病理學原理概述范文

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篇1

【關鍵詞】 胰腺炎/流行病學;，廣東

摘要: 【目的】了解急性胰腺炎在廣州地區的發病規律和特點。【方法】采用回顧性調查方法對廣州中醫藥大學第一附屬醫院1996年至2004年9年間所有住院治療的273例急性胰腺炎患者的發病時間、季節，患者的性別、年齡、病程的分布以及疾病轉歸和證候特點等方面進行分析，以了解廣州地區急性胰腺炎的發病規律和特點?！窘Y果】從時間分布上看，廣州地區的急性胰腺炎的發病率有逐年上升的趨勢;從發病季節上看，夏季急性胰腺炎的發病率相對較少，而冬季的發病率明顯升高;從性別分布上看，廣州地區急性胰腺炎的性別比例接近1∶1，男女沒有明顯差別;從年齡分布上看，20歲以下青少年發病率很低，20～39歲年齡段的發病率最高，40～79歲相對處于一個平臺期，發病率有所下降，80歲以上發病率急劇下降;從病程來看，其頻數峰值在1周左右，即大多數1～2周內可好轉出院;從疾病轉歸來看，經過中西醫結合及時救治，72.9%痊愈，病死率為2.9%;從中醫證候特點來看，廣州地區的急性胰腺炎患者大多表現為肝膽濕熱（69.9%），其次為肝郁氣滯（11.7%），痰瘀阻絡、中臟虛寒和陽明腑實證型最少（分別為7.8%、7.3%和3.4%）?！窘Y論】廣州地區急性胰腺炎在近10年中發病呈逐年上升趨勢;發病年齡集中在中青年;中醫證候大部分表現為肝膽濕熱型;發病的季節多在冬春寒涼及節假日集中的季節，表明該病發病與地區經濟發展后飲食不節的生活方式有關，應引起有關部門的重視。

關鍵詞: 胰腺炎/流行病學; 廣東

急性胰腺炎是因胰液分泌異?？哼M或胰酶在胰管內被激活引起胰腺組織自身消化而引起的急性局部炎癥反應 ［1］ 。其輕癥屬于中醫“胃脘痛、腹痛、脅痛、嘔吐”范疇，重癥屬于中醫“結胸、厥逆”的范疇。為了解急性胰腺炎在本地區的發病規律及特點，以利于采集證據來完善和調整今后的防治對策，我們采用回顧性調查方法對273例患者進行了全面分析總結。

1 對象和方法

1.1 研究對象 本研究采用的原始資料均來源于廣州中醫藥大學第一附屬醫院1996年1月至2004年9年間所有住院治療的273例急性胰腺炎病例。 1.2 研究方法 在病案室進行檢索及查閱，資料完整。共收集到急性胰腺炎病歷273份。參加人員均為在校研究生，包括外籍研究生，進行國內外學生共同合作。他們均接受過專業基礎課程的培訓和考核。使用軟件為SPSS，所有原始資料均有數碼照片存檔。

2 結果

2.1 時間分布 結果見圖1。廣州中醫藥大學第一附屬醫院1996年至2004年9年間收治的急性胰腺炎患者中，1996年累計發 1997胰腺炎發病時間分布圖病8例，占2.9%;1997年累計發病10例，占3.7%;1998年累計發病15例，占5.5%;1999年累計發病27例，占9.9%;2000年累計發病33例，占12.1%;2001年累計發病36例，占13.2%;2002年累計發病26例，占9.5%;2003年累計發病69例，占25.3%;2004年累計發病49例，占17.9%。

2.2 季節分布 在廣州中醫藥大學第一附屬醫院住院的273例急性胰腺炎患者中，季節分布極為明顯。1月發病29例，占10.6%;2月發病24例，占8.8%;3月發病32例，占11.7%;4月發病21例，占7.7%;5月發病16例，占5.9%;6月發病17例，占6.2%;7月發病16例，占5.9%;8月發病17例，占6.2%;9月發病25例，占9.2%;10月發病18例，占6.6%;11月發病31例，占11.4%;12月發病27例，占9.9%。結果見圖2。

2.3 性別分布 廣州中醫藥大學第一附屬醫院在1996年至2004年9年間病房收治的273例急性胰腺炎患者中，男性患者135例，占49.5%，女性患者138例，占50.5%，男女性別在發病率上無顯著性差異。結果見圖3。

2.4 年齡分布 收入本院的273例病人中沒有10歲以下者，其中10～19歲13例，占4.8%;20～29歲49例，占17.9%;30～39歲54例，占19.8%;40～49歲33例，占12.1%;50～59歲36例，占13.2%;60～69歲40例，占14.7%;70～79歲35例，占12.6%;80～89歲10例，占3.7%;90歲以上3例，占1.1%。結果見圖4。

2.5 病程 從病程統計圖可以看出，急性胰腺炎的病程呈偏態分布，7d的累計百分比為35.2%

2.6 疾病轉歸

2.6.1 療效標準 ［2］ 治愈:急性胰腺炎癥狀、體征消失，淀粉酶正常;好轉:急性胰腺炎經治療后腹痛減輕，淀粉酶正常;未愈:急性胰腺炎癥狀、體征及淀粉酶均無好轉;死亡:生命體征消失。 　 2.6.2 預后結果 治愈199例，占72.9%;好轉61例，占22.3%;未愈5例，占1.8%;死亡8例，占2.9%。

2.7 證型特點 除去以手術為主者外，在以中醫為主治療的病例中，證型特點規律如下:

2.7.1 證型類型及分型標準 ［3］ （1）肝郁氣滯:腹中陣痛或串痛，有惡心或嘔吐，腹脹，舌質淡紅，苔薄白或薄黃，脈弦細或緊;（2）痰瘀阻絡:脘腹疼痛，嘔惡納呆，痛處固定不移，或腹中有痞塊，疼痛拒按，堅硬或固定不移，肌膚粗糙失潤，或伴有身體黃染，舌質紫黯或有瘀斑，苔白膩，脈滑或澀;（3）肝膽濕熱:上腹脹痛，拒按，納呆嘔惡，口干而粘，肢體沉重，或發黃疸，大便不爽或干結，尿短赤，多有黃疸，舌質紅，苔黃膩，脈弦滑或數;（4）陽明腑實:脘腹痞滿脹痛而拒按，腹脹，大便不通，可伴有身熱、口干渴、小便黃赤，舌紅，苔黃燥或厚膩，脈洪大或滑數;（5）中臟虛寒:面色蒼白，口唇無華，呼吸微弱，肢冷汗出，舌淡苔白，脈沉微細。

2.7.2 證型分布 肝郁氣滯27例，占11.7%;痰瘀阻絡18例，占7.8%;肝膽濕熱160例，占69.9%;陽明腑實8例，占3.4%;中臟虛寒17例，占7.3%。 3 小結與分析 既往研究認為急性胰腺炎多見于青壯年或50～59歲男性和60～69歲女性，發病率女性高于男性（約2∶1），但重癥胰腺炎則男性高于女性（4∶1） ［4］ ，病情兇險，并發癥多，死亡率高 ［5］ ，可達25%～40% ［6］ 。而本組病例的發病特點與上述統計數據有很大差異，從病例數據我們總結出廣州地區急性胰腺炎患者特有的發病規律:其發病自1996年以來呈逐年上升的趨勢，這可能與隨著廣州經濟的高速發展，人們的飲食消費不斷增加，以及暴飲暴食和嗜酒的不良生活習慣誘發該病有關，這點與其他文獻報道相符，如趙芝蓉 ［7］ 報道飲酒占急性胰腺炎發病因素的37%。李淑增 ［8］ 也認為脂質在胰腺內沉積及血脂增高可引起血液粘稠度增加而致胰腺微循環障礙，使胰腺灌注量減少，血流量下降甚 至缺血，破壞細胞膜功能，使腺泡膜穩定性下降，血管通透性增加，氧自由基增加，從而激活血小板活化因子，血小板聚集，血栓素A釋放而導致發病;酒精及暴飲暴食所引起的急性胰腺炎近幾年亦有增加。因此，避免大量飲酒及暴飲暴食是減少急性胰腺炎的有力措施之一。在我院住院的273例急性胰腺炎患者中，季節分布極為明顯，夏季的發病率相對較少，而冬季的發病率明顯升高。從10月末開始到第2年3月是一個高發時間，從3月氣溫升高開始，發病率便急劇下降，在5、6、7月天氣最炎熱的夏季達到一個低谷，形成一個平臺期，在夏秋交界的8、9月份開始上升，到冬季再次達到一個高峰，形成一個循環。廣州夏季氣候炎熱潮濕，食欲下降致使暴飲暴食和酗酒等現象減少，從而急性胰腺炎發生率也相應減少。而當氣溫寒涼時，不良的飲食習慣又會出現，加上主要節日多集中于冬季，所以急性胰腺炎的發病率也明顯升高。本組273例急性胰腺炎患者的性別比例接近1∶1，男女性別在發病率上差別不大，這與文獻報道中年組女性多見發病，年齡以40～60歲為多不符 ［7］ 。這可能因為廣東男女飲食習慣基本相似，社交狀況趨于平等，從而導致急性胰腺炎患者的性別比例接近1∶1。在發病年齡方面，20歲以下青少年發病率很低，20～39歲年齡段發病最高，40～79歲相對處于一個平臺期，發病率有所下降，而80歲以上急性胰腺炎發病率急劇下降，這種趨勢符合社會和經濟學的一般規律。20歲以下發病率很低，是因為青少年受到經濟上的限制，極少有暴飲暴食、酗酒等現象。20～39歲年齡段社會應酬多，食欲旺盛，極易成為急性胰腺炎的誘發因素，故其發病率最高。40～79歲相對處于一個平臺期，發病率有所下降，因為此年齡段自制力強，保健意識提高，能維持在一個穩定的水平。而80歲以上急性胰腺炎發病率急劇下降，是因為老年人不再有過多的社會活動且具有強烈的自我保健意識。急性胰腺炎發病急而且嚴重，但經過及時治療治愈也快，大部分1～2周內好轉出院，其頻數峰值位于1周左右;而且經過及時救治，轉歸良好，大部分可以痊愈。本組資料顯示，急性胰腺炎的病程呈偏態分布，7d的累計百分比為35.2%，13d高達68.5%，15d高達74.4%。也就是說，高于1/3的病人7d內出院，高于2/3的病人13d內出院，接近3/4的病人15d內出院。這體現了急性胰腺炎發病快而嚴重，經過及時治療治愈也快的特點。張喜平 ［9］ 認為在急性階段，針對肝郁氣滯，郁久化熱，中焦實熱，采用通腑導滯、疏肝退黃等攻邪措施，有助于疾病趨緩;在炎癥消退階段則多采用活血化瘀和益氣養陰藥物而取效。但我院絕大部分患者的中醫證型以肝膽濕熱為主，故治療也以清肝利膽、通腑瀉下為最多，這可能是廣州氣候炎熱潮濕和飲食甘肥厚膩，易于生濕化熱之故。我院采用中西醫結合的治療方法，取得較好療效，治愈率達72.9%，病死率僅為2.9%。以上資料對今后廣州地區急性胰腺炎的診療有一定的指導作用，更確切的結論有待進一步研究和探討。

參考文獻:

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篇2

[關鍵詞]孤獨癥；結構磁共振成像；擴散張量成像；磁共振波譜成像；血氧水平依賴功能磁共振成像

孤獨癥譜系障礙(autismspectrumdisorder，ASD)是幼兒時期一種異質的神經發育障礙性疾病[1]，核心癥狀主要為語言及社會交往障礙、參與度和溝通度降低以及活動受限的重復刻板行為[2-3]，其高發病率及高致殘率成為全球重大公共衛生健康問題[4-6]。研究證實ASD患兒早期神經結構具有可塑性，及早診斷并行有效的干預治療對患兒的預后具有深遠的影響。神經影像學技術因其在探索大腦結構和功能方面具有獨特的優勢，被廣大學者用于ASD診斷中，通過評估腦結構形態、腦白質纖維束的完整性、物質代謝等方面來顯示ASD病理生理學的改變，為臨床對ASD的早期診斷提供了更可靠、更客觀的依據。筆者就兒童孤獨癥的神經影像學研究進展進行綜述。

1ASD概述

ASD的病因復雜，發病機制尚不完全明確，其可能的假說涵蓋遺傳學、代謝組學、免疫學、神經生物學等多方面，有研究表明遺傳和環境因素共同作用[7]影響大腦神經發育，導致神經元連接不足。研究證實CYFIP1基因的缺失與ASD患者的腦功能和結構連接障礙息息相關[8]。陳永紅等[9]認為結構連接和功能連接的神經環路異常導致ASD臨床核心癥狀的重復行為增加及社交行為障礙，推測神經環路異常可能與ASD發病機制相關。這些研究結果有助于理解ASD的發病機制，更好地認識疾病并為臨床診斷及早期干預治療提供可行的方案。

2臨床評估ASD的手段

臨床對ASD的診斷主要依靠患兒的行為表現和癥狀分析，評估ASD兒童行為特征的方法是基于各種量表工具以及對影響因素復雜性的定性分析，臨床應用較廣泛的篩查量表主要包括孤獨癥行為檢查量表、兒童孤獨癥評定量表以及兒童孤獨癥量表；診斷量表包括孤獨癥診斷觀察量表診斷量表和孤獨癥診斷訪談問卷修訂版[10]。這些量表在一定程度上提高ASD的陽性診斷率，但因其主要依賴于臨床癥狀的觀察和醫生的臨床經驗，存在一定的主觀性，缺乏客觀的神經解剖學及功能方面的依據。神經影像學技術可減少主觀影響因素，以更客觀的影像學證據提高ASD的診斷符合率。

3神經影像學評估ASD

近年來神經影像學飛速發展，結構磁共振成像(structuralmagneticresonanceimaging，sMRI)、擴散張量成像(diffusiontensorimaging，DTI)、磁共振波譜成像(magneticresonancespectroscopy，MRS)、血氧水平依賴功能磁共振成像(bloodoxygenationleveldependent-functionalmagneticresonanceimaging，BOLD-fMRI)及功能性近紅外光譜(functionalnear-infraredspectroscopy，fNIRS)技術的應用，能夠安全無創、客觀地檢測ASD患兒腦結構和功能的改變，對臨床ASD診斷有十分廣泛的應用前景。神經影像學研究表明，孤獨癥患兒存在腦結構和功能異常，包括腦體積異常、腦白質纖維束連接異常、腦組織代謝物質紊亂等神經病理學變化。

3.1sMRI

sMRI采集高分辨率的3DT1圖像，通過后處理技術對腦體積測量、腦表面皺褶等進行研究。常用分析方法包括基于體素的形態學分析和基于表層的形態學分析[11]。基于體素的形態學分析可反映孤獨癥患兒腦體積的變化，ASD兒童的神經生長軌跡存在早期差異，他們的大腦似乎比正常發育大腦增長得更快，腦體積增加約10%[12]。儲康康等[13]通過縱向對比分析發現ASD患兒額葉和顳葉的腦白質體積增大，而這些腦區主要與社交情感、語言表達等相關，推測這些區域的變化可能是ASD兒童社交和認知障礙的潛在病理基礎[14]。一項Meta分析提出，ASD患兒中央后回和顳上回等多個腦區灰質體積增大，且灰質體積的變化與患者的平均智商顯著相關，推測這些變化可能是導致ASD患兒智力低下因素[15]。基于表層的形態學分析主要反映微結構的改變，例如腦表面皺褶程度、皮層厚度等。Kohli等[16]研究發現，ASD患兒某些皮質區域的皮層折疊數量趨向于升高，但隨著年齡的增長逐漸減少，這可能與ASD患兒早期腦過度發育所致。研究發現ASD患兒的紋狀體、額葉皮層和顳葉皮層等情感與認知相關腦區的皮層較正常兒童增厚[17-18]，提示腦皮質的增厚或許與ASD的發生有一定的關系。綜上所述，sMRI主要通過腦體積和腦表面皺褶細微結構改變觀察ASD患兒腦結構的變化，進而輔助臨床診斷ASD。

3.2DTI

DTI技術是目前唯一能夠無創性在活體內定量評估腦白質纖維束的完整性和方向性的檢測方法，對生物組織內水分子的擴散十分敏感，能夠直觀地顯示腦白質纖維束的宏觀和微觀結構以及白質纖維束的傳導通路及其發育變化情況[11,19]，是當前研究大腦白質結構性連接的最為有效的方法之一。Steinbrink等[20]首次對ASD兒童行DTI研究發現ASD組腹側前額葉皮層附近、扣帶回前部以及顳頂交界處的白質中部分各向異性(fractionalanisotropy，FA)降低，在雙側靠近杏仁核的顳葉、胼胝體和雙側鄰近顳上溝附近也可見FA降低的其他簇。近年來許多學者[21-24]的研究也發現ASD患兒腦白質FA降低，包括弓狀束、扣帶束、上縱束、內囊和胼胝體壓部等，推測ASD相關神經通路的髓鞘和軸突體積較小及密度降低，導致軸突完整性缺陷和髓磷脂存在受限，進而引起ASD患兒相應臨床癥狀的出現，眾多研究結果提示白質結構在ASD患兒發育中似乎特別受影響，表現出髓鞘形成減少，FA值降低，這都表明ASD有一種獨特的神經發育模式，并且這種潛在的結構差異可能影響學習和社交溝通能力。DTI通過評估腦白質纖維束的完整性及相關參數變化，可觀察纖維束是否損傷及損傷程度，或可為ASD的診斷提供新的見解。

3.3MRS

MRS利用磁共振現象和化學位移作用，以非侵入性技術測量活體腦組織內特定神經化學產物的穩態濃度及其代謝活性，間接反映腦功能狀態。目前應用最廣泛的是1H-MRS成像，其主要檢測的代謝產物包括N-乙酰天冬氨酸(N-acetylaspartate，NAA)、谷氨酸(glutamate，Glu)、γ-氨基酸(gamma-aminobutyricacid，GABA)等。NAA僅存在中樞神經系統的神經元中，是衡量神經密度、完整性及靈敏度的指標，NAA濃度的降低提示中樞神經元結構的完整性及功能的損傷[11]。有學者[25]發現ASD患者丘腦、扣帶回前部區域的NAA濃度降低，且NAA濃度越低，核心癥狀越嚴重，推測神經元的損傷可能與ASD的臨床癥狀相關。而Glu、GABA分別是中樞神經系統重要的抑制性和興奮性神經遞質，Puts等[26]研究發現ASD患兒感覺運動區GABA水平降低，并認為這可能是ASD患兒觸覺功能改變的基礎。而Umesawa等[27]發現ASD患者較對照組患者有更嚴重的感覺超反應性，ASD患者左側輔助運動區和左側腹側前運動皮層的GABA濃度降低，與感覺超反應的嚴重程度呈負相關，表明高階運動區抑制性神經傳遞GABA減少可能是ASD感覺超反應的基礎。另有學者[28]發現ASD兒童雙側視皮層中的GABA濃度與更有效的視覺搜索能力相關，GABA值降低會導致ASD患兒社交障礙癥狀加重。他們還發現在右顳頂葉交界處的GABA、Glu、GABA/Glu均減少，提示關鍵網絡中樞的神經元功能受損。MRS通過分析中樞神經系統代謝產物含量的變化來反映腦組織損傷程度，在探測ASD患兒神經元發育及損傷情況具有獨特的優勢。

3.4BOLD-fMRI

BOLD-fMRI是最基本的功能磁共振成像技術，其原理是腦組織在執行任務時，相應腦功能區神經元被激活，組織血流量和耗氧量增多，氧合血紅蛋白/脫氧血紅蛋白比值變化，其T2縮短效應減弱，在加權像上表現為信號增強，形成BOLD-fMRI信號。BOLD-fMRI包括靜息態及任務態，在ASD患兒的診療中研究較多的是靜息態，主要通過患兒腦功能連接情況反映相關腦功能的變化。大量研究顯示ASD患兒的神經活動存在異常，他們在認知、語言等區域的腦功能連接較正常兒童減少[29-33]。在一項基于局部一致性(regionalhomogeneity，ReHo)的研究中，學者發現ASD患兒存在多個腦區的自發活動改變，特別是ASD的視覺和語言相關區域的改變[30]。Chen等[31]發現ASD默認網絡的影像學標志物與社會反應度的原始評分和模型因子呈負相關。Borras-Ferris等[32]發現ASD兒童默認網絡區域之間的低連接性，并且左側顳中回與右側顳極之間、左側眶額前額皮質與右側額上回之間的腦功能連接降低程度往往與患者社交溝通能力呈正相關。Kim等[33]研究ASD患兒對日常用語的理解能力時發現，患兒右側額下回的腦激活程度較對照組明顯減少，提示語言功能相關的額葉受損。最近一項研究發現杏仁核-背側前扣帶回/內側前額葉皮層連通性降低與ASD社交障礙嚴重程度相關，而杏仁核紋狀體連接與ASD個體的限制性、重復癥狀嚴重程度相關[34]。由上可知，BOLD-fMRI可發現ASD患兒腦功能連接中的異常，推測相關區域之間的低連接性與ASD的發病有關。

3.5fNIRS

fNIRS是一種新興的非侵入性腦功能神經影像學技術，通過向特定腦功能區照射近紅外光(650～950nm)，利用近紅外光窗口內生物組織的相對透明度，以神經元激活后局部血氧濃度的變化觀察神經活動，進而探測大腦功能[35-36]。fNIRS具有設備便攜、可移動的優點，可在更自然的環境中研究大腦活動，這意味著fNISR可以更準確地探索ASD的社交溝通障礙[37]。Mazzoni等[37]發現與對照組相比，ASD兒童具有更高的半球間連通性，兩側血流動力學活動有0.02Hz的波動。有學者[38]發現ASD兒童在額中下回及顳上中回皮質激活與ASD嚴重程度相關，與對照組兒童顯示雙側對稱激活不同，ASD的兒童在額中下回顯示出更多的左側激活，在顳上中回顯示右側化激活。此外，左額中下回較低的激活和更嚴重的重復的行為相關聯。另有學者[39]發現右半球的血流動力學信號在ASD和正常兒童之間的差異性比左半球更高。Haweel等[40]也發現ASD幼兒的血氧飽和水平檢測信號呈偏側化，在左側前側的顳上葉皮層出現低活化，并且這種異常偏側性隨著年齡的增長而增加。fNIRS可探測神經活動引起的局部腦血流變化評估大腦活動狀態，因其具有便攜和較低的環境要求，在嬰幼兒ASD中的應用十分廣泛。

4總結與展望

篇3

[關鍵詞] 銀屑??； 中醫體質； 個體化防治； 思路與方法

[中圖分類號] R758.63[文獻標識碼] A[文章編號] 1005-0515（2011）-11-004-01

中醫體質理論源于《內經》，歷代醫家多有發揮，自上世紀七十年代以來當代醫家對體質學說開展了廣泛研究，并在實踐中不斷豐富和發展，逐漸形成了較系統的獨具中醫特色的理論，體現了中醫的整體觀念和個體差異。銀屑病中醫稱之為“白”，俗稱牛皮癬，是一種常見的頑固性、難治性、慢性皮膚病。學界普遍認為其發病是一個多因素參與、多基因改變及多階段發展的復雜病變過程。其發病機理及防治研究方興未艾，結合中醫傳統理論及體質學說對銀屑病開展中醫體質研究及其相關因素關聯性分析，有望為銀屑病的防治研究另辟蹊徑。本文旨對銀屑病中醫體質研究的理論基礎、研究意義、路線及存在的問題和前景作一簡要概述。

1 銀屑病中醫體質研究淵源 《靈樞?論痛》：“筋骨之強弱，肌肉之堅脆，皮膚之厚薄，理之疏各不同……腸胃之厚薄堅脆亦不等”、《素問?逆調論》：“是人者，素腎氣勝”、《素問?厥論》“是人者，質壯，秋冬奪所用”，上述條文所提的“素”與“質”，即中醫體質學理論的最早論述。張仲景《傷寒論》所述喘家、淋家、汗家等表示各種宿疾的體質特點，并認為體質因素與疾病的關系不僅表現在發病方面，還體現于疾病的發展及治療諸方面，同時也充分強調體質在疾病的發生、發展、轉歸，以及治療、預后中的重要作用，為后世“辨體論治”思想埋下了伏筆。王叔和《脈經》明確指出不同“性氣”或“形性”的人，因稟性不同，脈象上有遲、速、大、小、長、短之別，雖無“體質”之名，實為中醫體質理論的重要內容。巢元方在《諸病源候論?漆瘡候》中云：“人有察性畏漆，但見漆便中其毒”，較早地描述了皮膚病中過敏體質對漆過敏的現象。錢乙《小兒藥證直訣》云：“小兒五臟六腑成而未全，全而未壯，臟腑柔弱，易虛易實，易寒易熱”，是對小兒體質特點的概括，用藥強調：“小兒易為虛實，脾虛不受寒溫，服寒則生冷，服溫則生熱，當識此勿誤也”、“小兒之臟腑柔弱，不可痛擊，大下必亡津液而成瘡”等，此則以小兒脾弱的體質特征所立的治則與治法[1]。金元四大家從體質影響疾病易感性做了不同的闡述，以及明清張景岳、葉天士、吳鞠通等在著述中對體質特點的論述，乃近代體質學說發展之濫觴。歷代醫家不僅重視體質在發病過程中的重要性，而且把人體體質特點與臨床實踐相結合，進而更有效地指導辨證處方用藥。

體質學說上世紀七八十年代開始有了較為系統全面的發展，形成了系統的理論，從理論、臨床及實驗研究日益深入，取得了可喜的研究成果。如1982年，王琦編著的《中醫體質學說》一書中明確提出了“中醫體質學說”這一概念，中醫體質學說即是以中醫理論為主導，研究人類各種體質類型的生理、病理特點，并以此分析疾病的反應狀態、病變性質及發展趨向，從而指導疾病預防和治療的一門學說[2]。并概括體質學說的基本原理：體質過程論、心身構成論、環境制約論、稟賦遺傳論[3]。王琦等[4]提出人體平和質、氣虛質、陰虛質、陽虛質、痰濕質、濕熱質、瘀血質、氣郁質、特稟質等九種基本體質類型的概念及分類方法，為中醫體質研究開創了新篇章，同時也為體質學說在各科中的進一步發展奠定了基礎。

皮膚科體質學說的研究方面也有一定得發展，如謝氏等[5]對97名尋常型銀屑病患者進行中醫體質分類，發現平和質、濕熱質、氣郁質人數較多,共占總數的67.1%，其中平和質PASI評分最低，濕熱質、氣郁質患尋常型銀屑病的機率較其他體質類型高,且發病時多表現為血熱型,病情較重，平和質雖也可患病,但多表現為血燥型,病情較輕。

2 銀屑病中醫體質研究的意義 隨著中醫體質學理論體系研究的進一步深化，體質分類標準逐步客觀化，中醫體質與疾病發生發展、辨證與辨體結合用藥、運用體質學說指導疾病預防保健等方面的研究不斷深入，對中醫體質學說的研究也提出了新的要求，主要是在深度和廣度上的拓展，如中醫體質特點與疾病特征、實驗室檢查、臨床實驗研究及動物實驗研究等不同層面進行了有益地結合，探索其關聯性，為疾病的預防提供多條途徑，為更多的臨床學科開展疾病體質研究提供了新的方法和研究方向。

銀屑病為皮膚科常見病，發病因素復雜，治療棘手，通過對銀屑病患者體質研究探索該病患人群體質分類、影響因素、形態結構、心理特點等方面的科學規律，更好地運用辨病、辨體、辨證三維有機結合的中醫特色診療模式，為疾病診治、緩解期調養、高危易感人群預防提供有益的指導。貫徹了《國家中長期科學和技術發展規劃綱要》中“疾病防治重心前移，堅持預防為主、促進健康和防治疾病結合”的疾病防治精神，充分發揮中醫藥“治未病”的特色優勢。同時，借助現代科學中的生理學、臨床流行病學、免疫學、遺傳學、分子生物學、心理學、病因學等，實現中醫體質多學科交叉研究，延伸其研究范圍，促進其與科學前沿的對接。

多學科交叉、多層面研究、多中心觀察的銀屑病中醫體質研究必定給銀屑病的防治帶來廣闊的前景，筆者認為其研究的目的和意義在于：①在學術思想上深化“病理體質學說”、“未病先防”、“既病防變”、“辨質調養”等理論在皮膚科疾病中的運用；②在全國范圍內將實現大規模的銀屑病中醫病理體質流行病學調查，同時引入多種相關因素，開展分層次、多中心、縱橫結合的綜合流調策略，盡量做到調查數據真實、客觀、典型、可重復性；③將現代分子生物學檢測及早期實驗室診斷等條目引入銀屑病易感相關因素的分析中，以期提供發病微觀層面的實驗室依據；④計劃制定有中醫特色的銀屑病個性化的防治調養方案及健康管理模式，積極面向臨床推廣，方便醫護人員，造福廣大患者。

3 銀屑病中醫體質研究的思路 當前中醫體質學說的臨床研究主要為：中醫體質與證得關系研究、體質與疾病相關研究、體質與藥物治療及調體研究、體質與防治保健研究四個方面。銀屑病中醫體質研究可以從以下幾個方面開展：

3.1 流行病學調查 參考《中藥新藥臨床研究指導原則》、《中醫診斷學術語規范》等文獻，并結合歷代文獻調查結果及征詢專家意見，擬訂的《銀屑病流行病學調查表》。參照王琦編制的《中醫九種基本體質分類量表》和《中醫體質分類判定標準》制定《體質分型設計表》、《銀屑病中醫病理體質調查表》、《銀屑病中醫病理體質積分評價表》。在國內選取9大調查區域，分屬華北地區、東北地區、西北地區、中南地區、云貴川地區、兩廣地區、青藏新疆高原地區、東南沿海地區、臺灣海南海島地區等9大中心，每個中心選取1-2家醫院篩選不同類型銀屑病患者150-200例，展開銀屑病中醫體質流行病學調查。通過中醫四診資料及皮損特征進行綜合分析，以統計銀屑病患病體質類型的特異性。

3.2 發病相關因素分析 通過對銀屑病患者進行：一般情況(姓名、性別、年齡、籍貫、住址、電話等)、發病相關因素(既往病史、家族史、病程、發病緩急)、患病癥狀體征(皮疹形態、數目、大小、色澤、部位、自覺癥狀)、舌脈、皮膚?？茩z查、中醫辨證分型、西醫分類分期、輔助檢查(常規檢查、肝腎功能、組織病理)、藥物治療情況、體質類型等條目的統計。應用SPSS16.0統計軟件對《銀屑病流行病學數據庫》中數據條目進行統計學處理，先進行指標的頻數分析，所有相關因素、癥狀、舌脈等條目均變換為分類變量(0、1)，刪除出現頻率小于5%或雖大于5%但辨證意義不大的條目，保留30個常變量。分析頻數較高的發病相關因素與銀屑病中醫病理體質的關聯性，分析總結銀屑病易感危險因素及其權重系數。對所收集的中醫癥狀及體質分析條目等進行系統聚類法樣品聚類分析，列出各聚類癥狀、舌脈、體質指標頻數及百分比分布，結合中醫理論確定各聚類類別的中醫證型和中醫病理體質。

3.3 典型銀屑病體質微觀層面研究 采集銀屑病患者皮損或血液組織，采用免疫組化、基因芯片等蛋白分子生物學技術，進行銀屑病特異蛋白、易感基因、miRNA、炎性細胞因子網絡等方面的檢測，或采用皮膚屏障儀檢測銀屑病皮膚屏障指標等，并將銀屑病病癥特點、相關易感因素與實驗室微觀層面的結果進行綜合分析，探索其關聯性。

3.4 個性化綜合防治方案的制定 根據上述流行病學研究、中醫體質調查及銀屑病發病相關因素分析結果，并結合微觀層面實驗室數據，綜合分析，適當取舍，制定出初步的規范、量化、操作性強的銀屑病中醫病理體質診斷標準和銀屑病有中醫學特色的個性化綜合防治方案，同時在臨床上根據不同的患者的實際情況建立廣泛實用的銀屑病健康管理體系。

4 銀屑病中醫體質研究的問題與展望 雖然銀屑病中醫體質研究及其應用有廣闊的前景，然而在實際當中仍然存在諸多問題：①中醫體質分類涉及因素眾多，需要建立在大規模流行病學調查的基礎上，綜合考慮遺傳背景、社會心理因素、生活環境差異、職業因素、地域因素、飲食因素、形體氣質因素等，所以目前體質分類判定標準尚存爭議，需要進一步完善，形成相對科學化、規范化的國家標準；②銀屑病體質病理學研究為使具有典型性，需要經過多層次、分區域、按病程、大規模、跟蹤式的調查研究，需耗費較大的人力物力財力；③制定《銀屑病流行病學調查表》和《中醫體質量化表》，并在不同地區完成一定數量的病例統計，以及后期進行數理統計，全過程需要精細操作和復雜統計；④研究探索銀屑病與體質的相關性，從而指導銀屑病高危人群的預防、發病患者的個體化診療及緩解期患者的辨體調養，加強該病的防治的可操作性，建立具有中醫特色的銀屑病防治和健康管理模式，最終實現成果轉化，在臨床上推廣應用，其周期長、難度大。

由于人們生活習慣的改變和居處環境的惡化，銀屑病的發病率近年來有明顯增高的趨勢。隨著銀屑病機理及防治研究工作的深入，從多角度、分層次、多中心、微宏、縱橫等方面研究銀屑病發病及防治成為當前及今后臨床及實驗研究的主方向。制定銀屑病個性化的防治調養方案及健康管理模式，對廣大銀屑病患者控制病情、預防復發、改善生活質量，具有重要意義。

參考文獻

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篇4

【關鍵詞】 宮頸癌 微轉移檢測 研究進展

宮頸癌是全球婦女中僅次于乳腺癌的第二種最常見的惡性腫瘤。腫瘤的浸潤和轉移是惡性腫瘤的重要特征，也是腫瘤患者死亡的主要原因。宮頸癌盆腔淋巴結轉移是影響患者預后的重要因素。研究表明，I B-11A期的宮頸癌患者若無盆腔淋巴結轉移，其5年生存率可達85 %～90 %，而一旦有區域淋巴結轉移，其5年生存率則降為30 %～60 %。即使常規病理檢查無淋巴結癌轉移等高危因素的患者，仍有10 %的患者出現復發和轉移。目前對子宮頸癌復發和轉移的診斷技術仍然停留在傳統病理組織學水平，但是常規HE染色病理檢查對于淋巴結微小的轉移病灶(

近年來，隨著免疫學及分子生物學的發展，使宮頸癌的微轉移檢測成為可能[1]。臨床上提出了“腫瘤分子分期”的觀點，即將分子生物學的理論和技術與腫瘤的臨床分期有機地結合起來，來診斷那些常規檢查方法不能診斷的存在于全身各系統中的亞臨床轉移，使腫瘤的分期更加準確，以指導臨床治療方案的確定。宮頸癌微轉移檢測的價值就在于有助于準確的分期，從而更加有針對性的制定個體化的治療方案，減少復發和遠處轉移，改善患者的預后。通過逆轉錄聚合酶鏈反應(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)和熒光定量PCR(fluorescence quantitative-polymerase chain reaction，FQ-PCR)技術檢測CK-19和CK-20 mRNA表達來診斷宮頸癌轉移成為目前研究熱點之一。

1 微轉移概述

自1869年Asworth首次在外周血中發現癌細胞以來，腫瘤微轉移逐步引起人們的重視。微轉移(micrometastases，MM)又稱隱性轉移(occult metastasis)，一般指非血液系統的惡性腫瘤在發展過程中，播散并存活于淋巴系統、血循環、骨髓、肝、肺等組織器官中的微小腫瘤細胞灶。它可以是單個瘤細胞或獨立的瘤細胞灶，無特殊血供，直徑小于2 mm，常無任何臨床表現，能夠逃脫免疫監視、侵犯血管和發展成為肉眼可見的病變。常規檢查方法如CT、MRI、單抗放射顯影技術、普通病理檢查都很難發現。文獻中對MM也有下列不同的稱謂，如循環腫瘤細胞(circulating tumor cell，CTC)、潛伏腫瘤細胞(occult tumor cell，OTC)、微小殘存灶(minimal residual disease，MRD)、播散腫瘤細胞(disseminated tumor cell，DTC)、游離腫瘤細胞(isolated tumor cell，ITC)等。在不同的組織中這一概念又有具體的含義，如淋巴結MM指常規組織學水平淋巴結切片未能檢出的轉移;在血液中，常規方法不能檢測出腫瘤細胞，故任何能檢出的血循環中的瘤細胞均屬MM;骨髓的MM則指在骨髓抽吸和活檢標本中檢出了瘤細胞，而患者無任何臨床上和放射影像上遠處或骨髓轉移的證據[2]。研究認為，臨床轉移一般由MM發展而來，但僅少數MM最終能發展為臨床轉移。MM的瘤細胞灶常以單個細胞或微小細胞團形式存在，通過淋巴系統、血液循環轉移至其它組織器官。也可以直接侵襲周圍組織或種植于體腔。MM發展成為臨床轉移至少經過4個階段：(1)微量腫瘤細胞自原發灶脫離;(2)適應新宿主代謝環境，逃避宿主機體免疫監控;(3)侵襲正常組織，在新宿主組織中存活并增殖;(4)在新宿主中新血管形成，腫瘤生長。MM的轉歸取決于癌細胞的細胞生物學特性、機體的免疫狀態及宿主器官的微環境。動物實驗表明血循環中至少有10 000個腫瘤細胞才可以顯性轉移，多數發生凋亡，少數進入休眠期，極少數發生增殖。MM灶可長期處于G0期，其增殖與死亡處于平衡狀態，只有當機體遭受種種打擊或免疫力下降時，休眠中的腫瘤細胞擺脫抑制狀態而持續增殖并發展為臨床顯性轉移。

2 MM檢測研究現狀

2.1 MM檢測方法

2.1.1 連續切片 連續切片是最早用于檢測淋巴結轉移的一種粗略方法，主要是針對手術切除的淋巴結，可使陽性率增加20 %，但缺點是敏感性差且工作量大、粗糙，不適用于血循環、骨髓的MM檢測，難以推廣。還有應用淋巴結廓清術(clearance technique)(二甲苯-乙醇清除術)和組織培養法、組織微陣列(tissue microarray，TMA)等技術進行MM檢測的報道[3]。

2.1.2 免疫學技術 免疫學技術大約有免疫組織化學技術(immunohistochemical technique，IHC)、免疫熒光法(immunofluorescence assay，IFA)、放射免疫導向法(radioimmunoguided surgery，RIGS)、流式細胞分析法(flow cytometry，FCM)，這些都具有重要應用價值，但是由于抗體的標化和選擇、單抗的質量、交叉反應、機體產生自身抗體、結果判斷缺乏客觀統一標準等因素影響其敏感性和特異性。

2.1.3 免疫磁珠分離技術(Immunomagnetic separation，IMS) IMS是新近建立的方法，用以改進血循環中單個瘤細胞的檢測。經此方法得到的細胞再進行mRNA分離。富集的樣本可以準備作IHC、FCM、IFA、RT-PCR檢測，比傳統的采用全血直接用于RT-PCR的方法敏感性提高約10倍，可有效檢出107個全細胞中的一個腫瘤細胞。另外，通過IMS分離得到的細胞進行PT-PCR研究，可以有效避免由血液不正常轉錄而導致的假陽性的產生，提高RT-PCR檢測方法的特異性。

2.1.4 分子生物學方法 檢測MM的分子生物學方法有核酸雜交法(如Southern、Northern印跡雜交法)、突變等位基因特異性擴增法(mutant allele-specific amplification，MASA)、聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)、逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)及近年出現的熒光定量PCR技術(fluorescence quantitative- polymerase chain reaction，FQ-PCR)。PCR技術又稱體外基因擴增方法，由美國的Kary Mullis博士在1983年發明，并于1985年公開報道，1993年榮獲諾貝爾獎。1991年Smith等首次應用PCR技術檢測到血循環中存在轉移的腫瘤細胞。之后PCR技術被廣泛應用于MM的研究。PCR、RT-PCR檢測具有高度敏感性、特異性，可準確檢測1 g組織或1 mL液體中的1個癌細胞[4]，被認為是目前檢測MM的最有效的方法。RT-PCR具有較高的敏感性和特異性，檢測時間相對較短，能在24～48 h內得出結果，同時可檢測多個標本;免疫組化法僅能反映標本的局部，而RT-PCR能反映整個標本的情況;RT-PCR操作方法固定，相對易標準化和易控制，人為干擾因素少，且判斷結果較形態學方法客觀且準確。其缺點是技術要求較高，嚴格要求新鮮標本及其迅速處理，易受污染。還有PCR結合單鏈DNA構型多肽分析(PCR-SSCP)、異源雙鏈分析法(HA)、等位基因特異性寡核苷酸雜交法(PCR-ASO)、PCR產物的限制性片段長度多肽分析法(PCR-restriction-fragment-length-polymorphism assay，PCR-RFLP)、DNA直接測序技術(DS)。FQ-PCR技術是由美國Applied Biosystems公司在1996年率先研制成功的熒光定量技術。該技術是根據熒光共振能量轉移(fluorescence resonance energy transfer，FRET)原理，設計相應的熒光標記核酸探針，通過PCR反應對相應靶DNA進行均相定性定量測定的技術[5]，具有操作簡便、快速、結果判斷客觀、重復性能好、定量范圍寬(可包括0～1 014個拷貝/L)、無需樣品梯度稀釋、高靈敏性、高特異性、高精確性的特點，采用完全封閉式的操作系統，不需PCR后處理，克服了傳統的PCR技術易受污染、造成假陽性等諸多缺點。配以相應的熒光PCR儀，整個PCR過程可實現自動化，且耗時短、操作方便，較之傳統的定量方法勞動強度小，易于標準化和推廣應用。因此，FQ-PCR技術是基因診斷、療效評價、技術創新和臨床研究的高新技術手段，具有廣泛的開發應用前景。

2.2 MM檢測的標志物 當今，分子生物學研究發現腫瘤標志物種類眾多，MM檢測的特異性取決于檢測的標志物。標志物主要包括以下幾類：(1)特異性基因:包括染色體異常、基因點突變、基因缺失等。正常組織一般不伴有這些改變，檢測相關特異性基因可診斷MM，如p53、ras、DCC、erbB-2等。(2)腫瘤特異性標志物:指在腫瘤細胞中存在而在正常細胞中不存在，如癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)、酪氨酸酶、前列腺特異抗原(PSA)、人瘤病毒(HPV)、易位融合基因EWS-FLI1等。RT-PCR或者FQ-PCR法檢測CEA mRNA常用來檢測各種消化道腫瘤和乳腺癌的MM。酪氨酸酶是黑色素細胞和黑色素瘤細胞合成黑色素的關鍵酶，此酶基因轉錄物的檢出可提示轉移性黑色素瘤的存在。(3)組織特異性標志物:指在腫瘤起源組織中存在，而在其他組織中不存在，特別是在淋巴細胞和血細胞中不存在，如粘蛋白(mucin)、細胞角化蛋白(cytokeratin，CK)、雌激素受體(ER)及腫瘤抑制基因maspin等。組織特異性標志物及其基因只在特定的組織中表達，如CK僅在上皮組織中表達，正常情況下不存在于間質組織中。如果在間質組織中擴增出CK的表達，則表明有上皮源性腫瘤細胞播散到間質組織中。文獻報道，CK19、CK20、多形上皮粘蛋白的核心蛋白(MUC1)這幾種標志物都在上皮組織以及上皮來源的腫瘤中高度表達，在正常淋巴結和外周血中均無表達，顯示了較好的特異性，因此可作為乳腺癌、胃癌、肺癌、結直腸癌及官頸癌等起源于上皮組織腫瘤的組織特異性標志物[5]。(4)轉移特異性基因。(5)腫瘤伴隨的病毒。利用任何一種標志物雖然都可能建立一種檢測MM的方法，但理想的標志物應同時具備敏感性和特異性。

3 宮頸癌MM的研究

MM的檢測在多種腫瘤的研究中顯示出較好的臨床應用價值。在乳腺癌、肺癌、胃腸癌、肝癌、胰腺癌、食管癌等實體瘤的研究中，人們已發現MM的陽性檢出率與患者的預后有密切關系，并可早期診斷腫瘤的復發和遠處轉移[6]。研究表明由于90 %以上的宮頸癌患者可檢測到人瘤病毒(HPV) DNA，HPV DNA的E6/E7基因整合到宿主基因并穩定表達與宮頸癌發生、發展關系密切，因此對宮頸癌MM的研究，多年來人們主要將焦點放在盆腔淋巴結及外周血中HPV基因的檢測上。

研究報道宮頸癌淋巴結HPV檢出率為14 %～71 %，宮頸鱗癌轉移灶HPV16的陽性率為71 %(5/7)。Burnett采用PCR技術檢測了21例IB期宮頸癌患者盆腔淋巴結HPV的表達，常規組織病理學證實陰性的74個淋巴結中，復發患者的HPV DNA檢出率71 %，顯著高于未復發患者35 %，提示該指標是復發的高危因素。Ikenberg等[7]檢測了21例IB～IIB期HPV16陽性宮頸癌患者的淋巴結，常規病理組織學證實淋巴結均無癌轉移，隨訪后發現淋巴結顯示HPV強陽性的12例患者中，8例患者于3年內死亡，而無HPV強陽性的患者均長期存活。從而提示HPV DNA有助于早期判斷高危患者，指導術后輔助治療。但也有不同的研究結果報道，Czegledy等[8]檢測了31例宮頸癌患者的157枚淋巴結HPV16 DNA的表達，陽性率為71 %(22/31)，其中復發組的檢出率為75 %(6/8)，而無復發組為70 %(16/23)，研究者認為HPV16 DNA的表達尚不能用于判斷預后。

研究報道宮頸癌外周血HPV的檢出率為20.0 %～92.3 %。Liu等[9]檢測了60例宮頸癌患者治療前的外周血HPV DNA，陽性率為20 %(12/60)。Pao等[10]應用巢式RT-PCR技術檢測15例Ⅳ期宮頸癌患者外周血的MM，結果顯示15例患者的癌組織中HPV16陽性率為86.7 %(13/15)，這13例癌組織HPV16陽性患者外周血的HPV16檢出率為92.3 %(12/13)，而HPV陰性患者和正常對照組均未檢測到HPV16，從而提示宮頸癌患者外周血中HPV16 mRNA的存在可作為循環腫瘤細胞的一個敏感指標。Tseng等[11]檢測了35例局部晚期宮頸癌患者的外周血HPV16、HPV18 mRNA的表達，陽性率為51.4 %(18/35)，隨訪22個月，18例陽性者中10例復發，而17例陰性者中僅3例復發，結果提示外周血HPV E6可用于預測遠處轉移。但由于并非所有的宮頸癌患者均有HPV16、HPV18感染，而且其他腫瘤如鼻咽癌、乳腺癌也發現與HPV感染有關，因此將HPV作為MM的檢測尚有一定的局限性。

近年來研究者開始將目光轉向了組織特異性標志物。Czegledy等[12]報道宮頸癌淋巴結CK mRNA的陽性率為27.5 %(16/69)。Van Trappen等[13]采用實時定量RT-PCR技術檢測了宮頸癌患者的CK19 mRNA的表達。研究發現常規組織病理方法顯示無癌轉移的淋巴結中44 %(66/150)檢測到了CK19表達，而良性病變對照組32枚淋巴結中只有1枚呈現CK19低水平表達。研究提示早期宮頸癌中約有50 %盆腔淋巴結存在MM，遠高于常規病理診斷陽性率16 %～33 %。Juretzka等[14]采用免疫組化法檢測了49例IA2～IB2宮頸癌患者的976枚盆腔淋巴結標本，這些患者的淋巴結經常規病理檢測均為陰性，研究結果顯示8.1 %(4/49)的淋巴結病理陰性患者免疫組化法顯示有MM，淋巴結陽性率為0.41 %(4/976)。隨訪結果顯示50 %MM的患者出現復發，而無MM的患者中復發率為6.7 %。Yuan等[15]則采用RT-PCR技術檢測了84例I B～II B期宮頸癌患者的外周血中的MM，在排除假基因的干擾后，分析結果顯示21.4 %的患者外周血中CK19 mRNA呈現陽性，而良性病變患者的陽性率為5.7 %，正常對照者為0。但分析結果并未顯示檢出率與分期、盆腔淋巴結轉移等預后因子之間的相關性。陳雅卿等[16]采用RT-PCR法術前檢測250例Ⅰ A～Ⅱ A期宮頸癌患者和50例婦科良性腫瘤患者及18名健康自愿者外周血中CK19、CK20 mRNA的表達，250例早期宮頸癌患者外周血中CK19、CK20 mRNA的陽性表達率分別為36 %和24 %，而在婦科良性腫瘤中分別為3.0 %和0 %，18例健康自愿者無1例表達CK19、CK20 mRNA陽性;CK19、CK20 mRNA的單獨陽性表達率除與脈管瘤栓顯著相關外，與宮頸癌的預后因素如分期、分化、組織類型、淋巴結轉移、腫瘤大小均無關，而CK19、CK20 mRNA雙陽性表達與淋巴結轉移和脈管浸潤及近期盆腔外的轉移顯著相關，表明外周血中CK19、CK20 mRNA的表達可以作為檢測早期宮頸癌MM的生物學指標，但對預后的意義有待于進一步研究。程璽等[17]采用RT-PCR技術檢測Ⅰ～Ⅱ期宮頸癌患者盆腔淋巴結CK19 mRNA的轉錄，對32例宮頸癌患者共檢測淋巴結標本206枚，經常規病理組織學方法檢測到24枚淋巴結有癌轉移，陽性率為12 %(24/206);經RT-PCR法檢測到44枚淋巴結表達CK19 mRNA，檢出率為21 %(44/206)，RT—PCR法與常規病理組織學方法比較，差異有統計學意義。常規HE染色陰性的182枚淋巴結中，29枚檢測到CK19 mRNA的特異性條帶，MM的檢出率為15.9 %(29/182);低分化患者的淋巴結CK19檢出率為87.5 %(7/8)顯著高于中、高分化患者的檢出率33.3 %(8/24);而淋巴結CK19的檢出率與年齡、臨床分期、組織學類型、宮頸腫瘤大小、肌層浸潤深度、宮旁浸潤、脈管癌栓均無明顯關系。淋巴結CK19 mRNA陽性患者的4年無瘤生存率為58 %;而淋巴結CK19 mRNA陰性患者的4年無瘤生存率為76.5 %，差異無統計學意義。與傳統的病理組織學比較，采用RT-PCR技術檢測CK19 mRNA轉錄能顯著提高淋巴結MM的檢出率，預后判斷有待增大病例數進一步研究。

Wang等[18]利用RT-PCR和IHC檢測早期宮頸癌前哨淋巴結(SLN)的MM比常規的病理學方法敏感，RT-PCR檢測CK19的陽性率是42.85 %，IHC檢測是20 %，RT-PCR檢測早期宮頸癌前哨淋巴結(SLN)比IHC敏感，因此SLN分子評價是補充常規組織學檢查一個有價值的工具。Bats等[19]認為前哨淋巴結(SLN)活檢可以提高早期宮頸癌的分期，但需大量人口研究來評價SLN活檢的臨床意義。

也有研究者以鱗狀細胞癌抗原(squamous cell carcinoma antigen，SCCAg)為標志物檢測宮頸癌患者外周血。Duk等[20]采用酶聯免疫檢測法的研究結果顯示，患者的血清SCCAg陽性率為55.7 %(295/529)，多因素分析結果顯示，SCCAg可作為宮頸癌的獨立預后指標。Stenman等[21]采用RT-PCT技術檢測15例患者的外周血SCCAg的陽性率為40 %(6/15)，隨訪2年，6例SCCAg陽性者中3例復發，而9例陰性者1例復發，1例病情進展，結果顯示該指標有助于宮頸癌的分期和預后判斷。

4 結語

宮頸癌治療失敗往往與一些臨床病理因素有關，其中淋巴結轉移被公認為是影響預后的重要因素。但我們對淋巴結轉移的診斷技術仍然停留在傳統的病理組織學水平，如果能夠盡早地診斷淋巴結和脈管中的MM，就能夠更有針對性地制定個體化的術后輔助治療，減少復發和轉移，提高患者的生存率和生活質量。基因標志物的選擇是MM得以準確檢出的關鍵。細胞角蛋白家族中的CK20和CK19作為上皮組織來源的組織特異性標志，是文獻報道中檢測MM應用最多的基因標志。但研究報道結果不同，甚至相反，這是由于CK19基因表達時存在假基因的干擾。進行引物重新設計和檢測后，解決了假基因干擾這一研究中的關鍵問題。

由于腫瘤轉移過程機制復雜，影響因素眾多，不少地方尚存在爭議，MM的臨床意義也有待進一步研究，檢測的方法有待統一，檢測結果有待標準化。MM的轉歸取決于癌細胞的生物學特性、機體的免疫狀態及宿主器官微環境，即MM不是必然發生腫瘤的復發和轉移，但它提示發生復發和轉移的可能性大。普通PCR技術本身存在一定的缺點，如：(1)因未直接見到癌細胞，既使存在突變型基因或基因產物，也不一定存在活的腫瘤細胞;(2)PCR技術極為敏感，需要有經驗的技術操作;(3)污染基因物質可產生假陽性結果;(4)擴增mRNA常需新鮮標本，庫存的石蠟包埋塊有時不適用于RT-PCR測定;(5)激素干擾可下調標記基因的表達，因之產生假陰性結果。另外，PCR檢測費用昂貴，限制了其廣泛的臨床研究，對早期的診斷意義也不大。腫瘤的復發、轉移是多階段過程，故腫瘤MM的確切意義和臨床價值尚待進一步商討，與預后的確切關系有待進一步觀察。宮頸癌MM的檢測有待于大規模的前瞻性隨機研究證實。這些都是宮頸癌MM檢測有待解決的問題。相信隨著分子生物學技術的不斷發展以及對宮頸癌癌基因和腫瘤相關抗原研究的深入，對MM檢測的不斷認識和研究，將建立更科學的檢測方法，揭示MM的機制，會逐步確定CK20、CK19在宮頸癌中的臨床應用價值，明確MM與臨床轉移、復發、生存期的關系，為臨床惡性腫瘤的病情判斷、治療以及預后評估提供更好的依據。

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篇5

關鍵詞：組織培養；新技術；應用現狀；發展趨勢

中圖分類號：Q943.1 文獻標識碼：A 文章編號：1003-2738（2012）06-0322-01

引言

植物組織培養是20世紀之初，以植物細胞全能性為理論基礎發展起來的一門新興技術，是指在無菌條件下，將離體的植物器官、組織、細胞以及原生質體，在人工配制的環境里培養成完整的植株，也稱離體培養或植物克隆。自1902年德國科學家Haberlandt提出植物細胞具有全能性理論, 到1934 年美國White 等用番茄根進行離體培養證實這一觀點以來,植物離體培養技術在基礎理論和應用研究，已廣泛應用到植物生理學、病理學、藥學、遺傳學、育種以及生物化學等各個研究領域, 成為生物學科中的重要研究技術和手段之一[1]。近年來，隨著科學技術的不斷發展，植物組織培養新方法和新技術不斷涌現，研究重點也由器官、細胞水平向分子、基因方向轉移。21世紀，生物技術是最有生命力的一門學科，而植物組織培養作為一種基本的試驗技術和基礎的研究手段，被認為具有巨大的潛力。

一、植物組織培養新技術的研究

隨著科學技術的發展和對植物組織培養技術的不斷深入研究，一些新的培養方法和技術不斷出現，為植物組織培養技術的不斷優化和發展提供了新的途徑。

1.新型光源的應用。

光是植物生長發育必不可少的重要因素之一，光照長短、光質、光周期對植物的生長、形態建成、光合作用、新陳代謝以及基因表達均有調控作用。傳統的組織培養光源燈普遍存在壽命短、發熱量大且不均以及發光效率不理想等缺點。LED作為植物組織培養光源早在1991年就有栽培試驗。研究發現, 光質比例和光照強度可調的LED 光源比通常植物組織培養使用的熒光燈更能有效地促進試管苗的光合作用和生長發育。蔣要衛利用LED作為大花蕙蘭組培苗光源的研究發現, LED光源可以顯著改善大花惠蘭試管苗的生長狀況和提高其品質[2]。日本的田中道男等運用陰極熒光燈( CCFL)作為文心蘭試管苗光源, 結果表明其地上部干、鮮重和試管苗的高度都有顯著提高。另外田中道男等利用SILHOS作為生菜組織培養光源, 獲得了高質量的組織培養苗。目前LED是組織培養中最有效的人工照明光源，而CCFL等新型光源是未來發展的主要方向。

2.開放組織培養技術。

傳統的植物組織培養屬于嚴格的封閉式培養，因而造成滅菌成本偏高、培養基易污染、外界環境調控難度大等缺點。而開放組織培養新技術是在外加抗菌劑的條件下，使植物組織培養脫離嚴格無菌的操作環境，在自然開放的有菌環境中進行，恰好彌補了這些不足。趙青華等采用開放式組培技術，在培養基中添加抑菌劑，克服了非滅菌條件下魔芋組織培養污染問題，有效地簡化了實驗步驟，降低了生產成本[3]。何松林的研究表明在添加抗菌劑的開放式組培中，文心蘭試管苗可正常生長[4]。開放式組織培養突破了封閉式培養的限制，從根本上簡化了組織培養環節，使將來規?；_放式組織培養成為可能。

3.光獨立培養技術。

光獨立培養法又稱無糖培養法，是指利用CO2代替葡萄糖作為植物組織培養的碳源，人工控制組織培養苗生長所需的光、溫、水、氣、營養等條件，促使組織培養苗快速轉變為自養型的培養方式。一方面避免了由葡萄糖引起的雜菌污染；另一方面，增強了組織培養微環境的人工調控能力。屈云慧等以虎眼萬年青為對象的無糖培養研究表明萬年青再生芽的生根率高, 種苗質量也優于常規培養[5]。肖玉蘭、丁永前等設計的全套無糖組織培養設備培育出的苗具有抽葉多、植株健壯、節間距短、根系發達、干物重積累多、光合自養能力強等更優良的生物學性狀。目前，無糖培養法還處于理論研究和應用的開始階段，隨著理論研究的不斷深入及相關配套技術的不斷完善， 必將成為組織培養技術的一種重要手段。

4.多因子綜合控制技術。

近年來，隨著對植物組織培養機理的深入研究和交叉學科間的相互促進作用，多因子綜合控制的環境調控設施越來越多的應用到實際生產中，大大降低了組織培養成本, 促進了組織培養苗商品化的進程。崔謹等運用CO2 監控系統對甘薯組培苗進行調控的結果表明, 在CO2監控系統方式下培養的甘薯組培苗, 具有生長迅速、光合產物積累明顯、葉色深綠、根系發達等特點[6]。劉文科等設計了一種新型密閉式組培室, 并研制出一套用于該組培室的綜合環境控制系統[7]。李傳業等設計的一套能對組培箱內CO2濃度、相對濕度進行調控的組織培養微環境控制系統試驗結果表明, 組織培養箱內CO2摩爾分數和相對濕度達到了預期目標。

二、植物組織培養的應用研究

植物組織培養技術的應用主要理論基礎有兩方面。一是細胞全能性，植物修復與完善、快繁脫毒苗、育種、種子和種質資源保存、植物檢疫等都是其發展和應用的成果。二是懸浮培養液，主要應用于植物次生代謝產物的提取。

1.“全能性”的應用。

植物修復與完善是模擬植物組織培養過程中器官形成和細胞增殖形成的一套全新理論， 植物脫毒和離體快速繁殖是目前植物組織培養應用最多、最有效的一個方面，因其快速、無毒的特點，已經廣泛應用于觀賞植物、園藝作物、經濟林木、無性繁殖作物，并已形成產業化、商品化。植物組織培養技術為培育優良作物品種開辟了新的途徑，利用該技術，通過花藥和花粉培養、胚胎培養與細胞融合、細胞無性系變異、基因工程及突變體篩選等手段，已經培育出一大批具有優良性狀的植株。借助植物組織培養技術保存種子和種質資源，因其優于常規方法的特殊性越來越受到重視，已在1000多種植物種和品種上得到應用, 并取得很好的效果。

2.愈傷組織或懸浮培養液的應用。

植物次生代謝物如蛋白質、脂肪、糖類、藥物、香料、生物堿及其他活性化合物是許多醫藥、食品、香料、色素、農藥和化工產品的重要原料, 其需求量逐年增加。目前，利用組織培養技術提取植物次生代謝產物因其高效率、高產量的優勢已成為主流。用組織培養方法生產微生物以及人工不能合成的藥物或有效成分的研究, 正在不斷深入, 有些已投入工業化生產,預計今后將有更大發展。

三、展望

植物組織培養技術不僅是植物生物學和生物化學領域研究的一個重要的工具，在分子生物學和農業生物技術的研究中也具有重要意義。未來，一方面植物組織培養會借助更多的高新新技術向高效化、智能化、產業化方向發展。另一方面，在生產應用上會不斷開辟新的領域。但是, 長期以來, 組織培養幾乎停留在試驗研究上, 在應用生產方面仍有許多局限性。因此, 今后對植物組織培養技術的應用方面需要進一步研究, 以充分發揮它的應用潛力。

參考文獻：

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[2]蔣要衛.大花惠蘭、蝴蝶蘭試管苗光合自養培養體系初步建立[碩士論文].鄭州: 河南農業大學,

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篇6

關鍵詞：盆栽花卉；土傳病害；防治技術

中圖分類號：S432

文獻標識碼：A 文章編號：1674-9944（2017）07-0181-04

1 引言

山東省濰坊市，是全國花卉重要的產銷大市。濰坊市下轄的青州市，是中國古代九州之一，是中國著名的花卉之鄉，素有“東方花都”之美譽，是中國北方最大的盆栽花卉集散中心、花木集散中心、花卉物流中心和盆栽花卉價格形成中心?！爸袊ㄇ嘀荩┗ɑ懿┯[交易會”是國內著名的花卉展會，從2001年開始，每年的九月份定期在“青州花卉苗木交易中心”舉辦，至今已成功舉辦了16屆。濰坊市位于山東半島的中部，地跨北緯35°41′～37°26′，東經118°10′～120°01′。濰坊市氣候特點：濰坊地處北溫帶季風區，背陸面海，屬暖溫帶，季風型，半濕潤，大陸性氣候；年平均氣溫12.6 ℃，年平均降水量615.3 mm，年平均風速3.0 m/s；光照充足，無霜期為198 d。這樣的氣候特別適合各種北方盆栽花卉的栽培N植，也非常適宜盆栽花卉土傳病害的發生。

濰坊市栽培種植的盆栽花卉種類繁多，如君子蘭、蝴蝶蘭、馬蘭、二月蘭、郁金香、杜鵑、仙客來、一品紅、一串紅、海棠、碧桃、八寶景天、虞美人、美人蕉、萬壽菊、翠菊、國慶菊、金雞菊、松果菊、荷蘭菊、波斯菊、釣鐘柳、玉贊、鳶尾、孔雀草、薰衣草、彩葉草、百日草、金娃娃萱草、驅蚊香草、太陽花、牽?；?、長春花、雞冠花、四季海棠、三色堇、報春、羽衣甘藍等。

盆栽花卉土傳病害是一類毀滅性病害，主要危害花卉的根部和莖基部，花卉生長前期一旦發生此類病害，幼苗的根或者莖基部就會腐爛，幼苗很快就會死亡，嚴重影響花卉的生長和發育；花卉生長后期發生此類病害，能導致植株大量死亡，嚴重影響經濟效益。土傳病害發生后，很難防治，病菌藏在土壤中越冬，來年繼續侵害植物，如此循環，病害越來越嚴重。盆栽花卉土傳病害是世界范圍內為害花卉最嚴重的一類病害，被侵染的花卉有成百上千種。因此，解決好盆栽花卉土傳病害的防治問題顯得越來越重要，對其安全防控已成為花農關注的大事。

2 盆栽花卉土傳病害概述

盆栽花卉土傳病害是指生活在土壤中的一些病原體（如真菌、細菌等），在條件適宜時，侵染花卉的根部或莖基部而引起的一類病害。其種類包括：①真菌病害：根腐病、枯萎病、黃萎病、疫病、立枯病等；②細菌病害：青枯病、軟腐病等。盆栽花卉土傳病害的病原體寄主為成百上千種花卉以及其他植物。盆栽花卉土傳病原菌的生存，一般情況下，盆栽花卉土傳病原菌能產生大量的菌體，只要條件對病菌生長有利，而寄主又是感病的，病菌就能大量繁殖，侵染植株。如果寄主養分被消耗完，或者土壤溫度、濕度等對病菌不利時，病菌又可以進入休眠期，等到條件適宜時，又再度繁殖。

2 造成盆栽花卉土傳病害發生嚴重及流行的關鍵因素

2.1 不重視檢疫

在引種時，忽視檢疫，引入的種苗上帶有土傳病原菌。

2.2 不換土

連年栽種同一種花卉，使土傳病原菌得以連年繁殖，在土壤中大量積累，導致土傳病害越來越重。

2.3 肥水管理不當

（1）盆栽花卉長期單一施用化肥，尤其是氮肥，可以刺激花卉土傳病原菌中的鐮刀菌、輪枝菌、絲核菌等生長，從而促進了土傳病害的發生。

（2）施用土雜肥料以及油渣、豆餅等有機肥料，沒有經過高溫處理（發酵），未充分腐熟，將病原菌帶入花盆的土壤中。

（3）肥水管理不當造成根系受傷，也會加重土傳病害的病情。筆者在一個花卉大棚中，發現有些花盆中有許多死棵，拔出已萎焉的植株發現，只有近地面的根部有少許毛細根，其他的毛細根和主根都已腐爛。經了解，該花卉管理人為促進花卉的快速生長，加大了澆水量和施肥量。因澆水太勤，使得植株根系長時間處于缺氧狀態，引發了漚根；因大量施肥而造成根部產生大量傷口，為病菌的入侵創造了條件，導致根部病害發生嚴重。

2.4 盆栽花卉土壤酸化

隨著盆栽花卉栽培年限的延長，土壤酸化程度加劇，盆栽花卉土傳病害的發生及為害加重。山東省某些區域，pH值6.0的土壤達50%以上；pH值5.5的土壤占30%；有些土壤pH值4.5。

2.5 土壤不消毒

現在很多花農在盆栽花卉移栽定植的時候都會配制藥液蘸根，對苗子根系進行殺菌消毒處理，并剔除弱苗，他們認為這樣就能將根腐病、疫病等防住，但是定植以后卻發現，仍然會出現大量的爛根死棵的情況。這是為什么呢？因為忽略了對土壤的消毒處理。之所以稱之為土傳病害，是因為土壤就是這些有害菌繁殖傳播的大本營，僅對苗子進行處理而不重視土壤的消毒，這無疑是治標不治本。

2.6 藥劑使用不當

盆栽花卉的土壤中，含有多種有害菌，不同的致病菌導致不同的病害，需要正確診斷花卉土傳病害的種類，選用相應的藥劑和施藥方法，才能有效治療，否則，一旦診斷失誤，使用藥劑不當，不但治不了病，還會因錯過了最佳的防治時期而使病害更加嚴重。

2.7 病原菌對藥劑的抗性增強

長期連續施用同一種藥劑，會增強病原菌對該藥的抗性。

3 防治盆栽花卉土傳病害的誤區

防治盆栽花卉土傳病害的最大誤區有兩個：①不搞預防，病害發生了才防治。②不搞綜合防治，只用化學藥劑防治，忽視了檢疫、農業防治、生物防治，尤其是忽視了有益菌的應用。這違反了“預防為主，綜合防治”的植物保護工作方針。

4 盆栽花卉土傳病害的集成防控技術

長期的生產實踐證明，任何一種防治方法都不是萬能的，必須采用集成防控（即綜合防治）的方法。集成防控體系是對有害生物進行科學管理的體系，其基本要點是：從花卉業生態系統總體觀點出發，根據有害生物和環境之間的相互關系，充分發揮自然控制因素的作用，因地制宜協調應用必要的措施，將有害生物控制在經濟損失允許水平之下，以獲得最佳的經濟效益、生態效益和社會效益。集成防控的四個主要觀點：①“經濟”觀點，講究實際收入；②“協調”觀點，講究相輔相成；③“安全”觀點，講對人畜、作物、有益生物、環境的安全，講究長遠的生態效益；④“全局”觀點，講究取得最佳綜合效果。盆栽花卉土傳病害的防控，涉及花卉大棚與花圃的土壤消毒、苗床消毒、種苗消毒、移栽消毒、生長期病害的預防和治療等。其集成防控技術主要包括“檢疫、農業防治、化學防治、生物防治”四個方面。

4.1 檢疫

這是貫徹“預防為主，綜合防治”的植物保護工作方針、保障盆栽花卉業生產持續發展的重要措施，對盆栽花卉土傳病害的防控具有重要意義。盆栽花卉的任何一種土傳病害的發生都有其地域性，在原產地，由于長期相互適應的結果，以及病原體受到某些天敵因子的控制而處于一種動態平衡中。這些病原體隨著種子、苗木、病土等的調運而擴散蔓延，傳入新的地區后，因無原產地的天敵因子控制，如果環境條件適宜，就會大量發生危害，其危害程度往往比原產地更為嚴重。國家設立的檢疫機構，會對國外輸入的和國內輸出的以及國內各地區之間調運的花卉種子、苗木等進行檢疫，禁止或限制危險性病原體的傳入和輸出；或者在其傳入以后，限制其傳播，消滅其危害。

4.2 農業防治

（1）選用抗病或耐病的盆栽花卉品種。可大大地減輕花卉土傳病害的危害，這是最經濟有效的防治方法。

（2）建立無病的盆栽花卉種苗基地，培育壯苗。盆栽花卉的種子、苗木和其他繁殖材料能傳播多種病原體，因此，建立無病盆栽花卉種苗基地，是防控花卉種苗傳播土傳病害的有效措施之一。建苗床要分三步：①選用無菌基質配制好營養土。②建苗床要實行“膜上土下滲灌”的方式，即先在苗床底部鋪好薄膜，然后鋪設沙礫或小石子，上面再鋪好營養土。③調控好苗床的光照、溫度、濕度等，促成壯苗。此項措施，也可以和化學防治措施中的種子消毒和苗床消毒同時進行。

（3）采用抗性砧木嫁接技術。選擇砧木合適與否，是決定嫁接成活率與防治效果的基礎和前提。良好的砧木應具備三個條件：①與接穗有良好的親和力和共生能力；②具有較強的抗（耐）病性，最好是對花卉枯萎病、黃萎病、根腐病、疫病、青枯病等土傳病害達到高抗或免疫程度。③具有較強的抗逆性（耐寒、耐熱、耐濕等）。

（4）科學施肥?？茖W施肥能改善土壤理化性狀和盆栽花卉的營養條件，提高花卉的抗性和愈傷能力。若施肥不當，會加重盆栽花卉土傳病害的危害，如偏施氮肥，會使花卉徒長，降低抗性，所以要避免偏施氮肥，適當增施磷、鉀肥，提高花卉抗病性。增施有機肥。有機肥有機質含量大、營養元素豐富，是當前改良沃土、經濟有效的主措施之一。土雜肥料以及油渣、豆餅等有機肥料，必須經過高溫處理（發酵），充分腐熟，嚴防肥料將病原菌帶入土壤。

（5）科學澆水。要根據盆栽花卉的需水特點科學澆水，嚴防澆水過量造成漚根。土壤濕度大時，有利于病原菌繁殖和侵染。

（6）酸化、堿化、鹽化土壤改良。調控盆栽花卉土壤pH值是預防和控制盆栽花卉土傳病害的有效措施之一。施用土壤調理劑，調酸堿、降鹽分，以利于盆栽花卉生L，抑制病原菌繁殖。

4.3 化學防治

4.3.1 根據盆栽花卉土傳病害的種類，選用相應的安全藥劑

（1）常用的殺真菌化學藥劑：50%多菌靈WP、50%苯菌靈（苯來特）WP、70%甲基托布津（甲基硫菌靈）WP（日本曹達株式會社）、99%f霉靈SP；20%氟嗎啉WG、25%阿米西達（嘧菌酯）SC（英國先正達公司）、25%甲霜靈WP、64%殺毒礬（8%f霜靈+56%代森錳鋅）WP（瑞士先正達作物保護有限公司）、72%克露（8%霜脲氰+64%代森錳鋅）WP（美國杜邦公司）、72.2%普力克（霜霉威鹽酸鹽）AS（德國拜耳公司）、80%烯酰嗎啉WG、90%乙膦鋁SP；75%達科寧（百菌清）WP（瑞士先正達作物保護有限公司）、80%大生M-45（代森錳鋅）WP（美國陶氏益農公司）；10%世高（苯醚甲環唑）WG（瑞士先正達作物保護有限公司）、20%三唑酮EC、43%戊唑醇SC等。

（2）常用的殺細菌化學藥劑：20%葉枯唑（葉青雙、噻枯唑）WP、50%氯溴異氰尿酸SP等。

（3）常用的有機和無機銅制劑：一般既殺真菌又殺細菌。如12%松脂酸銅EC、30%DT（琥膠肥酸銅）WP；25%絡氨酮水劑、27.12%銅高尚（三元硫酸銅，堿式硫酸銅）SC（澳大利亞紐發姆有限公司）、46.1%可殺得叁千（氫氧化銅）WP（美國杜邦公司）、77%多寧（硫酸銅鈣）WP（西班牙艾克威公司）、86.2%銅大師（氧化亞銅）WP.WG（挪威勞道克斯公司）等。

（4）常用的化學熏蒸劑：98%棉隆微粒劑、42%威百畝水劑（AS）、99.5%氯化苦液劑（995g/l）、96%1，3-二氯丙烯液劑、氰氨化鈣（石灰氮）等。嚴禁施用溴甲烷、“黑藥”（二溴氯丙烷，簡稱DBCP）。

4.3.2 滅殺大棚土壤中的土傳病原菌

用“98%棉隆微粒劑”對花卉大棚進行土壤熏蒸處理，殺滅大棚土壤中的土傳病原菌。98%棉隆微粒劑是一種高效、低毒、無殘留、環保、廣譜的滅生性土壤熏蒸劑，是由聯合國環境組織、中國國家環保部、中國農業科學院等部門推薦用于替代溴甲烷的首選產品，可用于花卉溫室、大棚的土壤消毒處理。其消毒原理是：棉隆施于嘲濕的土壤時，會產生異硫氫酸甲酯氣體，該氣體迅速在土壤顆粒間擴散，有效地殺滅土壤中各種土傳病原真菌、細菌等，從而達到土壤消毒的效果。施用該藥的缺點是，它在殺死病原菌的同時，也殺死了土壤中的各種有益菌。消毒操作步驟如下。

（1）整地：先將底肥（土雜肥、有機肥、復合肥等）撒于土壤表面，然后用鐵锨或旋耕機等翻地松土，使土壤顆粒細小均勻。

（2）澆水濕潤土壤：土壤要濕潤30 cm深，相對濕度達到40%～60%（大約是手捏土成團，掉地能散開這個標準），保濕4 d。

（3）施藥：將藥劑均勻撒于土壤表面；制劑用量：30～45 g/m2，20～30 kg/畝。

（4）混土：施藥后，馬上用鐵锨或旋耕機將藥劑與土壤混勻，深度為0～30 cm，注意用藥一定要到位（特別是溝、邊、角）。

（5）混土后再次澆水，濕潤土壤。

（6）蓋膜密封消毒：澆水后立即用不透氣的薄膜覆蓋于用藥劑處理的土壤之上，用開溝壓邊法密封四邊，以保持土壤濕潤和避免棉隆產生的氣體泄露，特別注意薄膜的厚度不得低于4絲。施藥的最佳土壤溫度是12～20 ℃，10 ℃以下不建議使用。密閉消毒時間與土溫有關，土溫越高，時間越短，20 ℃時，12 d。

（7）揭膜通氣5～15 d，具體時間與土溫有關，土溫越高，時間越短，20 ℃時，7 d。通風期間，要翻地2次，讓棉隆產生的異硫氰酸甲酯氣體散盡。

（8）發芽試驗：在種植花卉前，必須先做發芽試驗。具體方法是：在施藥處理后的土壤內，按對角線五點隨機提取土樣，深度0～30 cm，混勻后，裝入三個透明的玻璃罐頭瓶中，每個瓶中裝入半瓶土，然后，用清水蘸濕棉球，每個棉球沾上3粒大白菜種子，用木條和線吊掛在瓶中，使棉球上的種子靠近土壤，每個瓶中有3個棉球9粒種子，密封瓶口，放在室內或室外溫暖有陽光的地方48 h，同時用未施藥的土壤及相同的種子按上述操作裝瓶作對照。如果種子正常發芽，說明土壤安全；如果有抑制發芽的情況，要繼續松土通氣，不通過發芽安全測試，不可栽種花卉。

（9）為土壤補充各種有益菌。

（10）播種或移栽定植。土壤溫度指10～15 cm土層溫度。需要注意的是棉隆對皮膚和眼睛有刺激作用，施藥和揭膜通風時，必須戴塑料手套和口罩等防護用具。

4.3.3 浸種消毒

有為數不少的病害，是由種子攜帶傳播的，育苗前須用“99%惡霉靈SP4000倍液+72.2%普力克（霜霉威鹽酸鹽）AS1000倍液+500萬單位鏈霉素SP4000倍液”配制成的復合藥液，浸種10～30 min，可殺滅腐霉菌、鐮刀菌、疫霉菌、青枯菌等病原菌，預防花卉根腐病、枯萎病、黃萎病、疫病、立枯病等土傳真菌病害和青枯病、軟腐病等土傳細菌病害。

4.3.4 苗床消毒

用99%惡霉靈SP3000倍液（或50%多菌靈WP800倍液）+72.2%普力克（霜霉威鹽酸鹽）AS800倍液（或3%多抗霉素WP800倍液）+500萬單位鏈霉素SP3000倍液配制成的復合藥液，均勻地噴灑在營養土上，殺滅土傳病原菌。

4.3.5 上盆（移栽）時，對土壤進行消毒處理

因為花農連年種植花卉，當地用來裝盆的土壤中積累了大量的病原菌。在上盆（移栽）時，要施用殺菌劑進行土壤消毒處理，殺滅土壤中的病原菌，預防花卉土傳病害的發生。

方法1：先將藥劑和土壤按一定比例混勻，用此藥土將花卉植株定植上盆，澆定根水。方法2：花卉植株移栽入盆后，將殺菌劑按一定比例用水稀釋，用此藥水作定根水。

4.3.6 盆栽花卉生長期，土傳病害的預防和治療

（1）預防病害：在盆栽花卉生長期，需定期（一般是1次/月）用殺菌劑按一定比例用水稀釋后灌根，預防盆栽花卉土傳病害。

（2）治療病害：一般5～7 d施藥一次，一個療程施藥3～4次。

（3）預防和治療常用的殺菌劑有：99%惡霉靈SP3000倍液，50%多菌靈WP600-800倍液；72.2%普力克AS600-800倍液，3%多抗霉素WP600-800倍液；500萬單位鏈霉素SP3000倍液，20%噻枯唑WP600-800倍液等。灌根時，要根據實際情況用藥，可以單用一種藥劑，也可以幾種藥劑混用，最好，再配上適量的甲殼素、氨基寡糖素等。在用殺菌劑灌根15 d后，用“樂德沃”牌復合微生物菌劑原液500～1000倍液灌根。

4.4 生物防治

盆栽花卉土傳病害的生物防治，主要包括三個方面：用植物源農藥防治；用生防菌（即天敵微生物）及其他有益菌防治，即以菌治?。挥梦⑸镌纯股剞r藥（即微生物的代謝產物）防治。

4.4.1 植物源農藥

如0.5%“永衛168”水劑，其特點是：①是純植物源農藥。他由多種植物的提取物組成，其主要成分是苦參總堿等，不含任何化學成份。②是堿性農藥，pH值為8.2。③低毒、無味。④作用多樣，能防能治；不但具有⒕活性，而且還有調節植物生長的功能。⑤對植物安全。正常使用，不傷苗、不傷根，對植物不會產生藥害。⑥對人畜、魚類安全。⑦對土壤環境安全。無殘留，它在土壤中降解的最終產物是二氧化碳和水，無污染，綠色環保。⑧不易產生抗性，可連續施藥。⑨操作簡單：稀釋2500～3000倍，灌根。⑩高效，藥效持久。試驗結果表明：預防效果≥95%，可達到100%；持效期≥70～120 d。

4.4.2 利用生防菌及其他有益菌防治

防治盆栽花卉土傳病害，需在土壤中補充各種生防菌（天敵微生物）及其他各種土壤有益菌，重塑土壤微生物群落，利用這些微生物對病原菌的捕食、毒殺、寄生、拮抗、抑制、驅避、占位等作用機制，抑制土傳病原菌的為害。①真菌類生防菌：如淡紫擬青霉、厚垣輪枝孢菌、木霉菌。②細菌類生防菌：主要指根際細菌，如枯草芽孢桿菌、堅強芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、側芽孢桿菌、側孢短芽孢桿菌、膠凍樣芽孢桿菌、蠟樣芽孢桿菌、球芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、多粘類芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌。③放線菌，如激抗菌968、細黃鏈霉菌。④其它有益菌如：酵素菌，海洋紅酵母等。生物菌劑的使用方法：穴施或溝施，重點保護根際環境。青島樂德沃生物科技有限公司生產的“樂德沃”牌復合微生物菌劑原液（主要是枯草芽孢桿菌、海洋紅酵母等），有效活菌數≥50億/mL，500～1000倍液灌根，每年施用4次以上，每次間隔15 d。

4.4.3 微生物源抗生素農藥

農用抗生素是微生物發酵產生的次生代謝產物，這些抗生素在預防和治療盆栽花卉土傳病害中，起著非常重要的作用。研究表明，抗生素主要由放線菌產生，而其中大約90%又由放線菌中的鏈霉菌產生。鏈霉菌不僅種類繁多，而且其中50%以上的都能產生抗生素。

殺細菌的抗生素主要有鏈霉素、土霉素、青霉素等。殺真菌的抗生素主要有井岡霉素、多抗霉素、武夷菌素、春雷霉素、寧南霉素、中生霉素、農抗120等，其中，有些抗生素既殺真菌又殺細菌。

5 結語

（1）盆栽花卉土傳病害的預防和治療，要遵循“預防為主，綜合防治”的植保方針，以防為主；治療要抓住一個“早”字，把病害控制在發病初期。

（2）用常規殺菌劑，如：50%多菌靈WP、99%f霉靈SP；25%阿米西達SC、72.2%霜霉威鹽酸鹽AS；20%噻枯唑WP、500萬單位農用鏈霉素；3%多抗霉素WP、4%農抗120AS等灌根，完全可以預防和治療盆栽花卉的土傳病害。要注意用藥時間、用藥方式、用藥量，要交替用藥。

（3）要充分發揮生防菌及其它有益菌在預防和治療盆栽花卉土傳病害中的作用。

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