菌生長。如果上述試驗成立，表示可按照該方法進行該品種的控制菌檢查。
1.3 特殊供試品的制備 由于供試品本身的特性，可能會產生假陰性。在正常生產過程中，利用供試品與微生物的差異，消除供試品對藥品中微生物的影響，從而準確檢測藥品中微生物的真實含量，是較為普遍使用的方法。具體包括：①培養基稀釋法：取規定量供試品/供試液，加至培養基中，使單位體積內的供試品濃度稀釋至無明顯抑菌作用。適用范圍：不能使用薄膜過濾法，抑菌活性較弱的樣品。驗證重點：把握好培養基增加量與供試品/供試液不顯抑菌活性的關系。②離心沉淀法：利用沉降系數差異除去藥渣以及含抑菌活性的部分。適用范圍：不能采用薄膜過濾等方法的樣品。驗證重點：設置有效離心率，確定能將藥渣、抑菌部分除去。③薄膜過濾法：采用微孔濾膜攔截細菌，去除可溶性成分。④中和法：中和劑應對微生物無毒性，與抑菌性成分結合后的產物，也應對微生物無毒性。
2 微生物檢查方法驗證的難點問題
人們對藥品生產、保存和使用過程中，對于可能出現的微生物污染問題進行了大量的研究考察。很多研究資料表明[1，2]：藥品中污染的微生物數量以及微生物種類有不確定性，在藥品生產環節中， 微生物污染存在著隨機性。因此，為了監控藥品生產過程中的微生物污染。所有的藥品必須在安全性檢查后，才能應用于臨床。無論是無抑菌性藥物還是抑菌性藥物，都要進行微生物限度檢查， 特別是某些微生物在一定環境下可能受到損傷， 但當服用至人體后， 條件適宜時仍可生長繁殖，破壞人體健康。抑菌藥物內微生物能夠對人體健康造成危害的情況必須警惕， 因此必須對抑菌性藥物進行微生物限度檢查，但由于其本身的抑菌作用， 這嚴重影響了微生物的檢出。
3討論
藥品微生物限度檢查方法驗證工作是錯綜復雜的過程，控制不當很難達到驗證要求以及預想的試驗效果。嚴格按照操作規范操作， 盡量避免試驗過程中的誤差。
參考文獻：
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關鍵詞：高職；微生物學及檢驗技術；教學改革
中圖分類號：G712 文獻標識碼：A 文章編號：1672-5727（2012）09-0032-02
《微生物學及檢驗技術》是高職院校生物食品類專業的重要專業基礎課程之一，是一門融基礎微生物理論和實踐操作技能于一體的課程。2010年，我院生物類專業實現了大類招生，統一了生物類各專業的相關專業基礎課程，《微生物學及檢驗技術》課程同時面向生物技術及應用、食品營養與檢測、生物制藥三大專業的全體學生，旨在為學生對農產品、食品及藥品檢測等后續課程的學習，考取食品、藥品檢驗工等職業資格證書，為從事食品藥品生產、檢驗等崗位工作及日后發展奠定良好的基礎。但該課程現有的教材體系都是按傳統學科知識體系的框架編排的，教學過程中雖然加強了實踐技能的培養，但理論教學與實踐相脫離，難以充分發揮學生的主觀能動性，從而使培養的學生操作技能不強，職業素質不高。因此，如何使該課程的教學目標與社會的職業需求建立起有機聯系，開展與實際操作技能有機結合的“教學做”一體化教學和行動導向的課程項目化教學，就成為該門課程研究和探索的重要內容。筆者擬主要結合專業培養目標，從《微生物學及檢驗技術》這門課程的設計理念、課程教學目標、教學內容設計和教學方法等方面，探討該課程的項目化教學改革，以期使所培養的學生能熟練掌握微生物的操作技能，為將來從事微生物檢測工作奠定良好的職業基礎。
課程設計理念
將整體化的職業分析作為教學設計的基礎，構建突出職業能力培養的課程培養體系。根據畢業生反饋和企業調研等方式對微生物檢測崗位進行分析，確定該崗位的典型工作任務，在此基礎上明確完成相關工作任務所需要的知識、能力與素質，以行動導向完成課程內容的整體項目化設計。
在具體的課程設計過程中，按照理論與實踐一體化的教學原則和要求進行課程教學內容的編排，打破原有學科體系教材《微生物學》的章節界限，整合實用性教學內容，將技能教學內容以項目的形式組成教學單元，將需要的每部分理論知識點和技能加以組合，以微生物培養和檢驗技能為主線，將《微生物學》學科體系的理論知識融入微生物的各項操作任務之中，確定教學內容，設計實訓項目。通過由簡單到復雜，由基礎到綜合的項目工作任務的完成，培養學生具體的實踐操作能力，使其掌握微生物檢驗的技巧與方法，并在此過程中培養學生處理和解決實際工作問題的能力。
課程教學目標
《微生物學及檢驗技術》課程參照食品、藥品檢驗工等職業資格要求和學生將來從事食品藥品生產、檢驗等崗位工作的行業規范標準要求，實現職業技能培養目標。具體知識目標、技能目標、態度目標如表1所示。
課程內容設計
課程內容設計以具體的工作項目為載體，以典型工作任務整合課程的理論與實踐，增強學生的職業觀念，在完成項目工作任務的過程中掌握職業崗位（群）技能。結合認知規律，每個教學項目按照從簡單到復雜，從易到難的循序漸進的方法進行課程內容的構建。教學項目的安排要具有代表性、覆蓋性、典型性。第一個項目主要訓練、培養學生掌握微生物的基本理論知識和基本操作技能，后面三個項目主要根據企業微生物檢驗崗位工作任務要求，以某一類食品為項目載體，培養學生熟練掌握企業常檢微生物的檢驗技術，熟悉相關標準，具備良好的微生物檢驗技能和職業素質。具體的教學項目設計如表2所示。
行動導向教學模式的改革實踐
在具體教學過程中實現“教中學、學中做，學做結合”一體化教學，以能力訓練為中心，以能力培養為主線，側重于培養學生的職業能力。積極推行“學生為主體、教師為主導、項目為載體”的教學模式。對原有教材體系中偏重理論知識，缺少可操作性和實用性的教學內容進行摒棄，探索項目課程設計教案，以能力訓練方式將要用到的學科理論知識融入學習項目中，使學生了解微生物檢測崗位典型的工作內容和形式。通過項目工作任務的完成，實現學生實訓環節，培養學生具體的實踐操作能力、處理和解決實際工作問題的能力。每個項目均以“資訊、決策、計劃、實施、檢查、評價”六步法進行教學實施，具體如表3所示。
《微生物學及檢驗技術》是一門基礎性、應用性、實踐性都很強的課程，根據人才培養方案中的微生物檢測崗位的職能要求選擇和設計教學實訓項目，對傳統教學中理論學習與技能訓練割裂的教學內容重新整合，進行課程項目化教學改革與實踐，可以大大激發學生學習的積極性。但在教學改革過程中，也出現了一些新的問題，如在項目實施過程中，因微生物培養特性需要連續幾天才能完成某個微生物指標的檢驗，這就需要在制定人才培養方案的過程中，注意根據課程的要求安排教學進程。另外，因學生人數較多，教師在操作指導上不能同時兼顧所有的學生，因此，需要在日后的教學實踐中不斷探索，使所培養的學生能正確掌握微生物的操作技能和檢驗技術。
參考文獻：
[1]包永華，葉素丹.高職《食品標準與法規》課程設計初探[J].職業教育研究，2011（5）：35-36.
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[3]秦春娥，楊輝德.高職微生物課程行動導向教學模式探索與實踐[J].職業教育研究，2010（3）：27-28.
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關鍵詞：教學目標；中職學校；微生物；實踐教學
在日常教學中，教學目標的制訂是非常關鍵的一環。尤其在實踐教學中，如果沒有目標，就如航海時沒有燈塔，很容易迷失了方，向。因為教學目標在教學活動中處于核心位置，它決定著教學行為，不僅是教學的出發點，而且是教學的歸屬，同時還是教學評價的依據，它既有定向功能，又有調控功能。教學目標是教師的主觀愿望和客觀教學實際的統一。只有依據課程標準，制訂符合實際的教學目標，才能實現教學的預期效果。這樣的教學目標能夠發揮其功能性，是有效的教學目標，才能夠提高教學活動的實效性。
為了突出職業教育課程的邏輯核心是“工作實踐”，強化“以實踐為導向，以服務為宗旨，以職業能力為本位，以職業實踐為主線”的職教理念，實現培養目標與社會對人才需求的對接，提高教學的有效性，我們以微生物課程為突破口，嘗試從以下幾個方面制訂微生物實踐教學目標：了解學生，了解企業，進行課程分析。具體過程如下：
一、了解學生的特點和實習、工作情況
在新課程下要制訂恰當的教學目標，了解學生是非常重要的。就我們中職學校而言，學習對象為中職學生，要制訂適合學生的教學內容和培養目標，我們首先要了解中職學生的特點。中職學生是指正在接受中等職業技術教育的學生，其年齡一般在15～18歲之間。其年齡正處在青年的早期，這時學生的生理發育已趨于成熟，而心理上的成熟度卻遠未跟上，與一般高中生相比，其心理也有一定差異。一般來說，他們中的一部分人考不上普通高中，在家長督促下被迫去上中職學校，這就造成這些人在心理方面缺乏自信。由于學習成績不理想，他們往往覺得低人一等，極易自暴自棄。在學習上，他們一方面對一般的學習生活沒有興趣，厭學情緒明顯；另一方面在學習上也易產生畏難情緒，尤其是難度較大的專業課，常常使他們無所適從，產生畏懼心理。然而，中職生的思維能力發展很迅速。他們在行為特點上有個明顯的長項，就是喜歡實際操作，喜歡動手。雖然他們厭學文化理論課，但對于實踐課、實驗課以及其他需要實際操作的課程，往往興趣濃厚，而這正是中職學校學生適應社會市場需求的必備條件。如何因勢利導，進一步加強中職生實際操作技能的培養，是中職課改的重要任務。
其次，作為中職教師的我們，更要積極了解學生的實習、工作情況，以使教學目標制訂得更具針對性和實效性。我校學生畢業后可以在醫藥、食品、化妝品等行業以及醫院中西藥房、化驗室、藥品檢驗部門和衛生防疫部門從事相關行業的生產、流通、銷售以及藥品的調劑、化驗等崗位工作。通過走訪、座談、問卷、企業實踐等方法，對廣州白云山天心制藥股份有限公司、廣州白云山明興制藥有限公司、荔灣區中醫醫院、廣州百山制藥有限公司等單位進行了了解。通過了解近五年我校某些中職實習生、畢業學生的實習和工作情況發現，學校與企業合作不足，課程內容與實際工作有一定的距離。因此，我們需要通過教學改革，完善微生物課程的教學目標，更好地確定微生物課程的實際應用。
二、了解用人單位對學生的要求
為了更好地制訂微生物實踐教學目標，我們要主動了解用人單位對學生的要求。學生是學習的主體，脫離學生實際的教學目標是沒有任何實用價值的。因此，目標的制訂要適合學生，適應社會的需要。一般而言，大綱和教材都是靜態的，往往幾年不變，而社會發展卻是動態的，可以說教材內容對時代進步來說總是滯后的。在制訂教學目標時應當考慮到這一點，適當地根據社會需要，充實必要的內容。為此，我們通過走訪、座談、問卷、企業實踐等方法，對廣州潘高壽藥業股份有限公司、廣州百山制藥有限公司、廣東粵興醫藥有限公司、廣州天賜高新材料股份有限公司、廣州星群(藥業)股份有限公司、荔灣區中醫醫院、深圳市龍崗區南灣人民醫院、廣州白云山明興制藥有限公司、廣州白云山光華制藥有限公司等相關用人單位進行調研。通過企業反映發現，職業學校人才培養的效果與企業需求之間存在著差距，主要表現為學生的專業知識不夠扎實，實際操作能力較低；知識面窄，學習能力、分析和解決問題的能力薄弱；團隊協作精神、吃苦耐勞、個人道德行為欠佳等。造成這樣的差距的原因是多方面的，其中職業學校的課程與企業的工作實際脫節是一個重要的方面。這讓我們深深體會到教學改革的迫切性。
三、了解微生物課程的開設情況
不同教材有不同的特點，不同的教學內容也有不同的教學要求。因此，我們要了解教材、吃透教材，把握編者意圖，順著編者思路去設計教學目標，要根據教學內容的實際情況去考慮目標的側重點。如，我們通過走訪、問卷和上互聯網搜索資料等方法，對廣東食品藥品職業學院、廣州衛生學校等相關學校進行調研，從而了解到相關學校的專業設置、微生物課程的開設情況、教材的選用情況、實踐(實訓)教學的組織和設置、實踐(實訓)設備、技能競賽的開展情況等，從而有助于我們更好地組織實踐教學。
四、確定微生物實踐教學的內容和學生職業能力培養的目標
職業學校應緊密結合行業發展，培養與企業需求相匹配的專業技術人才。以廣州市醫藥職業學校為例，微生物實踐教學目標應結合我校近兩年來新的專業設置(由原來的藥物制劑、中藥藥劑、藥品營銷、藥物分析檢驗、中藥營銷、生物技術制藥、食品化妝品檢驗、制藥設備維護、商務英語等專業改為制藥技術、中藥制藥、藥劑專業、藥品食品檢驗、中藥專業、生物技術制藥、制藥設備維修、商務英語等專業)，結合專業的課程設置、專業就業方向和企業的需要。根據上述原則，現把我校涉及微生物課程的六大專業分為三大類。其中第一類主要是制藥技術、中藥藥劑、藥劑專業、中藥專業等，第二類主要是藥品食品檢驗專業，第三類主要是生物技術制藥專業。通過把專業分類，更好、更恰當地確訂微生物實踐教學的內容和能力培養的目標，使學生更好地適應社會市場的需求。最后，通過技術人員、專家、教師們討論，歸納出我校微生物課程的典型工作任務主要為微生物技術基本要求、安全要求與實驗常用設備的操作；微生物形態觀察技術；微生物人工培養技術；菌種的選育及保藏技術；微生物分布檢測技術；微生物代謝產物的測定技術；藥物體外抗菌試驗；藥品衛生檢驗技術；常用血清學試驗等。
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【關鍵詞】 硝酸咪康唑搽劑；微生物限度檢查；方法學驗證
Abstract:Objective To establish a method of microbial limit test for miconazole nitrate liniment. Methods Centrifugal sedimentation and culture medium diluted method were used to validate the accuracy and feasibility of microbial limit test.Results The recovery of bacteria， yeast and mould were above 70%. P. aeruginosa and S.aureus were positive and Gramnegative organisms were negative. Conclusions Membrane filtration and the polysorbate 80 sodium chloridepeptone buffer can be used to test the total viable aerobic count and specifiedorganisms (include S. aureus and P. aeruginosa) for miconazole nitrate liniment.
Key words:miconazole nitrate liniment；microbial limit test；method validation
微生物限度檢查法是檢查非規定制劑及原料、輔料受微生物污染程度的方法，檢查項目包括細菌數、真菌數、酵母菌數及控制菌檢查［1］。但具有抑菌成分的藥品由于其抑菌活性的干擾，常規檢查結果不能真實地反映出藥品中污染微生物的情況，必須先消除供試品中的抑菌活性，再根據《中國藥典》規定的方法進行檢查，并必須對所采取的檢查方法進行驗證，以確認抑菌活性的消除和檢查方法的可靠性。具有抑菌作用的藥品，每個品種抑菌效果不同，因此適合各個品種的微生物限度檢查法也不同。
作者曾用常規法、培養基稀釋法及薄膜過濾法（用pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗）對硝酸咪康唑搽劑進行微生物限度檢查，結果均不能達到藥典要求。吐溫80是親水性表面活性劑，具有增溶作用，因此本文選擇用薄膜過濾法聯用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖溶液做沖洗劑檢查該藥品的細菌、真菌、酵母菌數和控制菌，結果滿意，可為同類藥品的微生物限度檢查法提供科學依據。
1材料
1.1菌種大腸埃希菌(Escherichia coli)［CMCC(B) 44 102］， 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)［CMCC(B) 26 003］， 枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)［CMCC（B）63 501］， 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)［CMCC(B) 26 003］，銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）［CMCC(B)10 104］白色念珠菌(Candida albicans)［CMCC(F) 980011］， 黑曲霉(Asperg illus niger)［CMCC(F) 98003］，由廣東生物研究所提供，菌種代數均為第3代。
1.2培養基及試劑pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液、0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液、營養肉湯、改良馬丁培養基、營養瓊脂培養基、虎紅培養基、膽鹽乳糖培養基、溴化十六烷基三甲銨瓊脂、二鹽酸二甲基對苯二胺試劑、PDP瓊脂培養基、三氯甲烷、甘露醇氯化鈉瓊脂培養基和革蘭氏染色劑。
1.3樣品硝酸咪康唑搽劑，阿特維斯（佛山）制藥有限公司，批號：0606950，成分：硝酸咪康唑、玫瑰麝香香精、乙醇、二甲基亞砜。
2方法與結果
2.1菌液制備［1］
2.1.1取經37 ℃ 培養18～24 h的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌與大腸埃希菌的肉湯培養物1 mL，加入9 mL 0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋并制成每1 mL中含菌數50～100 cfu的菌懸液，做活菌計數。
2.1.2取經25 ℃培養18～24 h的白色念珠菌液體培養物1 mL，加入9 mL 0.9%氯化鈉溶液中，10倍稀釋并制成每1 mL中含菌數50～100 cfu的菌懸液，做活菌計數。
2.1.3接種黑曲霉的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基中，培養5～7 d，加入3～5 mL 0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，吸出孢子懸液至無菌試管內，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1 mL含孢子數50～100 cfu的孢子懸液，做活菌計數。
2.2供試液的制備［2］取本品10 mL，加pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至100 mL，混勻，作為1∶10的供試液。
2.3驗證方法
2.3.1細菌、真菌和酵母菌計數法回收率的測定
薄膜過濾法聯用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖溶液作沖洗劑對各試驗菌的回收率進行實驗，3次獨立平行試驗結果的均值見表1［3］。
①試驗組：取供試液10 mL到薄膜過濾器中，用無菌的0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖溶液沖洗3次，每次100 mL， 并在最后1次沖洗液中加入1 mL的試驗菌液（50～100 cfu/mL）沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于預先制備好的營養瓊脂培養基或虎紅培養基平板上，置30～35 ℃培養48 h或23～28 ℃培養72 h。記錄菌落數。試驗組的菌回收率=(試驗組平均菌落數-供試品對照組的平均菌落數)÷菌液組的平均菌落數×100%。
②菌液組［4］：在過濾器中預先加入大約20 mL的無菌0.9%氯化鈉溶液，再吸取1 mL的試驗菌液（50～100 cfu/mL）到過濾器中，過濾。再用100 mL無菌的0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗1次，取出濾膜，菌面朝上貼于預先制備好的營養瓊脂培養基或虎紅培養基平板上培養，培養方法同試驗組。
③供試品對照組：方法同試驗組，但不加試驗菌液。
④稀釋劑對照組：方法與試驗組同，其中供試液用pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液代替。稀釋劑對照組的菌回收率=稀釋劑對照組平均菌落數÷菌液組的平均菌落數×100%
表1各試驗菌株的回收率 略
從表1可知，在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率、試驗組的菌回收率均不低于70%?？捎帽∧み^濾法聯用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗方法檢查硝酸咪康唑搽劑的細菌、真菌及酵母菌數。
2.3.2控制菌檢查方法驗證
①試驗組：取供試液10 mL到薄膜過濾器中， 用無菌的0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗3次，每次100 mL， 并在最后一次沖洗液中加入50～100 cfu的試驗菌（驗證銅綠假單胞菌時，試驗菌為銅綠假單胞菌），沖洗后取出濾膜放入預先制備好的相應培養基中，依相應控制菌檢查法檢查。
②陰性菌對照組：方法同試驗組，試驗菌改為50～100 cfu陰性對照菌（2個控制菌驗證的陰性對照菌均為大腸埃希菌）。
③菌液組 ：在過濾器中預先加入約20 mL的無菌0.9%氯化鈉溶液，在吸取50～100 cfu試驗菌到薄膜過濾器中，用100 mL 0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液沖洗1次。沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于預先制備好營養瓊脂培養基上，置（36±1）℃培養48 h，記錄活菌數［5］。
3次平行試驗結果一致，試驗結果見表2。
表2對銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌的驗證結果 略
從表2可見，用薄膜過濾法聯用0.1%吐溫pH7.080氯化鈉蛋白胨緩沖溶液作沖洗劑檢查銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌，方法成立。
3討 論
硝酸咪康唑搽劑為廣譜抗真菌藥，主要含有硝酸咪康唑、乙醇和二甲基亞砜等成分，對皮膚癬菌、念珠菌等有抗菌作用，對某些細菌也有一定抑制作用?！吨袊幍洹?005版規定，對藥品在微生物限度檢查時，其方法應通過驗證，以確認供試品的抑菌活性已被消除而保證檢查方法的可靠性。從本品的微生物限度檢查法的建立研究可見，選用薄膜過濾法聯用0.1%吐溫80pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液作沖洗劑來檢查本品的細菌數、真菌、酵母菌數及控制菌（銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌）的方法有效，在細菌總數、真菌及酵母菌計數實驗中，試驗菌回收率均能達到70%以上；銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌檢查實驗，試驗組呈陽性反應，陰性菌對照組呈陰性反應。本文結果可為同類產品的微生物限度檢查方法驗證提供科學的依據。
參考文獻
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篇6
關鍵詞：中藥 中藥制劑 微生物限度 滅菌方法 控制方法
Doi：10.3969/j.issn.1671-8801.2013.08.550
【中圖分類號】R9 【文獻標識碼】B 【文章編號】1671-8801（2013）08-0473-01
在現代醫療活動中，中藥制劑憑借著其療效確切、毒副作用小、相對安全等特點，在臨床上發揮著重大的作用。中藥制劑的劑型經過不斷革新也逐漸適應了現代醫療的需要，但中藥制劑都是經過原藥材處理加工而來的，尤其對于一些提純程度不高的常用劑型，如散劑、片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑等，有的含有生藥原粉、有的需要加入蜂蜜、糖等輔料，生產工藝相對繁雜、工序多，這些因素都使中藥制劑受微生物污染的風險加大。下面針對各個控制點如何防范逐一分析探討。
1 中藥材的預處理
中藥原藥材因其生長特性，在采收加工過程中不可能完全將附帶的雜質和泥沙等除去，這就給微生物的存在和繁殖帶來條件。同時中藥材本身帶有大量細菌、蟲卵和泥沙，而且大部分藥材含有糖類、蛋白質等營養成分，在適宜的溫度和濕度下，微生物容易生長繁殖。在實際生產中，大部分的原藥材都可以進行水洗，有資料表明，藥材水洗一般除菌率可達50%以上。經過水洗的藥材可除去大量泥沙和附著在藥材表面的微生物及蟲卵，用流動水來清洗，才會得到較好的效果，同時清洗前要將個別霉敗品挑揀干凈，但水洗時間不宜過長，以防有效成份流失，干燥溫度在80℃以上，否則會造成微生物的再繁殖。
2 選擇合適的中藥材滅菌方法
大部分經過預處理的中藥材，含菌量都會大大降低，但有一些產品僅經過預處理而加工得到的成品微生物限度仍會超標，這就需要對原藥材采取適當的滅菌措施。
2.1 濕熱滅菌法：現大多數企業采用了中藥潤藥機，在溫度（115±5）℃，蒸汽壓力0.2-0.4Mpa條件下30-60min即可實現中藥的浸潤、滅菌過程，與傳統方式相比藥材的微生物菌落數明顯下降。
2.2 干熱滅菌法：干熱滅菌法就是溫度控制在110-130℃滅菌2-3h，主要適用于濕熱方法滅菌無效的非水性物質，對熱不穩定的含有揮發性成份藥材不適用。
2.3 輻照滅菌法：主要針對花粉類及花類不能清洗而且不能濕熱滅菌的藥材可采用照射藥材滅菌，用100萬-300萬倫琴射線輻照后能徹底滅菌且對其有效成份的影響很小，滅菌效果幾乎達到100%。
3 中藥材的粉碎后滅菌
中藥材也可以經過預處理后粉碎成生藥粉再進行滅菌，其常用方法有濕熱滅菌、乙醇氣體滅菌、臭氧滅菌和輻照滅菌，但在方法選擇上一定要保障藥效，考察其主要有效成份受影響程度，慎重選擇滅菌方法。
4 制劑生產過程的工藝衛生控制
在中間體得到控制時，中藥制劑生產過程微生物控制的核心就是工藝衛生控制，簡單的說，就是防止外部微生物進入半成品中。
4.1 在實際生產中，清場不徹底往往是導致微生物超標的一個重要原因。設備死角或操作間的角落遺留的物料就會成為微生的的繁殖地，在下次生產前如不能采取有效的消毒措施，則加工出的半成品微生物限度很可能超標。
4.2 對于一些難于清潔的設備管路處及密閉的部位，要注意在清場后保持干燥，破壞微生物的生存環境，或在清潔后噴灑75%乙醇來進行消毒，乙醇揮發后也易于干燥。像一步制粒機、高效包衣機等設備，在清潔后可直接用熱風烘干。
4.3 通過控制區的壓差來防止非控制區或可能造成污染的區域對控制區造成污染也是一個很有效的方法。相對潔凈的房間保持正壓，易產生污染的房間保持負壓，這樣會大大降低污染的風險。
5 其它影響因素控制
5.1 人員：人體是最大的污染源，為了避免人體所帶的細菌污染藥品，進入潔凈控制區的人員必須按程序更衣、洗手、消毒，按照“穩、準、輕”的原則來操作。同時要建立嚴格的衛生制度，養成良好的衛生習慣。
5.2 環境：空氣可以說是微生物的世界，據統計，藥品生產上的污染有20%是由空氣系統帶入的。因此必須保障空氣凈化系統的良好狀態，按期清洗更換初、中效濾袋，并每周使用臭氧對空間環境進行滅菌。
5.3 輔料：生產中所用的蜂蜜、蔗糖、淀粉等各種輔料都帶有一定數量的微生物，臨用前也必須嚴格選擇和適當處理。如蜂蜜必需煉制；蔗糖、淀粉等必要時應作微生物檢查。
5.4 工藝用水：中藥制劑使用的飲用水至少應符合國家飲用水標準，而純化水在制備過程中應嚴格控制水質并在使用部位取樣監控微生物。應該注意的是純化水管路的清洗和消毒，一般使用10%食用堿溶液來消毒，根據管網長度循環1-2小時，再用飲用水、純化水中洗至PH呈中性即可。
6 嚴格執行GMP是對微生物限度控制的重要保障
中藥口服固體制劑生產中的許多方面和許多環節都有被微生物污染的可能，而把微生物污染降低到最低限度是GMP的主要精髓之一。只有嚴格執行GMP，根據GMP的要求采取相應的措施才能保證中藥制劑的質量。實施GMP，硬件是基礎，但關鍵是企業員工執行GMP意識的，只有認識到執行GMP對保障藥品的質量的重要性，才能把被動的執行GMP轉變到自覺的操作中去，這才是對藥品質量的最好保障。
參考文獻
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篇7
關鍵詞：微生物；轉化技術；現代醫藥工業；具體應用
過去三十年間，微生物轉化技術在化學領域內不斷地進行常識性試驗，并且得到了全面的發展，而在實際的使用方面，也得到了極為長足的發展?，F在社會中，大量的運用化學制品，而許多化學制品都是制作工藝十分復雜的產品，例如藥品、食品添加劑、化妝品等日常生活中極為常見的生活必需品。而在這些產品的具體合成過程之中，許多重要性的反應已經可以使用微生物轉化技術加以代替。因此，本文主要針對這一技術在現代社會中的具體應用加以分析。
1 微生物轉化的簡要概況
所為的微生物轉化就是使用微生物將一種物質轉化為另一種物質的這樣一個過程，這一個過程主要是建立在微生物產生一種特殊的細胞內部的酶作為生物催化劑展開的化學反應。簡單來說，是使用一種以微生物為基礎進行合成的技術。這些酶對于微生物來說，是生命過程中的必需品，而在具體微生物的轉換過程中，這些酶僅僅是作為一種催化劑而存在的。另外，在使用微生物進行處理過程之中，不僅僅是需要利用相似的產品，并且在相似產品中增加的底物也存在著同樣的催化作用，所以我們可以將微生物轉化技術看做有機化學的一個特殊的分支。
之所以微生物能夠將某種物質轉化成為另一種物質，主要是因為酶的作用。我們不需要對酶進行解釋，只需要了解酶的轉化和微生物的轉化之間存在著細小的差別，酶是一種單一的化學反應，后者則是提供了一種合成酶的場所和反應。所以，從這一個方面來看，微生物轉化是一種真正的生物轉化。另外，因為生物轉化過程中所使用的酶多數來自微生物，我們也可以從動植物中找到所需要的酶。因此再具體的微生物轉化過程中，究竟是選擇使用酶還是微生物進行轉化，需要綜合考慮多種因素，比如成本、例如環境以及生產機構的設備質量等方面。
同時，在研究微生物的具體轉化過程中，需要充分考慮多個方面的問題，例如如何選擇要轉換的物質，所選擇微生物的具體應用那個能力，轉化的方式以及具體轉化反應的選擇等。這其中最關鍵的一點在于選擇轉化過程中的合適的微生物，以及如何提高這種微生物的轉化能力，也就是酶的活力應該如何的提高。另外，一旦發現一種新的酶或者一種新的反應就要設計一種新的轉化過程。要想尋找十分合適的微生物，除了要十分了解酶的反應，更加有效方法是通過篩選的方式來選擇酶。
篩選的方式選擇酶，所要涉及的范圍必須盡可能的寬廣，因為截止到現在已經出現了將近3000多種的酶，這些酶中有些酶的催化效果明顯好過化學催化劑。另外，微生物呈現出多樣性，從而能夠幫助我們找到我們在預先設計中所想要得到的一種反應。
2 具體藥物開發過程中的使用
現在越來越多的專家研究發現，作為藥物使用的一種混合物有著不容忽視的弊端，而在最近一段時期美國FDA公布的一些藥物使用原則加快了轉換技術從已經開發出來的藥物中開發出單一藥物的腳步。
而制作手性藥物的關鍵之處在于不能對稱的一張合成型技術，并且長久以來，許多化學專家都開發使用化學藥品來展開不對稱合成技術的研究和發展。然而在最近的20年間，越來越多的化學專家將研究的目光頭像到如何將微生物轉化更好地運用到有機合成之中產生了興趣。應用微生物進行催化的技術要比使用化學合成以及不對稱合成的方式具有更加明顯的優勢，主要在于這樣幾點：（1）轉化物質具有更強的轉移性，也就是不需要專門的基因保護；（2）使用微生物進行轉化條件更加優越，有著極高的轉化率；（3）而在生物轉化過程中對于外界的影響更小，尤其是對環境的污染方面。特別是近年來DNA重組技術的應用和新的轉化系統的開發應用，使愈來愈多的原來使用化學方法進行不對稱合成的化合物有可能被生物催化轉化的方法來替代。
利用生物轉化技術進行手性藥物的開發主要進行兩個方面的工作：一是進行藥物關鍵中間體的制備，因為利用生物催化轉化方法制備對映體純化合物具有很大的吸引力，但試圖利用這種方法來完成所期望的復雜的有機合成往往是困難的，甚至是不可能的，而利用這種方法獲得某一關鍵中間體是切實可行的；另外，盡管用化學的方法能夠在實驗室條件下獲得所需要的手性藥物，但往往是由于成本和技術問題難以實現產業化。因此用化學一生物一化學的制備路線具有獨特的優越性，即所謂的“綠色合成工藝”；二是進行消旋化合物的生物拆分或轉化，得到單一構型的藥物分子。
3 組合生物催化與新藥發現
組合生物轉化/催化，是指利用一種以上的具有特殊轉化功能的微生物或酶，對同一個母體化合物進行組臺轉化，以得到化學結構的多樣性，它是從已知化合物中尋找新型衍生物以及從簡單化臺物制備復雜化合物的有效手段。從某種角度講，它比化學合成的方法更為簡單和有效。這是一個新的研究領域。
天然產物的多樣性和其結構的復雜性，是存在于生物體內大量酶的作用結果。生物體內負責一系列重要生命活動的酶，在體外同樣具有相同的催化能力。因此，只要體外的催化環境與體內相仿，則能夠實現一系列復雜的，特別是用傳統化學合成方法難以實現的化學反應。利用生物催化劑或化學合.成一酶催化相結合的方法，能夠大大地增加衍生物的多樣性，以及能夠有效地對復雜天然產物的結果修飾和從簡單的分子構建新的化合物庫，在這過程中，往往能夠發現新的生理活性物質。生物催化劑為擴大組合化學提供了各種合成的可能性。
利用生物催化發現先導化合物的優越性在于：（1）可能進行反應的范圍廣；（2）能夠定向進行區域選擇性和立體選擇性；（3）不需基團保護和脫保護，一步實現所需的反應；（4）在溫和和均一的條件下可容易地實現自動化和一步反應的重現性；（5）溫和的反應條件保證了復雜易變的分子結構的穩定性；（6）高的催化活性可以降低催化劑的用量；（7）酶的固定化可以使催化劑反復和循環使用；（8）生物催化劑可在環境中完全被降解。
結束語
綜上所述，微生物轉化技術在現代醫藥工業中起到十分重要的作用，并且對于藥物等日常生活用品的生產方面也起到十分突出的作用。這就要求我們做好這一方面的具體工作，并且詳細考慮在合適的場所選擇合適的酶或者生物轉化技術來進行生產和轉化，從而確保生產產品的優異質量。
參考文獻
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篇8
關鍵詞:微生物檢驗;質量控制;培養基
引言
當前，隨著食品安全問題關注度的不斷提高，很多食品制造企業日益重視檢驗食品微生物，以此來對食品生產進行監測，盡早檢測出食品所受微生物的污染狀況，這樣企業就可采取有效措施最大限度降低微生物的危害，盡可能地保障食品的安全性。在有關食品衛生的微生物檢驗方法及檢驗步驟等方面，國家相關部門雖然已作了很詳細的說明，但在實際操作中還存在很多對檢驗結果帶來偏差的復雜因素，由于對這些因素的不夠重視，致使檢驗結果不夠準確，從而無法對食品的衛生狀況進行正確評價，也就未能對產品生產進行有效監督和指導。基于此，對食品微生物檢驗中的質量控制問題，進行一些分析和探討。
1做好培養基的制備
1.1配制培養基
要嚴格依據處方來進行培養基配制，且應做好仔細記錄。在培養基處方中，其成分多數為生物制品，不同廠家所生產的產品質量會存在一些差異，故應做好配方中不同原理成分的質量控制。此外，所用到的各成分的所有特征應及時做好記錄，對于自制培養基各成分，應按順序分別進行添加，在分裝滅菌之前應確保各成分完全均勻。
1.2應用干粉培養基
當前已有一系列專業化干燥培養基用于微生物實驗行業中，這些干燥培養基不僅使用高效，而且使用便利，故被廣泛應用于微生物實驗行業中。通常那些專業培養基生產廠家都有一套規范的生產工藝，可嚴格控制好原材料及產品，以此來確保產品質量穩定。微生物檢驗所用的那些藥品、干燥培養基或試劑，一定要滿足以下條件:①專業廠家所生產的質量符合相關標準的產品。②具有生產商所提供的編號、名稱、批號及各組成成分。③具有生產商所提供的培養基使用前的pH值、有效期及儲存資料。這樣就可讓使用者及時記錄產品和比較產品。
2做好培養基的水化
2.1選擇好培養基水化的容器
為避免離子進入培養基，不得把鐵鍋或銅鍋等容器用于培養基的水化中，以此來確保微生物的正常生長。此外，為不改變培養基的pH值，在加熱過程中盡可能地避免新玻璃瓶釋放出堿性物質。為避免加熱溶解過程中溢出培養基，所用容器大小應不小于兩倍的復水后培養基總體積。
2.2選擇好培養基水化的用水
所用的水，一定不得含有可影響微生物生長的物質，最好是蒸餾水，特別不得用那些受到污染的去離子水，因為這些水即使通過過濾也還是含有一些抑制微生物生長的東西。由于自來水含有諸如氯等抗菌物質，故一般不用這類水。在水化培養基時，應按步驟不斷把適量的水加入，首先在容器中加入三分之一的水量并予以一定的震蕩，然后再把剩下的三分之二水量加滿，并把容器壁上的那些培養基粉順勢沖下。
2.3稱量培養基
為預防交叉污染而對實驗結果帶來影響，在稱量過程中一定要使用專用的角匙，并確保在這一過程中盡可能地不吸入諸如選擇性培養基等粉末，盡可能地避免在濕度高的房間稱取培養基，這樣可有效防止因培養基吸潮二酸化培養基等結果的產生。對于干粉培養基，一定要基于生產商所提供的相關說明來完成配制。
3做好培養基的物理學和生物學的質量控制
3.1關于培養基的物理學質控
商品化的干燥培養基，為能獲得長期保存培養基的光敏感性成分的活性劑干燥性，其包裝一定要充分密封，所制備的培養基平板一定要具備相應的顏色，例如，血平板通常就制作為血紅色。正常情況下，所制備的培養基一定是沒有沉淀、沒有渾濁。不管是在實施培養基的溶解、還是凝固，都必須做好其適宜溫度的檢測，例如，就傾注平板的培養基而言，為便于低溫傾注平板，其凝固溫度一般應低于40℃，這樣可最大限度避免樣品中的微生物受到熱損傷。
3.2關于培養基的生物學質控
在完成培養基滅菌之后，為檢驗和獲得所需滅菌的效果，一定要進行無菌實驗的操作，具體可選用培養基目標菌生長率和非目標菌的選擇因子進行測試。此外，對于菌落大小以及相應的生理生化特性也必須進行檢測。對于不同批次的產品，都要使用與其相對應的標準菌株進行檢定，而且對于每1次的實驗結果，都要加以詳細地記錄。
4結語
做好微生物實驗室檢測工作的重要前提就是要控制好培養基的質量，這直接關系到整個檢驗工作的可靠性及準確性，這個環節在整個微生物實驗室檢測工作中處于極為重要的地位。因此，在實際生產過程中，就食品微生物檢驗中培養基的質量控制這個問題進行深入分析和探討，這對于培養基質量控制水平的不斷提高并不斷為微生物實驗室檢測提供質量可靠的培養基，均具有極為重要的意義。
參考文獻:
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篇9
論文摘要：介紹了獸醫用抗微生物藥當前發展及應用的現狀，指出必須根據動物疾病的種類、藥物的理化性質、動物的生理特性，科學規范地使用抗微生物藥物（抗生素），才能很好地解決生產實踐中的問題。
抗微生物藥是指對病原微生物（細菌、病毒、支原體、真菌等）具有抑制或殺滅作用的藥劑，主要用于全身感染的藥物，包括抗生素、化學合成抗菌藥、抗真菌藥與抗病毒藥?？刮⑸锼幤酚糜谂R床獸醫已有多年，在促進動物生長、提高養殖經濟效益方面發揮了重要的作用。從20世紀50年代開始至今，大量的試驗表明，抗微生物類藥物具有較好的免疫調節作用，能增強或減弱機體免疫功能。但廣泛應用也帶來了許多新問題，如不合理使用和濫用造成巨大的經濟損失、藥物殘留間接危害人類健康等。
1抗微生物藥物免疫調節作用機制
抗微生物藥物的免疫調節機制常見的有：
（1）影響巨噬細胞粘附、趨化、吞噬和殺菌作用。
（2）影響抗原或有絲分裂原刺激下淋巴細胞向母細胞分化、增殖。
（3）影響抗體生成和補體活化。
（4）使免疫器官受到抑制，進而使免疫活性細胞的生長受到抑制，或使其易于破壞。
（5）穿過細胞膜進入某些細胞，如巨噬細胞和免疫活性細胞，直接破壞細胞的吞噬功能、生長代謝功能以及產生各種細胞因子的功能。
2藥物殘留的檢驗方法
抗菌藥物的廣泛使用，使耐藥問題日益突出。肉類、蛋類及乳品內的藥物殘留成為影響人類健康最為嚴重的問題。藥物殘留的檢驗成為控制藥物殘留的關鍵。測定藥物殘留的方法很多，大致可分為3種：一是利用生物測定法（Bioassay），二是化學分析法（Chemicalanaiysis），三是兼生物和化學的酶聯免疫檢查法（Enzymeimmunoassay）。
為能快速確定動物食品中是否有殘留及大致確定殘留藥物的類別，國外通常做法是遵循一定程序對被測產品進行取樣，按規范要求對樣品進行快速篩選檢驗，然后再用更精確的方法確證超標藥物的品種和準確含量。在快速篩選檢驗的程序中，細菌抑菌試驗法起到非常重要的作用，它可在短時間內進行大批量樣品的實驗，而且經濟、敏感性好。
3藥敏試驗
藥敏試驗是臨床選用抗生素藥物的重要論據。不斷推出的新抗生素藥物在與疾病斗爭中做出了巨大的貢獻，但由于抗生素的濫用，導致臨床致病菌耐藥率越來越高，多重耐藥菌感染日益增多，臨床抗感染工件日趨困難，這種現象必須引起醫藥工作者的高度關注。
由于經濟原因及部分地區缺乏相應的臨床用藥監測條件，個體化給藥無法開展。細菌藥敏試驗也不普及，在使用抗生素時只憑經驗和習慣性用藥，常造成本地區抗生素的亂用和濫用，致使耐藥株增加。
4抗微生物藥物PK-PD研究
藥代動力學（Pharmacokinetics，PK）和藥效動力學（Phar-macodynamics，PD）研究可以描述藥物對微生物產生效應的時間動力學過程及時間作用類型，對評價藥物的有效性、推測最佳治療劑量和用藥間隔、不良反應最小化以及避免或減少藥物耐藥性都有指導性的作用。因此，PK-PD研究是抗菌藥物合理應用的基礎，對于全面反映藥物、宿主及微生物三者之間的關系，評價藥物療效，制定最佳臨床給藥方案具有重要的理論和實際意義。
PK-PD整合用于優化獸藥給藥方案剛剛起步，相比人藥在此方面的研究仍有較大的差距，應進行各種藥物在動物體內體外的試驗來獲得數據并用于獸藥給藥方案的優化。給藥方案的優化體現在細菌的清除和癥狀的痊愈、耐藥菌出現的幾率最低、不良反應減少等方面。在獸藥抗微生物藥物的臨床應用中，PK-PD參數對制訂合理有效的給藥方案、降低獸醫臨床上細菌耐藥性有重要意義，有望成為未來獸藥生產廠家藥物開發與研究、設計合理劑型與給藥方案的重要依據。
5獸用微生物制品技術開發
作為畜禽疾病預防控制的有力武器，獸用生物制品在畜牧業的發展中發揮著越來越重要的作用。畜牧業的發展帶動了獸用生物制品的技術進步，后者的進步又促進了畜牧業的繁榮。同時也應該看到，作為一種特殊的獸藥，其研究成果為動物與人類的健康、現代生物科學探索等做出了巨大貢獻。但由于生物制品本身的特性和安全防護方面的漏洞，也會出現某些生物災害，造成不應有的損失。
微生物制品是抗生素、化學藥品、激素類的理想替代品。它除具有中草藥的優點外，還有一般中草藥沒有的優點，即對畜禽的營養作用。微生物制品的研制、應用理論目前日趨成熟和完善，微生物制品生產工藝由實驗室轉向工廠化，生產品種規格日益豐富，為獸用微生物制品的開發奠定了良好的基礎。
微生物制品的生產應用也存在一些問題，如發酵生產難度大、產品標準難統一，加工儲運過程中耗氧、高溫均使其大量失活，動物胃酸對微生物有滅活作用，在胃腸道定植能力不強，顆粒飼料制粒過程中微生物失活，使用效果不穩定。因此，微生物制品生產、應用技術開發要圍繞以下問題進行：一是微膠囊包埋；二是研制微生物在動物消化道中賴以生存的營養物質，如寡糖。
6抗微生物藥的合理應用
抗微生物藥物是目前獸醫臨床使用最廣泛和最重要的藥物，對控制家禽傳染病起著巨大的作用，但當前不合理用藥較為嚴重，常造成治療失敗、不良反應增多、藥品浪費、細菌耐藥性產生、獸藥殘留等，為了充分發揮抗菌藥物的療效，必須切實合理地使用抗菌藥物。
（1）嚴格掌握適應癥。推斷或判定病原微生物，選用適當藥物，如革蘭氏陽性菌感染可選用青霉素類、大環內酯類等，革蘭氏陰性菌感染可選用氨基糖苷類、氯霉素類和氟喹諾酮類等，雞慢性呼吸道病選用氟喹諾酮類、泰樂菌素、泰妙菌素等。
（2）制定給藥方案。根據藥動學特征，制定合理的給藥方案，保證劑量合適、療程充足和防止不良反應。
（3）避免耐藥性的產生。不濫用抗菌藥物，能不用盡量不用，單一藥物有效不要聯合用藥；及時、足量、療程恰當；盡量避免局部用藥和長期用藥；病因不明或病毒性感染不要輕易使用抗菌藥物。
（4）強調綜合性治療措施。加強飼養管理，改善家禽體況，增強機體免疫力；糾正水、電解質平衡失調等。
（5）抗菌藥物的聯合應用要合理。①聯合用藥必須有明確的特征：一種藥物不能控制的嚴重感染或混合感染；病因未明危及生命的嚴重感染；易出現耐藥性的細菌感染；需長期治療的慢性疾病。②必須根據抗菌藥的作用特性和機理進行選擇，避免盲目組合。根據抗菌藥物作用特點，可將抗微生物藥分為4類：Ⅰ類為速效殺菌劑，如青霉素類、頭孢菌素類；Ⅱ類為慢效殺菌劑，如氨基糖苷類、多黏菌素類；Ⅲ類為速效抑菌劑，如四環素類、氯霉素類、大環內酯類；Ⅳ類為慢效抑菌劑，如磺胺類。I類與Ⅱ類合用出現協同作用，I類與Ⅲ類合用出現拮抗作用，I類與Ⅳ類合用無明顯影響，其他合用多出現相加或無關作用。作用機理相同的藥物合用療效并不增強，但可能相互增加毒性或出現拮抗作用，如氨基糖苷類之間或氯霉素、大環內酯類、林可霉素類之間。③注意藥物間配伍禁忌。
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篇10
[關鍵詞] 腎寧合劑；微生物限度檢查；驗證；大腸埃希菌
[中圖分類號] R927 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2013）06（b）-0078-02
腎寧合劑是本院結合臨床研制的醫院制劑，由黃芪、益母草、敗醬草、川芎等組成，具有益氣活血、利水消腫、調節免疫功能的功效，用于急慢性腎炎、腎病綜合征、糖尿病性腎病、急慢性腎功能衰竭等疾病。據調查目前微生物限度不合格是醫院制劑不合格的主要因素之一[1]，為控制產品質量，本研究按照2010年版《中華人民共和國藥典》（簡稱“中國藥典”）附錄的相關規定[2]，參考相關文獻對腎寧合劑微生物限度檢查方法進行了驗證[3-4]，以保證患者用藥的安全有效，現報道如下。
1 儀器與試藥
1.1 供試品
腎寧合劑，規格：100 ml，由本院制劑室生產；批號：20120413。
1.2 培養基
營養瓊脂培養基，批號：110116；營養肉湯培養基，批號：110112；玫瑰紅鈉瓊脂培養基，批號：110112；4-甲基傘形酮葡糖苷酸培養基（MUG），批號：100820；pH 7.0改良馬丁瓊脂培養基，批號：101106；無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，批號：100824。以上培養基均由北京三藥科技開發公司提供。
1.3 驗證試驗用菌種
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26003]，大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44102]，枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）[CMCC（B）63501]，黑曲霉（Aspergil1us niger）[CMCC（F）98003]，白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC（F）98001]。以上菌種均由中國藥品生物制品檢定研究院提供。
1.4 儀器和設備
SHINVA立式壓力蒸汽滅菌器（山東新華醫療器械股份有限公司），超凈工作臺（蚌埠凈化設備廠），LRH-250生化培養箱（上海一恒科學儀器有限公司），HTY-2000A集菌儀，HTY反復使用集菌培養器（杭州高得醫療器械有限公司）等。
2 細菌、真菌及酵母菌計數方法的驗證
2.1 菌液制備
接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基上，經25℃培養18～24 h，取1 ml加入到9 ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5，為50～100 CFU/ml菌懸液備用。
接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌與枯草芽胞桿菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基上，經35℃培養18～24 h，取1 ml加入到9 ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-6～10-7（50～100 CFU/ml）的菌懸液備用。
接種黑曲霉菌的新鮮培養物于改良馬丁瓊脂斜面培養基上，25℃培養5 d，加入0.05% 聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液5 ml，將孢子洗脫，吸出孢子懸液至無菌試管內，用0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液10倍遞增稀釋制成每毫升含孢子數50～100 CFU的孢子懸液，備用。
將上述5種菌液分別接種至相應的培養基上，金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌，35℃培養2 d；黑曲霉、白色念珠菌，25℃培養2～3 d。
2.2 供試液制備
取供試品10 ml，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 ml，制成1︰10的供試液。
2.3 細菌、真菌及酵母菌計數方法的驗證
供試品對照組：取1∶10的供試液1 ml，立即傾注瓊脂培養基，凝固后，置規定溫度下，細菌培養 24～48 h，白念珠菌和黑曲霉菌培養 48～72 h，按菌落計數方法測定供試品本底菌數。試驗組：取1∶10的供試液1 ml和50～100 CFU/ml試驗菌，分別注入平皿中，傾注營養瓊脂培養基及玫瑰紅鈉瓊脂培養基，5種試驗菌株每株試驗菌分別制備2個平皿，按平皿法測定其菌數。菌液組：取各試驗菌 50～100 CFU注入平皿中，立即傾注瓊脂培養基，平行制備2個平皿，凝固后，置規定溫度下，細菌培養24～48 h，白色念珠菌和黑曲霉菌培養48～72 h，測定所加入的實驗菌數。
試驗組回收率計算：回收率=（試驗組平均菌落數-供試品對照組平均菌落數）/菌液組的平均菌落數×100%。
驗證結果提示，5株試驗菌人工染菌回收率達到70%以上，表明采用常規法做驗證試驗，方法可行（表1）。
3 控制菌檢查方法的驗證（常規法）
試驗組：取1∶10的供試液10 ml和小于100 CFU/ml大腸埃希菌試驗菌液加到100 ml膽鹽乳糖増菌培養基中，35℃培養24～48 h。取培養物0.2 ml，接種至含MUG培養基5 ml的試管中，35℃培養24 h，在366 nm紫外燈下觀察熒光，同時用未接種的MUG培養基作本底對照。試驗管MUG為陽性，靛基質試驗為陽性，本底對照管為陰性。
陰性菌對照組：同試驗組，取小于100 CFU的金黃色葡萄球菌加入到100 ml膽鹽乳糖増菌培養基中。陰性菌對照組MUG為陰性，靛基質試驗為陰性，本底對照管為陰性。
上述驗證結果提示試驗組檢出了大腸埃希菌，而陰性菌對照組未檢出金黃色葡萄球菌，說明可采用常規法對本品進行控制菌（大腸埃希菌）檢查。
根據以上驗證結果，腎寧合劑的微生物限度檢查按照中國藥典2010年版第一部附錄微生物限度檢查法（附錄ⅧC）檢查，細菌、真菌及酵母菌數測定和控制菌檢查均可采用常規法檢驗。具體方法如下：
供試液制備：取本品供試液10 ml，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 ml，制成1∶10的供試液。
細菌數測定：取1∶10、1∶100、1∶1000的供試液，采用平皿法測定，符合規定。
真菌及酵母菌數測定：取1∶10、1∶100、1∶1000的供試液，采用平皿法測定，符合規定。
大腸埃希菌的檢查：取1∶10的供試液10 ml，加入到膽鹽乳糖增菌培養基100 mL中，依法檢查，符合規定。
4 討論
腎寧合劑是由多種中藥材經水煎煮醇沉提取后制成的澄明液體，含有多糖、淀粉、蛋白質類物質，這些物質為微生物繁殖提供了營養條件。如果微生物度檢查呈假陰性，當樣品存放后使用，會產生大量微生物甚至致病菌，因此對腎寧合劑進行微生物限度檢查具有重要意義[5]。
本試驗中菌液經稀釋至適宜濃度后，若在室溫下放置，應在2 h內使用，若保存在2～8℃可在24 h內使用，以確保細菌活性及菌數穩定[6-7]。本試驗經過考查證明，以1∶10腎寧合劑樣品作為最低稀釋級供試液，能夠消除藥品在微生物限度檢查中的抑菌作用，5種試驗菌的回收率均大于70%，表明稀釋劑 pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液無抑菌作用[8]，對實驗無干擾，符合中國藥典要求。
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