微生物培養(yǎng)基報告范文

導(dǎo)語：如何才能寫好一篇微生物培養(yǎng)基報告，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

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抽取樣品環(huán)節(jié)

在采樣過程中，需嚴格無菌操作，采樣數(shù)量及方法與檢驗?zāi)康膽?yīng)相適應(yīng)，同時監(jiān)控采樣現(xiàn)場的溫度、濕度及衛(wèi)生狀況。在餐飲食品微生物檢驗中，樣品的正確抽取是檢驗的一個重要環(huán)節(jié)，其操作的熟練和正確與否直接影響檢驗結(jié)果的準確性。

在采集樣品的過程中應(yīng)注意如下幾個問題：

采樣前應(yīng)準備好滅菌徹底的采樣工具和容器或者無菌采樣袋。采樣工具和容器嚴禁用消毒劑消毒，樣品中不得加入防腐劑，以免影響檢驗結(jié)果的準確性。

在采樣時，嚴格遵守無菌操作，防止污染樣品。在嚴格無菌操作的條件下，按照規(guī)定的樣品采集標準均勻而準確的取樣，并及時封口，使樣品具有代表性和準確性。

抽樣須秉承隨機原則，在餐飲樣品抽取的過程中，要從具有代表性的樣品中隨機抽取，抽樣方案與抽樣工作應(yīng)保持統(tǒng)一，樣品的數(shù)量應(yīng)滿足樣品各項檢驗的需要。鮮榨果蔬汁飲料及熟食鹵制品等高風(fēng)險餐飲食品的抽取需優(yōu)先選擇被抽樣單位的新鮮制品，使其抽檢樣品達到質(zhì)量研究和控制的效果。

抽取的樣品應(yīng)當嚴格按照樣品的物理、化學(xué)和生物學(xué)等特性，或其標簽標識上注明的儲運條件儲藏運輸，以確保樣品在檢測前的完整性和原始性。運送冷凍和易腐蝕食品應(yīng)用車載冰箱或在手提保溫箱內(nèi)加適量的冰袋，保證儲藏運輸。運輸途中應(yīng)防止樣品升溫腐敗或融化現(xiàn)象，已保證檢測結(jié)果的真實性和準確性。

檢驗過程中應(yīng)注意的問題

培養(yǎng)基的選擇。食品微生物檢驗所用培養(yǎng)基，必須由專業(yè)廠家生產(chǎn)，產(chǎn)品的質(zhì)量必須符合有關(guān)的質(zhì)量標準，保存應(yīng)符合相應(yīng)要求，防止潮解、結(jié)塊、變色等情況。在實際的操作中要盡量縮短開蓋時間，取用過的培養(yǎng)基要及時放置低溫干燥的環(huán)境中保存。一些商品化即用型培養(yǎng)基平皿應(yīng)對培養(yǎng)基作外觀檢查，細致檢查該類培養(yǎng)基是否開裂、灌注是否均勻、有無過多的氣泡，清晰度和有無肉眼所見的污染。培養(yǎng)基的配置應(yīng)按照規(guī)定的方法配置，并做好原始記錄，在配置時選用清洗干凈的玻璃器皿和耐高溫的食品級塑料器皿，避免使用銅、鐵等器皿，以避免對微生物生長的造成影響。

檢驗用水的選擇。餐飲食品微生物的檢驗用水需選擇蒸餾水或純凈水。自來水中有較高濃度的余氯、氰化物、鈣、鎂、汞、砷、等物質(zhì)，會抑制細菌的生長，造成細菌總數(shù)、真菌和酵母菌數(shù)量檢驗值偏低，引起某些致病菌檢驗的假陰性結(jié)果，使本來不合格的食品流入餐飲流通環(huán)節(jié)，給人民群眾的身體健康造成危害。

嚴格的操作步驟。食品檢驗應(yīng)由專業(yè)培訓(xùn)的工作人員負責操作。進入無菌室從樣品的制備到檢驗都要為防止二次污染采取必要的措施。進行微生物操作的整個過程要嚴格無菌操作，防止檢測樣品在操作過程中的污染，操作過程中培養(yǎng)基的溫度及傾倒的量應(yīng)嚴格按照要求操作，將溫度應(yīng)控制在40℃～45℃之間，培養(yǎng)基的傾倒量應(yīng)確保每個平皿的傾注量在15ml～20ml之間，并將培養(yǎng)基與檢樣和菌懸液充分混合。操作人員必須牢固樹立無菌觀念，在整個操作過程中均要求無菌操作，盡量靠近火焰動作，從微生物的分離、純化到接種手法應(yīng)規(guī)范迅速。

檢驗報告及結(jié)果的準確性控制

檢測流程中，應(yīng)及時觀察培養(yǎng)的樣品并記錄結(jié)果，出具檢驗報告時用回歸分析法和方差分析法進行數(shù)據(jù)處理，去除不必要的誤差，并對照相應(yīng)標準對餐飲食品的微生物質(zhì)量進行合理的評價。

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【摘要】： 食品微生物污染的廣泛發(fā)生，嚴重影響著人民的健康，因此食品微生物檢驗工作對評價食品衛(wèi)生質(zhì)量，保證消費者飲食衛(wèi)生有著極為重要的作用。但是由于食品及食品中所含微生物的品種多，結(jié)構(gòu)及成分復(fù)雜，微生物檢驗程序繁瑣，使檢驗結(jié)果的可信度經(jīng)常受到質(zhì)疑。所以，加強食品微生物檢測各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，是正確評價食品衛(wèi)生狀況，維護公眾健康的重要舉措。

【關(guān)鍵詞】：食品微生物檢測質(zhì)量控制

隨著人們生活水平的不斷提高，食品安全問題逐漸引起各國政府、公眾的重視。尤其近年來，隨著瘦肉精、三聚氰胺、毒膠囊、皮革奶等食品安全事件不斷曝光1，食品安全問題更成為社會各層面關(guān)注的焦點。食品安全問題中，微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中最突出的問題2。微生物指標不僅可用于對終產(chǎn)品的衛(wèi)生監(jiān)督管理，而且也是食品生產(chǎn)、運輸和銷售等全過程衛(wèi)生質(zhì)量控制的監(jiān)測手段3。為了提高食品的衛(wèi)生質(zhì)量，保證消費者飲食安全，食品微生物檢驗的方法由傳統(tǒng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)、血清試管凝聚試驗等逐漸發(fā)展到近年來的分子水平檢驗，并向儀器化、自動化、標準化方向發(fā)展4。但由于影響食品微生物檢測結(jié)果的因素復(fù)雜多樣，所以對食品微生物檢驗的各個環(huán)節(jié)加以合理有效的質(zhì)量控制，是提高食品微生物檢驗結(jié)果，保證食品安全的有效措施。

一、 樣品采集與處理

1、 采樣

食品微生物檢驗中，樣品的采集必須具有代表性。ICMSF制定的食品微生物學(xué)分析采樣方法5，目前已在國內(nèi)外被逐步推廣采用。應(yīng)嚴格遵循統(tǒng)計學(xué)方法，根據(jù)具體情況制定相應(yīng)的抽樣方案。一般應(yīng)采取完整未開封的樣品，如是散裝樣品，采樣必須在無菌操作下進行。采樣的用具，應(yīng)預(yù)先經(jīng)滅菌處理。樣品的數(shù)量應(yīng)滿足檢驗、復(fù)驗、備查的需要。每個樣品要注明其詳細信息。

2、 送樣

有質(zhì)量保證的樣品是獲得正確檢驗結(jié)果的基礎(chǔ)。樣品應(yīng)盡快送到食品微生物檢驗室（

3、 收樣和處理

樣品送達實驗室后，先判定樣品是否已經(jīng)變質(zhì)和是否滿足檢驗標準。瓶裝檢樣處理時可用點燃的乙醇棉球燒灼瓶口滅菌，用石碳酸紗布蓋好，再用滅菌開瓶器將蓋啟開。袋裝樣品應(yīng)用75%乙醇棉球消毒袋口后進行檢驗。固態(tài)樣品用均質(zhì)器以無菌操作方法處理樣品，調(diào)節(jié)均質(zhì)器均質(zhì)時間處理不同種類的樣品。微生物培養(yǎng)時要準確記錄溫度、氣體濃度等參數(shù)，使其嚴格符合檢驗程序要求6。原始記錄應(yīng)及時記載，原始記錄格式要求有足夠的信息量，并具有可朔源性。

二、 實驗人員素質(zhì)與能力

實驗人員的素質(zhì)與能力影響到最終的檢驗結(jié)果。食品微生物學(xué)檢驗人員應(yīng)：有合法的上崗資質(zhì)；具有多方面的專業(yè)技術(shù)知識7；掌握微生物學(xué)的有關(guān)基礎(chǔ)知識；掌握并正確理解國家食品衛(wèi)生微生物檢驗方法、食品的國家標準、行業(yè)標準及本企業(yè)的企業(yè)標準，熟悉標準化法的相關(guān)知識；熟悉計量學(xué)的基本知識、計量法令和法規(guī)及質(zhì)量保證體系知識；熟悉食品的生產(chǎn)工藝；及時主動更新自己的知識。

三、 食品微生物檢驗過程

1、 檢驗方法

食品微生物檢驗必須依據(jù)現(xiàn)行有效的國家標準、行業(yè)標準及衛(wèi)生行政部門頒布的檢驗方法進行8。對于檢驗標準的變化，一般都有約定成俗的經(jīng)驗性規(guī)定。但是如何控制實際工作中“靈活性”不至于變成“非法性”，需要檢驗人員自主識別。

2、 檢驗環(huán)境

微生物檢驗室是進行食品微生物學(xué)檢驗的地方，應(yīng)單獨設(shè)置，操作區(qū)與辦公區(qū)應(yīng)分開，避免室間污染和實驗室感染發(fā)生。無菌室要設(shè)有套間或緩沖間，最好設(shè)有推拉門，以防止空氣振動蕩。經(jīng)過培養(yǎng)后的培養(yǎng)物，經(jīng)無害化處理后方可排放、洗刷。對染菌物品及廢物，應(yīng)經(jīng)過消毒滅菌后才可清洗或廢棄，防止污染環(huán)境8。

3、 儀器和設(shè)備

微生物檢驗室應(yīng)配備充足的檢驗工作需要的儀器、設(shè)備和器材。儀器設(shè)備計量器具使用前應(yīng)經(jīng)計量鑒定部門鑒定合格后方可使用；儀器設(shè)備量具的量程、精確度等，要符合檢測項目的相應(yīng)要求；嚴格按操作規(guī)程要求使用，并做好運行檢查及儀器維護。

4、 培養(yǎng)基和試劑

購置培養(yǎng)基和試劑時要求供應(yīng)商提品質(zhì)控證書。培養(yǎng)基和試劑使用前首先通過外觀、批號、PH值、滅菌要求、選擇性等進行初步評估，還要用陽性對照菌株做質(zhì)控。按照培養(yǎng)基和試劑標簽說明的貯藏條件保存。不同批號的培養(yǎng)基和試劑不要混合使用。受潮變質(zhì)的干粉培養(yǎng)基堅決不能使用。自配的培養(yǎng)基要嚴格按照配制標準進行配制和保存，保存培養(yǎng)基配制記錄。

5、 確證試驗

做平行樣，保證結(jié)果的可比性；設(shè)立空白對照，防止其它污染而導(dǎo)致的結(jié)果不準確；設(shè)計適當?shù)馁|(zhì)控頻率，進行質(zhì)控試驗。將質(zhì)控菌株與常規(guī)工作一起進行，不能為質(zhì)控菌株設(shè)計單獨操作程序，更不能專人專做。當質(zhì)控標準菌株的內(nèi)在敏感性發(fā)生改變時要更換新的菌種。

6、 檢驗報告

檢測報告應(yīng)準確、清晰、明確、客觀地反應(yīng)檢驗結(jié)果，可以運用統(tǒng)計學(xué)知識對誤差進行處理，并參照一定的標準對食品微生物的數(shù)量和質(zhì)量進行系統(tǒng)性的評價。檢驗報告需經(jīng)有資格的審核人員核查簽字，并加蓋印章后生效。

四、 參加盲樣考核

積極參加上級業(yè)務(wù)部門下發(fā)的盲樣考核，即進行實驗室間比對和中心質(zhì)量管理辦公室組織的人員比對驗證實驗。

總之，隨著社會的發(fā)展和科技進步，食品微生物檢驗技術(shù)正向高效率、高標準、高精度和高靈敏度的方向發(fā)展，特別是近年來興起的基因芯片技術(shù)及自動微生物檢測系統(tǒng)。與此同時，更加嚴格的質(zhì)量控制方法必須伴隨檢測技術(shù)的發(fā)展而發(fā)展，從而得出盡可能準確的檢測結(jié)果，更好的為人類公共衛(wèi)生、食品安全、營養(yǎng)健康與疾病預(yù)防等做出貢獻。

參考文獻

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【關(guān)鍵詞】食品安全；微生物；檢測；質(zhì)量

隨著工業(yè)化進程的發(fā)展，食品生產(chǎn)作為一種大規(guī)模商業(yè)化生產(chǎn)已經(jīng)進入到人們的日常生活中。但是工業(yè)化生產(chǎn)不可避免的會引發(fā)某些質(zhì)量事故。不良微生物往往會伴隨著原料的生產(chǎn)、成品的加工、包裝、貯存進入到食品中，引起食品污染。快速有效的開展食品微生物檢測工作，對于保護消費者權(quán)益乃至生命財產(chǎn)安全有著至關(guān)重要的作用。本文從人員、環(huán)境、儀器和設(shè)備等方面闡述了影響食品微生物檢測的因素，并提出了改進建議。

1、微生物檢測的意義和方法

食品的微生物檢測，就是運用生物、理化、醫(yī)學(xué)等方法系統(tǒng)的分析不良微生物對人和動物的健康影響，它是食品安全監(jiān)測中必不可少的一部分。食品可否被人類食用，不是看它的口味如何，而是看它是否具有危險性。食品中的微生物含量和性質(zhì)，一直是影響食品質(zhì)量安全的主要因素之一。對食品中的微生物進行檢測，是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標之一。而且，系統(tǒng)的檢測工程可以判斷出食品的加工環(huán)境，為政府和有關(guān)部門的監(jiān)管提供科學(xué)的依據(jù)。食品微生物檢測應(yīng)該遵循“預(yù)防為主”的方針，本著“以人為本、嚴謹科學(xué)”的理念進行相關(guān)的工作，有效地預(yù)防大規(guī)模食品中毒和人畜共患病的發(fā)生。

目前我國衛(wèi)生防疫機構(gòu)和專門的食品化驗室對于微生物的檢測方法有以下幾種：

一、理化檢測。主要包括傳統(tǒng)的形態(tài)檢測和相關(guān)的理化方法。形態(tài)檢測是最基礎(chǔ)最簡單的方法，主要是通過顯微鏡和染色劑來判定菌落形態(tài)和結(jié)構(gòu)特征。微生物的理化檢測是指通過化學(xué)反應(yīng)測定微生物的代謝產(chǎn)物，間接地鑒別一些形態(tài)和其他方面不易區(qū)分的微生物。

二、微量生物化學(xué)反應(yīng)系統(tǒng)。這種方法與計算機聯(lián)合使用具有高效便捷的特點。常用作分析腸桿菌、非發(fā)酵菌、葡萄球菌。

三、PCR技術(shù)。又稱為基因體外擴增法。可以利用PCR技術(shù)精確、微量的特點，來對食品中微生物特異基因進行擴增，以判定食品是否受到了污染。

四、核酸探針技術(shù)。這是20世紀80年展起來的生物技術(shù)，可以利用已知的DNA或RN段加上可識別的標記做成“探針”，用以檢測未知樣品中是否含有特定的堿基序列，來判定其同源性。

五、即用型紙片法。采用生物測試片，可分別檢測菌落種數(shù)、大腸桿菌計數(shù)、霉菌和酵母計數(shù)。具有操作簡便快速省料的特點，已經(jīng)被列為國家標準方法。

2、影響微生物檢測的因素

在實際食品的微生物檢測過程中存在著較多的影響因素，可能對我們的檢驗結(jié)果帶來誤差。因此必須系統(tǒng)的分析這些干擾因素，采取多種手段保障檢驗結(jié)果的科學(xué)性、準確性。

2.1檢驗人員的素質(zhì)與能力

不論在什么工作中，人的作用是最主要的。檢驗人員的素質(zhì)與能力影響到最終的檢驗結(jié)果。若是在檢驗工作中應(yīng)付了事，則檢驗結(jié)果不具備參考價值。檢驗人員應(yīng)該持證上崗，還要做好崗前培訓(xùn)。必須掌握熟練的操作能力和理論素養(yǎng)。主動地更新自己的知識，學(xué)習(xí)相關(guān)的法律法規(guī)，了解最新的技術(shù)方法和檢驗指標，不斷的為自己“充電”。也要使自己時刻保持緊迫的意識，認識到自己的工作關(guān)系著公民的生命健康安全。

檢驗機構(gòu)的領(lǐng)導(dǎo)層應(yīng)該對工作人員做好監(jiān)督和考核工作。一方面，相應(yīng)的監(jiān)督可以避免人的懈怠，提高工作的積極性與效率，另一方面，有效地監(jiān)督可以暴露出實際工作的不足之處，將沒有工作素養(yǎng)的人員踢出檢驗隊伍。

2.2檢驗工作的儀器設(shè)備

在檢驗工作中要運用的儀器設(shè)備比較多，所有的儀器和設(shè)備都要按照生產(chǎn)廠家提供的操作方法和養(yǎng)護說明進行正確使用。某些設(shè)備長時間使用會影響其精度，所以要定期性的校驗。某些儀器保養(yǎng)不當會喪失實際使用價值，操作方法的不當也會影響檢驗結(jié)果。例如在高壓滅菌器的使用過程中，物品不宜放的過擠，滅菌完畢要等到壓力自然降低后才能開蓋取出物品。干熱滅菌器在處理帶有紙包裝的物品時，溫度不能超過160℃。培養(yǎng)箱在放入培養(yǎng)液后不能隨意開閉，一次培養(yǎng)完成后需要馬上清潔，時刻關(guān)注培養(yǎng)箱內(nèi)溫度是否與設(shè)定溫度一致。實驗室內(nèi)的無菌器具應(yīng)該在實施滅菌后做好明顯的標識，以便于和其他器具相區(qū)別。對于檢測實驗室的儀器設(shè)備的使用，還有其他注意要素，這里不再詳述。總之，正確的使用和養(yǎng)護方法，科學(xué)嚴謹?shù)陌凑樟鞒滩僮黠@得尤為重要。

2.3檢驗培養(yǎng)基、試劑

選擇質(zhì)量符合要求的干粉培養(yǎng)基，保存注意防潮不結(jié)塊，對于受潮變質(zhì)的培養(yǎng)基堅決不能使用。在實際的貯存中要加強包裝容器的密封性能，一般性培養(yǎng)基放在干燥低溫的環(huán)境下保存，特殊性的培養(yǎng)基要放在干燥器內(nèi)。培養(yǎng)基的制備必須在玻璃容器、搪瓷缸、鋁鍋中進行。培養(yǎng)基按照配方配比，不得隨意更改組成成分。對于檢驗的試劑和藥品，不僅要做好分類存放，定時清理，也要做好防變質(zhì)工作。堅決不使用已經(jīng)變質(zhì)的藥品。

2.4采樣與預(yù)處理

嚴格遵循統(tǒng)計學(xué)方法對食品進行科學(xué)的采樣，使得樣品能夠最真實的反映本批次食品的狀況。采樣后對樣品進行預(yù)處理，到達實驗室后判定樣品是否已經(jīng)變質(zhì)和是否滿足檢驗標準。原則上不允許耽擱檢測時間，要組織人力物力及時的對樣品進行檢測。一般性樣品在送檢過程中要保存在0-5℃的環(huán)境中。冷凍食品要一直保持冷凍狀態(tài)直到實驗室后才能解凍。在樣品的處理工作中要滿足無菌操作狀態(tài)，尤其是冷凍食品，化凍時要避免細菌數(shù)量的增加。

2.5檢驗標準

按照國家標準方法進行項目檢驗是我們工作的最基礎(chǔ)要求。但是在實際工作中會遇到更多的問題。需要我們靈活的變通。例如，國家規(guī)定固體樣品采用重量稱重，液體樣品采用體積測量。但是對于某些粘稠狀液體，如果測量其體積，會附著于容器內(nèi)壁，不可能得到準確的結(jié)果，這時，我們就需要采取稱重的方法。對于檢驗標準的變化，一般都有約定成俗的經(jīng)驗性規(guī)定。但是如何控制實際工作中“靈活性”不至于變成“非法性”需要檢驗人員自主識別。

2.6檢驗報告

檢驗報告要最大程度的反映檢驗實際，可以運用統(tǒng)計學(xué)知識對誤差進行處理。例如采用回歸分析法和方差分析法。對于檢驗報告的形成，必須經(jīng)過規(guī)定的手續(xù)進行復(fù)查。并參照一定的標準對食品微生物的數(shù)量和質(zhì)量有一個系統(tǒng)性的評價。經(jīng)過有關(guān)人員的簽字確認后才具有法律效力。

3、總結(jié)

食品的質(zhì)量安全監(jiān)測不同于其他商品的檢測，它是跟公民的生命健康安全有著密切的關(guān)系的。在實際的工作中，我們應(yīng)該明確食品微生物檢測的意義和方法，采取切實的手段保障檢測結(jié)果的科學(xué)性。本文主要分析了影響食品微生物檢測結(jié)果的因素，并且提出了相應(yīng)的建議以保障結(jié)果的科學(xué)準確性。參考文獻

[1]周建新.略談食品微生物學(xué)檢驗的質(zhì)量控制[J].南京經(jīng)濟學(xué)院學(xué)報,2008

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關(guān)鍵詞：微生物檢驗技術(shù)；實驗教學(xué)；改革探索實踐

微生物檢驗技術(shù)是一門對實際操作技能要求非常高的課程，又是醫(yī)學(xué)檢驗專業(yè)一門重要的核心課程，因此搞好微生物學(xué)檢驗技術(shù)實踐教學(xué)就顯得特別重要。在實踐教學(xué)中，能鍛煉學(xué)生觀察能力和操作能力，也能培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力和創(chuàng)新精神。因此，筆者結(jié)合教學(xué)大綱和臨床微生物實驗室實際工作要求，對本課程實驗教學(xué)進行積極的探索。在實踐教學(xué)中，筆者采用了以下手段：調(diào)整教學(xué)內(nèi)容，加強學(xué)生基本技能訓(xùn)練，改革考核方法，對教師進行培訓(xùn)等，取得了良好的教學(xué)效果。

一、微生物檢驗實踐教學(xué)的現(xiàn)狀

臨床微生物學(xué)和微生物檢驗是一門專業(yè)課程，各個病原微生物需要記憶的知識點多、連續(xù)性差、內(nèi)容雜、記憶難。比如細菌種類繁多且每種細菌有自己的生物學(xué)特性，雖然不難理解，但內(nèi)容復(fù)雜多樣，極易混淆。

二、微生物檢驗實踐教學(xué)的影響因素及解決方案

1.教師因素

教師自身的理論知識和實踐操作技能有限，對實驗教學(xué)的重視程度也不夠。因此，應(yīng)加強教師自身素質(zhì)，提高教師的專業(yè)理論知識，同時了解微生物檢驗的發(fā)展動態(tài)，在教學(xué)中更好地引導(dǎo)學(xué)生，使他們的思維更加活躍，更加具有創(chuàng)新性。

2.學(xué)生因素

學(xué)生對微生物實驗課不是很重視，學(xué)習(xí)態(tài)度也不積極。教師要改變教學(xué)方法，課前布置預(yù)習(xí)內(nèi)容，課堂上多進行案例教學(xué)，課后布置思考小題，增加學(xué)生對微生物實驗課的重視程度。

3.實驗室條件因素

實驗室條件主要包括實驗室儀器設(shè)備的使用狀況、設(shè)施的完備程度和實驗經(jīng)費的投入情況，學(xué)校要保證實驗儀器設(shè)備和耗材滿足學(xué)生的所有實驗內(nèi)容。

三、實踐教學(xué)改革方案

1.整合優(yōu)化實驗課內(nèi)容

結(jié)合微生物檢驗教學(xué)的現(xiàn)狀、教學(xué)大綱、臨床實際和本實驗室的條件，我們對實驗課內(nèi)容進行了相應(yīng)調(diào)整，分為三個板塊，具體如下。

（1）基本技能訓(xùn)練。微生物檢驗基本技能的訓(xùn)練是進行綜合實驗的前提，主要是為了讓學(xué)生樹立無菌觀念，訓(xùn)練他們掌握微生物檢驗的基本實驗技能，包括革蘭染色、培養(yǎng)基制備和細菌分離培養(yǎng)，訓(xùn)練順序為學(xué)生先配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過自己配制的培養(yǎng)基進行細菌分離培養(yǎng)，再對自己的培養(yǎng)菌落進行革蘭染色并觀察其形態(tài)。

（2）常見微生物鑒定。對一些臨床常見的重要微生物種類，在學(xué)習(xí)完理論知識后進行一次實驗訓(xùn)練，目的是把課堂上學(xué)到的理論知識和實踐聯(lián)系起來。學(xué)習(xí)“病原性球菌”后，選取臨床常見的幾種病原性球菌，如葡萄球菌、鏈球菌和奈瑟菌，進行微生物鑒定。教師應(yīng)要求學(xué)生完全按照臨床實驗室標本檢驗程序鑒定，讓學(xué)生在課堂上就熟悉臨床操作程序，在之后的實習(xí)工作中才不會有陌生感。

（3）臨床標本鑒定。在學(xué)期期末時開展綜合性實驗，以臨床常見標本膿汁、痰液、尿液、糞便為檢測標本，讓學(xué)生在課前先自己設(shè)計實驗方案，到實驗室按照實驗方案直接進行實驗。學(xué)生可以通過病原菌的染色特性、菌落特征和生化反應(yīng)結(jié)果等做出結(jié)論。通過這些綜合性實驗，使學(xué)生把學(xué)到的理論知識與實踐緊密聯(lián)系起來。

2.改進教學(xué)方法，采用學(xué)導(dǎo)式教法

以前我們的實驗教學(xué)方式多為灌注式，以教師為中心，學(xué)生按教師所示，依葫蘆畫瓢，學(xué)生沒有自己思考，不利于學(xué)生綜合分析問題、解決問題的能力及創(chuàng)新能力的培養(yǎng)。在課堂前分小組對下個實驗進行討論，實驗完成后對實驗過程中的操作以及結(jié)果進行討論分析，然后選一名代表對本組實驗情況進行匯報，最后教師對所有小組的實驗結(jié)果、存在的問題和改良方法進行評價，從而形成教師和學(xué)生的“雙邊”互動教學(xué)活動。

3.改進實踐考核方法

過去微生物檢驗實驗成績只占期末考試總成績的10%，主要根據(jù)實驗報告的書寫評定成績，而有的學(xué)生不做實驗，抄襲實驗報告，這種評法就沒辦法完全真實地反映出學(xué)生真正的實踐技能。為了避免這種現(xiàn)象，我們改革實踐考核方法，將實驗成績占期末總成績的比例提高到20%（ 5%實驗報告書寫+5%實驗設(shè)計+10%實踐操作技能）。其中實踐操作技能平時操作占5%，期末單獨進行一次實踐技能考核占5%。

通過這幾年對微生物檢驗實踐教學(xué)的改革實踐，筆者發(fā)現(xiàn)改革后的實驗課教學(xué)學(xué)習(xí)氛圍更加濃厚，學(xué)生動手能力以及主動性有所增強。但這遠遠不夠，我們還應(yīng)繼續(xù)探索微生物檢驗實踐的改革，爭取培養(yǎng)出符合21世紀醫(yī)學(xué)檢驗所需的人才。

參考文獻：

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篇5

【關(guān)鍵詞】 沙門氏菌顯色培養(yǎng)基；實際應(yīng)用；效果比較

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.08.739 文章編號：1004-7484（2013）-08-4721-02

沙門氏菌（Salmonella Lignieres）屬腸桿菌科，革蘭氏陰性腸道桿菌，沙門氏菌病是指由各種類型沙門氏菌所引起的對人類、家畜以及野生禽獸不同形式的總稱[1]。蛋、家禽和肉類產(chǎn)品是沙門氏菌病的主要傳播媒介，感染主要取決于沙門氏菌的血清型和食用者的身體狀況。為有效控制沙門氏菌污染發(fā)生和擴散，準確及時的檢測手段是關(guān)鍵。目前沙門氏菌檢測以傳統(tǒng)方法為主，在檢驗中選擇性平板是分離菌落最重要的培養(yǎng)基，但是大腸菌群等優(yōu)勢腸道菌在這些平板上也能生長旺盛，對挑選典型的沙門氏菌菌落增加了難度。

利用顯色培養(yǎng)基鑒定微生物是近年來開發(fā)的新型快速檢測技術(shù)，直接根據(jù)菌落顏色就可以對菌種做出初步鑒定[2]，減少干擾因素，大大提高了檢測效率，目前海博沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（第二代）和CHROMager沙門氏菌顯色培養(yǎng)基為市場上較為常見的產(chǎn)品。

本實驗室將海博和CHROMager沙門氏菌顯色培養(yǎng)基就實際應(yīng)用效果進行了比較研究，現(xiàn)說明如下：

1 材料與方法

1.1 培養(yǎng)基及試劑 法國科瑪嘉沙門氏菌顯色培養(yǎng)基購于鄭州博賽生物科技有限公司，海博沙門氏菌顯色培養(yǎng)基（第二代）、BPW、SC、TSI、營養(yǎng)瓊脂、沙門氏菌生化鑒定管、A-F多價診斷血清等購于（青島海博生物技術(shù)有限公司），法國生物梅里埃API生化試劑條購于（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

1.2 主要儀器設(shè)備 生物安全柜、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、電子天平、顯微鏡、冰箱、接種環(huán)、培養(yǎng)皿、三角瓶、試管、移液管、剪刀。

1.3 樣品 從菜市場采集雞蛋共166份。

1.4 檢驗方法 將雞蛋打碎均質(zhì)，以無菌操作取樣品25g，加入225mLBPW，均質(zhì)混勻，于36℃培養(yǎng)18h；移取1ml轉(zhuǎn)種10mLSC中，于36℃培養(yǎng)24h；分別取一環(huán)增菌液接種CHROMager沙門氏菌顯色平板和海博沙門氏菌顯色平板，36℃培養(yǎng)24h，做革蘭氏染色鏡檢、接種TSI和營養(yǎng)瓊脂平板36℃培養(yǎng)24h；疑似菌落采用API20E生化鑒定試劑盒，結(jié)合傳統(tǒng)生化方法鑒定后，進行血清學(xué)實驗，報告結(jié)果[3]。

2 結(jié) 果

2.1 同種培養(yǎng)基沙門氏菌生長狀況比較 在海博沙門氏菌顯色平板上，可疑沙門氏菌菌落呈圓形、表面光滑的紫色小菌落。在CHROMager沙門氏菌顯色平板上，可疑沙門氏菌菌落圓形、中等大小的紫色菌落，顏色比海博沙門氏菌顯色平板上長得偏紫。

2.2 兩種培養(yǎng)基沙門氏菌陽性率比較 兩種培養(yǎng)基對樣品中沙門氏菌陽性率，見表1。

2.3 兩種培養(yǎng)基出現(xiàn)可疑菌落的假陽性情況比較 在應(yīng)用CHROMager沙門氏菌顯色培養(yǎng)基和海博沙門氏菌顯色培養(yǎng)基對166份樣品的檢驗中，在顯色培養(yǎng)基上出現(xiàn)了疑似菌落的樣品而最終均鑒定為沙門氏菌的，CHROMager沙門氏菌顯色培養(yǎng)基是疑似菌落19份，最終鑒定陽性份數(shù)18份，假陽性份數(shù)1份；海博沙門氏菌顯色培養(yǎng)基是疑似菌落15份，最終鑒定陽性份數(shù)14份，假陽性份數(shù)1份，可見兩種培養(yǎng)基檢驗結(jié)果中，對于沙門氏菌顯色培養(yǎng)基疑似陽性而言，其假陽性率一致。

3 討 論

顯色培養(yǎng)基方法的原理是使用適當?shù)娘@色底物，在細菌特異性的作用下，發(fā)色基團游離于菌落上，使菌落顯示一定的顏色[2]。好的顯色培養(yǎng)基應(yīng)菌落顏色易識別、不同種微生物差別較大以及比較穩(wěn)定等，顯色培養(yǎng)基的實用性還與樣品中細菌的種類和數(shù)量有關(guān)，樣本中細菌的種類繁雜，非目的菌數(shù)量龐大會影響目的菌的檢出，所以在顯色培養(yǎng)基中加入一些特殊的抑菌劑，可抑制樣本中雜菌的生長而不影響目的菌的生長，從而提高檢出率。鑒于顯色培養(yǎng)基快速、靈敏、高效等諸多優(yōu)點，其作為一種新的微生物快速檢測技術(shù)已經(jīng)得到了廣泛的認可。在GB4789.4-2010中的，沙門氏菌顯色培養(yǎng)基已經(jīng)被作為選擇性平板之一。

本研究中，兩種沙門氏菌顯色平板上，沙門氏菌均呈現(xiàn)特殊的紫色菌落，大腸桿菌和大腸菌群呈現(xiàn)藍色，其他細菌呈現(xiàn)黃色或者無色。從表1可以看出，對于166份實際樣品，CHROMager沙門氏菌顯色培養(yǎng)基和海博沙門氏菌顯色培養(yǎng)基的檢出水平一致；對于沙門氏菌顯色培養(yǎng)基的疑似假陽性率而言，其假陽性率一致。

根據(jù)GB4789.4-2010培養(yǎng)基使用方法，可以使用CHROMager沙門氏菌顯色培養(yǎng)基或海博沙門氏菌顯色培養(yǎng)基作為沙門氏菌檢驗的分離培養(yǎng)基。

參考文獻

[1] 郁慶福，主編.現(xiàn)代衛(wèi)生微生物學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1995.

篇6

關(guān)鍵詞：凍干；粉針劑；無菌

注射用無菌粉末簡稱粉針。凡是在水溶液中不穩(wěn)定的藥物，均需制成注射用無菌粉末[1-5]。將冷凍干燥法制得的粉末，稱為注射用冷凍干燥制品.注射用無菌粉末的生產(chǎn)必須在無菌室內(nèi)進行[6-8]。無菌工藝模擬試驗主要用來評估在既定無菌生產(chǎn)環(huán)境和過程控制條件下生產(chǎn)無菌產(chǎn)品的能力和無菌工藝人員的操作水平[9-14]。本文對凍干粉針劑無菌工藝模擬試驗進行研究。

1 試驗內(nèi)容與方法

1.1 驗證前相關(guān)檢查

本試驗之前，檢查參加驗證的物料如管制注射劑瓶、丁基膠塞、組合蓋等；檢查在驗證期間所有注射用水的關(guān)鍵使用點及總送總回等水點的檢測報告；檢查在驗證期間所用壓縮空氣檢測報告；對驗證實施期間的各操作間的清潔、清場進行核實，確認清潔合格，排除其對驗證結(jié)果的影響；對驗證實施期間的各設(shè)備的清潔進行核實，確認清潔是否合格，排除其對驗證結(jié)果的影響；對驗證實施期間的潔凈室的環(huán)境進行檢測，對操作室溫度、相對濕度、塵埃粒子數(shù)、沉降菌、浮游菌、壓差等進行檢測。

1.2 最差條件的設(shè)計

最差條件：與物料接觸的設(shè)備及部件從清潔滅菌到使用最長放置；模擬最大生產(chǎn)人員10人；增加因機器停機造成的人為操作，無菌風(fēng)險大于正常生產(chǎn)；采用大豆胰蛋白胨液體培養(yǎng)基，增加了微生物生產(chǎn)的營養(yǎng)環(huán)境，無菌風(fēng)險大于正常生產(chǎn)；灌裝速度到30瓶/分，模擬分裝程序速度低于正常生產(chǎn)速度。

1.3 培養(yǎng)基的選擇和制備

將大豆胰蛋白胨，用鈷60照射滅菌，照射當量為25kGy，備用。再將已滅菌的大豆胰蛋白胨在已滅菌的周轉(zhuǎn)罐中進行配置，再經(jīng)0.22濾芯過濾至灌裝間貯罐。

1.4 培養(yǎng)基微生物性能和無菌性試驗

1.4.1 培養(yǎng)基微生物性能實驗

取30瓶裝有5ml培養(yǎng)基的已滅菌的西林瓶，其中5支不接種作為空白對照、5支接種金黃色葡萄球菌（

1.4.2 培養(yǎng)基無菌性試驗

取培養(yǎng)基5ml裝于已滅菌密封的西林瓶中，按照此方法取10個樣依次做好標記，其中9支為陰性實驗，1支接種金黃色葡萄球菌（

1.4.3 可接受標準

培養(yǎng)基微生物性能試驗：陰性實驗中應(yīng)無菌生長，接種的陽性對照實驗應(yīng)有菌生產(chǎn)。培養(yǎng)基無菌性試驗：陰性實驗應(yīng)無菌生長，陽性對照實驗應(yīng)有菌生長。

1.5 生產(chǎn)用材料及設(shè)施無菌性檢查

1.5.1 丁基膠塞檢查

在每次灌裝前隨機抽取用于灌裝的膠塞10個。取5個放入已滅菌的裝有硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基試管中，做好標記，于30-35℃培養(yǎng)14天，另5個放入已滅菌的裝有改良馬丁液體培養(yǎng)基試管中，做好標記，于23-28℃培養(yǎng)14天。

1.5.2 西林瓶的無菌檢查

在每次灌裝前隨機抽取10支西林瓶，取5支放入已滅菌的裝有硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基的三角燒瓶中，做好標記，于30-35℃培養(yǎng)14天，另5支放入已滅菌的裝有改良馬丁液體培養(yǎng)基三角燒瓶中，做好標記。

1.6 潔凈室門、墻、窗、地面檢查

對門、墻、窗、地面、設(shè)備進行接觸碟法微生物培養(yǎng)，接觸后，放到培養(yǎng)箱中30-35℃培養(yǎng)。培養(yǎng)72小時，觀察并記錄結(jié)果。

1.7 培養(yǎng)基模擬凍干

將半壓塞的大豆胰蛋白胨液體培養(yǎng)基傳至凍干箱擱板，關(guān)閉箱門，按產(chǎn)品凍干曲線運行，用無菌空氣破真空。

1.8 軋蓋

模擬凍干結(jié)束，啟動凍干機液壓系統(tǒng)，對制品進行全壓塞，軋蓋后，將樣品倒置，充分振搖，使瓶內(nèi)的液體培養(yǎng)基充分與玻璃瓶內(nèi)壁和膠塞接觸。

2 培養(yǎng)基模擬灌裝合格標準

培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的首次驗證，每班次應(yīng)當連續(xù)進行3次合格試驗。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗通常應(yīng)當按照生產(chǎn)工藝每班次半年進行1次，每次至少一批。培養(yǎng)基灌裝容器的數(shù)量應(yīng)當足以保證評價的有效性。批量較小的產(chǎn)品，培養(yǎng)基灌裝的數(shù)量應(yīng)當至少等于產(chǎn)品的批量。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的目標是零污染，應(yīng)當遵循以下要求：（1）灌裝數(shù)量超過10000支時：a.有1支污染，需調(diào)查；b.有2支污染，需調(diào)查后，進行再驗證。（2）發(fā)生任何微生物污染時，均應(yīng)當進行調(diào)查。

參考文獻

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篇7

摘要通過從充實實驗設(shè)備改善實驗條件，優(yōu)化實驗內(nèi)容和合理按排實驗時間，增加設(shè)計性、綜合性、實踐性實驗內(nèi)容，加強對實驗課的組織、指導(dǎo)，重視實驗成績考核和記分等多方面對獸醫(yī)微生物學(xué)實驗教學(xué)改革，有效地提高了獸醫(yī)微生物學(xué)實驗教學(xué)的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞獸醫(yī)微生物學(xué);實驗課;教學(xué)改革;措施

獸醫(yī)微生物學(xué)實驗課是一門操作技能較強的課程，同時又是與實踐緊密聯(lián)系的課程，如何通過系統(tǒng)學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握獸醫(yī)微生物學(xué)的規(guī)范化、科學(xué)化操作技能，牢固樹立無菌觀念和熟練掌握無菌操作技術(shù)，培養(yǎng)學(xué)生嚴謹求實的科學(xué)態(tài)度、提高分析問題、解決問題的能力是獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)及實驗課教學(xué)的關(guān)鍵[1-2]。但在傳統(tǒng)的獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)中，多是把實驗課教學(xué)看成對理論教學(xué)的補充和驗證，實驗課教學(xué)時間一般占課程總學(xué)時的比例較小。學(xué)時少，實驗課項目單一，上實驗課常是以驗證和演示實驗為主，缺乏綜合性、設(shè)計性試驗、實踐性實驗項目，嚴重限制了獸醫(yī)微生物學(xué)實驗課教學(xué)效果和質(zhì)量的提高，且限制了學(xué)生才能的發(fā)揮。為此，筆者在多年的獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)中，對其實驗課教學(xué)做了一些改革嘗試與探索，取得了良好的教學(xué)效果。

1加強實驗室建設(shè)，改善實驗條件

當今世界科學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展，獸醫(yī)微生物學(xué)的發(fā)展更是迅速，動物免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)等領(lǐng)域的研究成果及其內(nèi)容不斷拓寬。因此，培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新意識、動手操作實踐技術(shù)能力，提高教師和學(xué)生科研能力，是目前獸醫(yī)微生物學(xué)教學(xué)的重要任務(wù)。抓住學(xué)院本科教學(xué)評估、提高教學(xué)質(zhì)量、加強實驗室建設(shè)的有利時機，科學(xué)利用教學(xué)、科研經(jīng)費，加強實驗室的硬件建設(shè)。先后增添了一些高檔的實驗設(shè)備，如超純水制備儀、全自動高壓蒸氣滅菌器、PCR儀、BS-1E數(shù)顯振蕩培養(yǎng)箱、HH·CP-7W型二氧化碳細胞培養(yǎng)箱、20~200 mL 8道移液器(Transferpetteg-8，20～200 mL)、超低溫冰箱、超凈工作臺、全自動血液分析儀、生物濕微鏡等，更新了老化的常規(guī)設(shè)備。為獸醫(yī)微生物學(xué)實驗課等課程的教學(xué)改革奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)和有利條件。

2重視實驗課教學(xué)，合理安排實驗時間

獸醫(yī)微生物學(xué)實驗教學(xué)，過去傳統(tǒng)的教學(xué)方法多是以教師為主，學(xué)生在教師的安排下，根據(jù)實驗教材內(nèi)容進行基礎(chǔ)理論驗證和基本技能的訓(xùn)練，這種教學(xué)方法養(yǎng)成了學(xué)生的依賴思想，只是模仿操作不動腦深入思考，不利于發(fā)揮其創(chuàng)造性思維和積極主動操作能力。學(xué)生對實驗課不重視，上實驗課只是理論課的一種附屬品，做好做差無關(guān)緊要。對此改革獸醫(yī)微生物實驗教學(xué)，首先將實驗課時由原來占總課時的1/4增加到1/3以上，重視實驗課教學(xué)，期終考試時增加實驗課內(nèi)容的比例，促使學(xué)生重視實驗課學(xué)習(xí)。

實驗課教學(xué)中有些實驗連續(xù)很強，在以往上實驗課時，多是2學(xué)時上1個實驗，有些實驗時間夠用，有些實驗則不夠用，有些實驗做起來觀察則需要等時間，例如細菌的培養(yǎng)及在培養(yǎng)基生長性狀觀察，病毒的HA和HI試驗、培養(yǎng)基的制備過程中的消毒等。結(jié)果是2學(xué)時后學(xué)生去上其他課程，不能及時觀察結(jié)果或不能善始善終地把整個試驗結(jié)果觀察和記錄完整，當時不能看到結(jié)果的，過后學(xué)生又不及時去觀察結(jié)果，寫實驗報告時沒有真實的實驗數(shù)據(jù)，而是相互傳抄同組或其他同學(xué)的結(jié)果。有的實驗為了趕在2學(xué)時內(nèi)做完，就得省略步驟減少環(huán)節(jié)，這樣勢必導(dǎo)致結(jié)果不夠準確。針對實驗教學(xué)中的現(xiàn)實問題，改革實驗課教學(xué)，首先合理安排實驗，確保實驗的連續(xù)性。具體做法是:將實驗課安排在下午，2個學(xué)時不能做完的可以借用課外活動時間將實驗繼續(xù)做下去直至做完。需要時間長的實驗，任課教師自行安排時間，可以提前讓做好預(yù)習(xí)和實驗的準備工作，可以安排在課間、課外活動時間或其他業(yè)余時間進行結(jié)果觀察，想盡辦法讓學(xué)生能將每個實驗都能完整地完成，即不能因?qū)嶒炚n程時間安排不當而影響實驗的質(zhì)量。

3改革實驗課教學(xué)，優(yōu)化實驗項目

3.1改變單獨實驗為綜合系列實驗

對《獸醫(yī)微生物學(xué)實驗指導(dǎo)》的內(nèi)容進行精心備課，優(yōu)化選擇重新組織實驗項目，把原來單獨實驗變?yōu)榫C合性系列實驗，將有關(guān)實驗內(nèi)容有機地串聯(lián)起來，結(jié)合臨床實際開好各個試驗。例如將《獸醫(yī)微生物學(xué)實驗指導(dǎo)》的實驗1“顯微鏡的構(gòu)造和使用”、實驗2“細菌基本形態(tài)及構(gòu)造觀察”、實驗3“細菌抹片的制備及染色”有機結(jié)合在一起，可定名為“細菌涂片的制備、染色、鏡檢及基本形態(tài)的觀察”，用4個學(xué)時，分2次開出。具體作法:一是分發(fā)已培養(yǎng)好的各種細菌供學(xué)生抹片、染色、鏡檢，每個學(xué)生只涂其中1~2種，同學(xué)之間可互相交換觀察;二是將學(xué)生不易制出的莢膜、鞭毛等標本片放在示教鏡下或從多媒體幻燈片中，供學(xué)生操作間隙輪流觀看，教師指導(dǎo)學(xué)生觀察。這樣做的效果是用4個學(xué)時開出了3個實驗的內(nèi)容，節(jié)約了時間，增加了實驗的內(nèi)容量，給同學(xué)們增加了操作的機會。可將實驗指導(dǎo)中的實驗4“培養(yǎng)基的制備”、實驗5“細菌分離培養(yǎng)及移植”、實驗6“細菌在培養(yǎng)基中的生長表現(xiàn)及無能運動力檢查”、實驗7“細菌的生化試驗”、實驗8“細菌的藥敏試驗”等5個實驗有機地結(jié)合在一起，以生產(chǎn)實踐中最常見疫病大腸桿菌病為實例，以分離培養(yǎng)大腸桿菌為主線，驗證培養(yǎng)基制作是否規(guī)范合格和細菌的生化特性，觀察細菌在培養(yǎng)基上的生長性狀表現(xiàn)，穿行細菌運動力檢查，并可用藥物敏感性試驗的結(jié)果指導(dǎo)養(yǎng)殖場進行藥物治療。可用6個課時分成3個下午進行上課完成5個實驗，使實驗更加緊湊，保持實驗的連續(xù)性和內(nèi)容的完整性，加深學(xué)生對細菌培養(yǎng)性狀觀察、致病性、生化特性等試驗印象。同時，培養(yǎng)了學(xué)生理論聯(lián)系實際、分析、解決實際問題的應(yīng)用能力。

3.2減少演示性和驗證性實驗，增開綜合性設(shè)計性實驗

傳統(tǒng)的實驗教學(xué)方法是過多的開設(shè)演示性和驗證性實驗，實驗內(nèi)容很難適應(yīng)人才培養(yǎng)的要求[3]。而綜合性、設(shè)計性實驗?zāi)芗ぐl(fā)學(xué)生的創(chuàng)新意識，培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力，使學(xué)生初步掌握科學(xué)研究的思維方式，分析問題和解決問題的方法。為此壓縮了演示性和驗證性實驗的實驗時間，增加和加大了綜合性、設(shè)計性實驗的開設(shè)力度。綜合性、設(shè)計性實驗安排在相關(guān)理論課學(xué)習(xí)和基礎(chǔ)實驗操作技能熟練掌握之后，例如:仔豬大腸桿菌病(仔豬黃痢、仔豬白痢、仔豬水腫)、雞的新城疫和雞傳染性法氏囊的微生物學(xué)診斷，分別在細菌各論和病毒各論講過之后，這時學(xué)生對基本理論已經(jīng)掌握，并對培養(yǎng)基的制備、細菌的分離培養(yǎng)、涂片、染色觀察、生化試驗、藥敏試驗、病毒的HA試驗、HI試驗以及沉淀試驗等實驗操作技能都已經(jīng)掌握，使綜合性、設(shè)計性實驗開設(shè)的條件已經(jīng)成熟。任課教師結(jié)合實際和疫病發(fā)展流行趨勢，引導(dǎo)學(xué)生深入基層養(yǎng)殖場(戶)調(diào)查研究，把學(xué)生分成若干小組，每個小組做1個綜合性設(shè)計實驗，為養(yǎng)殖場(戶)做1個細菌性或病毒性疫病的微生物學(xué)診斷。從病料采取、送檢、病原體的分離鑒定到治療方案的制定等，都在教師指導(dǎo)下學(xué)生自己做。這樣有利于培養(yǎng)學(xué)生創(chuàng)新意識和實際操作能力，吸引學(xué)生自覺的參與到新的實驗內(nèi)容中去，啟發(fā)學(xué)生的智力，開發(fā)學(xué)生的智商，培養(yǎng)學(xué)生分析問題和解決實際問題的能力[4-5]。學(xué)生完成一個實驗之后，非常有成就感，學(xué)生深有體會地說:“一個綜合性實驗幾乎應(yīng)用了整個獸醫(yī)微生物學(xué)的所有知識，好像把全書都串通復(fù)習(xí)一遍”。設(shè)計性綜合性實驗的增加，提高了學(xué)生綜合應(yīng)用所學(xué)知識分析解決實際問題的能力，有利于學(xué)生綜合素質(zhì)的培養(yǎng)和提高。

4改革實驗教學(xué)方法，提高實驗教學(xué)質(zhì)量

4.1合理分配實驗教學(xué)時間

增加設(shè)計性、綜合性實驗的開設(shè)務(wù)必增加了課時數(shù)，為把實驗教學(xué)搞好就要充分利用有限的教學(xué)時間，任課教師根據(jù)實驗項目合理搭配實驗教學(xué)時間，如培養(yǎng)基制備實驗中，高壓滅菌需要等時間，利用這個空間可以增加貴重儀器的使用與保養(yǎng)、玻璃器皿的洗刷、干燥、包扎、試管棉塞的制作等內(nèi)容。再如在HA和HI試驗時，加完樣后需要等時間觀察結(jié)果，可以利用給學(xué)生講述試驗中紅血球的制備和稀釋方法等，時間得到充分利用。

4.2認真組織教學(xué)

合理分組使每個學(xué)生都有動手操作的機會，避免一些學(xué)生不動手的現(xiàn)象。首先指導(dǎo)學(xué)生對試驗內(nèi)容很好地預(yù)習(xí)，教師先提出一些啟發(fā)性問題讓學(xué)生帶著問題預(yù)習(xí)。例如進行細菌分離培養(yǎng)實驗前老師提出“哪些細菌是需氧的?厭氧的或兼性厭氧的?”做細菌制片染色前提出“哪些細菌是陽性菌?哪些細菌是陰性菌?”再如做病毒的凝集紅血球試驗前老師提出“哪些病毒具有凝集紅血球的特性?”這樣使學(xué)生即預(yù)習(xí)了實驗又復(fù)習(xí)了理論課的內(nèi)容知識，通過預(yù)習(xí)和查閱資料得出結(jié)論，調(diào)動了學(xué)生自覺學(xué)習(xí)的積極性，培養(yǎng)了學(xué)生的創(chuàng)新思維和創(chuàng)新能力;培養(yǎng)了學(xué)生自學(xué)能力、實踐能力和知識遷移能力[6]。實驗課上學(xué)生變被動學(xué)習(xí)為主動學(xué)習(xí)，學(xué)生都積極主動認真地做好試驗中的每個環(huán)節(jié)。

4.3重視實驗結(jié)果分析和實驗報告的完成

過去學(xué)生上實驗課往往忽視試驗結(jié)果的觀察、分析和實驗報告的完成，相互傳抄實驗數(shù)據(jù)結(jié)果，有時出現(xiàn)錯誤結(jié)果也不查找問題出在哪。實驗報告是學(xué)生實驗課的主要作業(yè)，完成實驗報告不僅使學(xué)生全面總結(jié)實驗過程，分析實驗結(jié)果得出科學(xué)結(jié)論，而且有利于學(xué)生養(yǎng)成嚴謹?shù)目茖W(xué)態(tài)度，同時實驗報告也是科學(xué)科技應(yīng)用的一種形式。寫好實驗報告可以提高學(xué)生分析問題和解決問題的能力，因此每次實驗后都要求學(xué)生就試驗結(jié)果進行細致觀察、記錄、分析、討論，提出自己的觀點和見解。在試驗過程中難免會出現(xiàn)實驗結(jié)果誤差等現(xiàn)象，對此要查找問題出現(xiàn)的原因，吸取教訓(xùn)避免類似問題在以后的實驗中再次發(fā)生。

5重視實驗成績，注意實驗內(nèi)容考核

實驗成績是衡量學(xué)生掌握實驗內(nèi)容的一個標準，同時也是反應(yīng)實驗教學(xué)方法是否得當?shù)闹匾侄危虼藢嶒灣煽兊脑u分必須納入獸醫(yī)微生物課程的學(xué)習(xí)成績之中。實驗成績要細致化、嚴格化，從實驗的不同方面綜合評分。首先是學(xué)生實驗操作技能要單獨技能考試，占實驗總成績的60%;其次是實驗結(jié)果的分析與討論和實驗報告的書寫(是否規(guī)范、條理、清晰等)情況，占實驗總成績的20%，從實驗報告中顯示;實驗理論記憶性的內(nèi)容占總實驗成績的20%。實驗成績占該門課總成績的30%～35%。重視實驗成績的記分，使學(xué)生上實驗課出勤率、做實驗的積極性、主動動手操作意識及創(chuàng)新思維能力都大大提高，實驗教學(xué)效率也隨之提高。

6結(jié)語

總之，通過獸醫(yī)微生物學(xué)實驗課教學(xué)的改革嘗試，改掉了以往學(xué)生做試驗不思索、按部就班地照書本內(nèi)容和教師講的程序機械性操作的模仿做法。增強了學(xué)生學(xué)習(xí)的自主性和主動性，提高了學(xué)生對所學(xué)知識應(yīng)用于實踐的能力，拓寬了學(xué)生獲取知識的渠道，培養(yǎng)了學(xué)生的創(chuàng)新意識和獨立工作的能力。使學(xué)生通過實驗中的失敗體驗和成功喜悅領(lǐng)會到了實驗的真諦，進一步激發(fā)了學(xué)生學(xué)好獸醫(yī)微生物學(xué)、做好實驗、深入實踐探索研究的積極性。

7參考文獻

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篇8

【摘要】：通過基于護理職業(yè)崗位開展細菌學(xué)綜合實踐教學(xué)改革的實踐，培養(yǎng)學(xué)生綜合利用所學(xué)知識與技術(shù)思考、分析、解決問題的能力。提高學(xué)生的參與意識、動手能力和團結(jié)協(xié)作的能力，幫助學(xué)生完善護理職業(yè)素質(zhì)所要求的細致、嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)，樹立從事護理工作的使命感、責任心，全面提升護理專業(yè)學(xué)生的綜合素質(zhì)。

【關(guān)鍵詞】：病原微生物，實踐教學(xué)，改革

現(xiàn)代職業(yè)教育理念要求培養(yǎng)高素質(zhì)技能型人才。護理專業(yè)學(xué)生未來從事的工作要求學(xué)生既要具備扎實的醫(yī)學(xué)理論知識和實踐能力，同時要養(yǎng)成嚴格遵守規(guī)章制度和操作規(guī)程的好習(xí)慣，具備實事求是、嚴謹踏實的工作作風(fēng)，具有良好的職業(yè)道德和高度的責任感。

病原微生物學(xué)是護理專業(yè)重要的專業(yè)基礎(chǔ)課程，課程理論和實踐教學(xué)對學(xué)生職業(yè)素養(yǎng)的培養(yǎng)具有重要的影響意義。

1病原微生物學(xué)實踐教學(xué)的現(xiàn)狀分析

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)是一門實踐性很強與臨床醫(yī)學(xué)中感染性疾病密切聯(lián)系的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)課程，主要研究與人類疾病有關(guān)的病原微生物的基本生物學(xué)特性、致病性、檢測方法以及相關(guān)感染性疾病防治措施。實訓(xùn)教學(xué)是其重要組成部分。病原微生物學(xué)實訓(xùn)課不僅是學(xué)生了解和掌握微生物學(xué)實驗基本方法和操作技術(shù)的一個學(xué)習(xí)過程，同時也是鍛煉學(xué)生觀察、思維、解決問題等綜合能力的重要途徑。護理專業(yè)的學(xué)生通過實訓(xùn)課，可以更好的掌握病原微生物的“形”，對病原微生物具備感性的認識，在理解和鞏固微生物理論知識的同時，掌握微生物的研究方法和實訓(xùn)基本技能。增強無菌觀念，培養(yǎng)實事求是、嚴謹踏實的科學(xué)態(tài)度。因此，開展好病原微生物學(xué)實訓(xùn)教學(xué)對培養(yǎng)護理專業(yè)學(xué)生有著重要意義。

目前，病原微生物學(xué)實訓(xùn)課主要以細菌學(xué)為主，其系統(tǒng)性不強，內(nèi)容零散繁多，例如：細菌形態(tài)和結(jié)構(gòu)的觀察、革蘭氏染色、培養(yǎng)基制備、細菌接種、消毒滅菌、細菌的藥物敏感性試驗等。各試驗之間相對獨立，似乎都沒有直接的聯(lián)系，學(xué)生對這樣的實訓(xùn)不易感興趣，不利于激發(fā)出學(xué)生的學(xué)習(xí)熱情。同時，在傳統(tǒng)的病原微生物學(xué)實訓(xùn)教學(xué)模式為：課前預(yù)習(xí)—課堂實訓(xùn)—提交實訓(xùn)報告—教師評閱。先由教師向?qū)W生介紹實訓(xùn)原理、方法，以示教為主，然后，學(xué)生被動地按照要求去做，往往是用已知的標準菌株來驗證理論，學(xué)生缺乏學(xué)習(xí)的主動性積極性，忽視了創(chuàng)新思維能力的培養(yǎng)。作為主體的學(xué)生在這種舊的教學(xué)模式中始終處于一種被動學(xué)習(xí)狀態(tài)，常出現(xiàn)學(xué)生不重視預(yù)習(xí)、實訓(xùn)時不動手、課后不認真總結(jié)，抄襲實訓(xùn)報告、有些學(xué)生在微生物實訓(xùn)課上，無菌觀念不強，取菌液時滴在實訓(xùn)臺上也不消毒，工作服隨意放置，上完實訓(xùn)課不消毒洗手就直接到食堂吃飯，對實訓(xùn)室的生物安全重視不夠等不良現(xiàn)象。

2基于護理職業(yè)崗位的病幫派微生物學(xué)綜合實踐教學(xué)改革

針對當前的情況來看，要提高學(xué)生的學(xué)習(xí)主觀能動性，讓學(xué)生成為實訓(xùn)教學(xué)活動的主體，全面提升學(xué)生職業(yè)綜合素質(zhì)，更好地適應(yīng)護士職業(yè)崗位的要求，實踐教學(xué)模式的改革勢在必行。

近年來，我院病原微生物學(xué)課程組開展了基于護理職業(yè)崗位的細菌學(xué)綜合實踐教學(xué)改革的研究，從病原生物學(xué)實訓(xùn)中較為散亂的細菌學(xué)各論入手，把細菌學(xué)總論及各論的實訓(xùn)內(nèi)容有機地合為一體，將以往總論教學(xué)中“細菌形態(tài)觀察、革蘭染色法、培養(yǎng)基的制備、細菌的接種與人工培養(yǎng)、細菌生化反應(yīng)、細菌生長現(xiàn)象的觀察、藥物敏感試驗、消毒滅菌”等實訓(xùn)與各論中“化膿性球菌及腸道桿菌的分離鑒定”實訓(xùn)項目重新整合為兩個實用性強的綜合性實訓(xùn)項目，改為“臨床標本病原性細菌的分離鑒定”和“環(huán)境中細菌的分布調(diào)查與消毒滅菌”。更方便學(xué)生系統(tǒng)學(xué)習(xí)和掌握微生物學(xué)基本的實訓(xùn)技能。

2.1臨床標本病原性細菌的分離鑒定

教師針對某種病原微生物的檢測和防治給出典型的臨床病例，如皮膚的化膿性感染、感染性腹瀉、敗血癥等臨床常見感染性疾病。學(xué)生可選擇感興趣的病例以小組為單位，從標本的采集與處理、培養(yǎng)基的制備、微生物分離培養(yǎng)開始對所分離到的微生物進行形態(tài)、生化、及毒力方面的鑒定，測定所分離到的微生物對抗生素敏感性，要求學(xué)生自己準備，自己操作，自己總結(jié)，自己分析。實訓(xùn)全過程教師只作引導(dǎo)，由小組成員合作完成。最大限度發(fā)揮學(xué)生學(xué)習(xí)的主觀能動性。實訓(xùn)圍繞病例進行，提高學(xué)生對本專業(yè)的學(xué)習(xí)興趣及主動性，加強與臨床的緊密聯(lián)系，縮短基礎(chǔ)與臨床之間的距離，為學(xué)生以后臨床學(xué)科的學(xué)習(xí)和從事臨床工作打好基礎(chǔ)。

2.2環(huán)境中細菌的分布調(diào)查與消毒滅菌

老師帶領(lǐng)學(xué)生做關(guān)于手、實驗室地面、桌面和空氣中細菌的調(diào)查，在采取各種消毒措施后進行對比，驗證消毒滅菌的效果和影響因素。通過實訓(xùn)，使同學(xué)們認識到細菌無處不在，加強學(xué)生的無菌操作觀念。

實訓(xùn)結(jié)束后，學(xué)生還要完成詳盡的實驗報告，包括實訓(xùn)設(shè)計方案、實訓(xùn)操作程序、實訓(xùn)材料及預(yù)期的實訓(xùn)結(jié)果、正式實訓(xùn)的實施步驟、實訓(xùn)結(jié)果的觀察和記錄、對實訓(xùn)結(jié)果的整理和分析等。實訓(xùn)報告的撰寫也可以訓(xùn)練學(xué)生的書面表達能力、邏輯思維能力和歸納總結(jié)能力，為將來科技論文的寫作打下良好的基礎(chǔ)。

在綜合性實訓(xùn)項目中，始終注重強化學(xué)生實驗技能的培養(yǎng)，如顯微鏡油鏡的正確使用、接種針的使用、細菌的培養(yǎng)法、各種無菌操作方法等基本操作技能。

3結(jié)語

通過綜合性實踐教學(xué)，可使學(xué)生把基本理論知識和基本實踐技能結(jié)合起來，利于培養(yǎng)學(xué)生綜合利用所學(xué)知識與技術(shù)思考、分析、解決問題的能力。提高學(xué)生的參與意識、動手能力和團結(jié)協(xié)作的能力，幫助學(xué)生完善護理職業(yè)素質(zhì)所要求的細致、嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)，樹立從事護理工作的使命感、責任心，全面提升護理專業(yè)學(xué)生的綜合素質(zhì)。

參考文獻

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[2]楊朝曄.高職護理專業(yè)病原生物學(xué)與免疫學(xué)教學(xué)改革探索[J].中國高等醫(yī)學(xué)教育，2009，23（9）：64-65.

篇9

關(guān)鍵字：微生物、薄膜過濾、初始污染菌、沖洗方法驗證、校正因子、產(chǎn)品檢驗。

一、目前檢測產(chǎn)品上微生物總數(shù)時，洗脫微生物的方法主要有以下幾種：

1.袋蠕動法

將試驗部分和一已知容量的洗提液裝在一個無菌胃型袋中，在袋中開動往復(fù)式攪動棒，使洗脫液貫串試驗部分內(nèi)外。該方法適用于軟質(zhì)、纖維類材料。

2.超聲法

將實驗部分浸入裝有已知容量洗提液的適當容器中，在超生波清洗中處理容器及其內(nèi)裝物或?qū)⒊暡ㄌ筋^浸入到容器內(nèi)洗脫液中進行處理。超聲波也能使微生物失去活性，尤其當大能量傳輸時，使用探頭會比在超聲波清洗中更有可能使其失去活性。

3.振動法（機械或手工方式）

將實驗部分浸入裝有已知容量的洗提液的適當容器中，并在機械振動（如往復(fù)式、軌道式或機械腕搖床）里進行振動。也可用手工振動，但其效力會因操作人員而異。

4.渦旋混合法

將實驗部分浸入裝有已知容積浸提液的密閉容器內(nèi)，該密閉容器放置在形成渦旋的漩渦混合器的旋轉(zhuǎn)托盤上。渦旋的形成取決于手動施加的壓力，渦旋中的變化會引起微生物去除的變化。

5.沖洗法

讓浸提液通過試驗部分的內(nèi)腔。可以靠重力或加泵來使液體流動。另外也可將洗脫液沖入產(chǎn)品中并夾住和抖動。

6.攪拌法

將試驗部分浸入裝有已知容積洗提液的適當容積內(nèi)，在規(guī)定的一段時間內(nèi)攪拌或搓搖試驗部分。

7.擦拭法

準備一個無菌的棉拭子占浸提液將產(chǎn)品里外擦拭一遍，將拭子放入準備好的浸提液中作為檢驗液檢驗。

以上七種方法均有優(yōu)缺點，雖然方法很全面，但結(jié)合一次性使用血液管路和麻醉針的特點，本文介紹一種綜合提取的方法進行檢測，并對該方法進行了方法學(xué)的驗證。該方法有較好的洗脫效果，能基本反映這幾種產(chǎn)品的微生物負載情況。

二、具體方案如下所述

1.所用設(shè)備及要求

1.1環(huán)境要求

檢測此項目需在萬級凈化室，同時滿足在百級操作臺中進行。

1.2所用設(shè)備及器皿工具

高壓蒸汽滅菌機、干熱滅菌機、恒溫培養(yǎng)箱、移液管、培養(yǎng)皿、顯微鏡、試管、三角瓶、無菌袋、滅菌盒、接種環(huán)、酒精燈、剪刀、鑷子、無菌手套、無菌工作服、真空泵、濾膜、濾瓶。

1.3培養(yǎng)基、菌種、浸提液（PH=7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液）

2.方法驗證和產(chǎn)品試驗的全過程

2.1計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查

2.1.1所用菌種

大腸埃希菌[CMCC(B)44102]

金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]

枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]

生孢梭菌[CMCC(B)64941]

白色念珠菌[CMCC(F)98001]

黑曲霉[CMCC(F)98003]

2.1.2.菌液制備

2.1.2.1將大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物分別接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，將生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物接種至硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中，35 ℃培養(yǎng)24小時，分別用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋成每毫升含50-100cfu的菌液。

2.1.2.2將白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁培養(yǎng)基上，24℃培養(yǎng)48小時，用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋成每毫升含50-100cfu的菌液。

2.1.2.3將黑曲霉菌的孢子接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上，24℃培養(yǎng)5天，，加入5毫升含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后用一支管口包有無菌棉花且能過濾菌絲的10毫升吸管吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每毫升含孢子數(shù)50-100cfu的孢子懸液。

2.1.3 培養(yǎng)基適用性檢查

取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各50--100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置30-35℃培養(yǎng)48h，計數(shù)；取生孢梭菌50--100cfu加入到25-30毫升硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（含瓊脂，每15g培養(yǎng)基加入0.4g瓊脂）的試管中，振蕩混勻，平行制備兩支試管。置30--35℃厭氧條件下培養(yǎng)24h，計數(shù)。

取白色念珠菌、黑曲霉各50--100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿混勻凝固置23-28℃培養(yǎng)72h計數(shù)。

取白色念珠菌50--100cfu注入無菌平皿中，立即傾注酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，平行制備2個平皿混勻凝固置23-28℃培養(yǎng)72h計數(shù)。同時用相應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。

2.1.4 結(jié)果判定若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的70%，且菌落形態(tài)大小與對照培養(yǎng)基上的一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。

2.2沖洗方法驗證

2.2.1管類產(chǎn)品

取滅菌前樣品，用200毫升PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗內(nèi)腔，振搖1分鐘(30次/分

鐘）匯集沖洗液作為檢驗液，膜過濾法過濾，于相應(yīng)溫度恒溫箱中培養(yǎng)，計數(shù)。重復(fù)操作沖洗

4次。

2.2.2實體類產(chǎn)品

直接放入一無菌的袋子中，加入100毫升PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，振搖1分鐘(30

次/分鐘）匯集沖洗液作為檢驗液，膜過濾法過濾，于相應(yīng)溫度恒溫箱中培養(yǎng)，計數(shù)。重復(fù)

操作沖洗4次。

2.2.3瓊脂覆蓋

將樣品剪成10cm長的段，較大產(chǎn)品放入無菌的盒子中，較小的產(chǎn)品直接放入培養(yǎng)皿中，傾倒

溫度不超過45℃的融化的相應(yīng)培養(yǎng)基，培養(yǎng)后計數(shù)。

2.2.4 每種產(chǎn)品根據(jù)性質(zhì)再重復(fù)以上操作進行3次獨立的平行試驗

2.2.5校正因子的計算：

2.2.5.1總回收量：為每套產(chǎn)品沖洗四次總的菌落數(shù)加上瓊脂覆蓋菌落數(shù)。2.2.5.2計算公式 ：去除率=（首次處理移除量/總菌落數(shù)）*100%平均回收率=去除率/3 。

校正因子=1/平均回收率

2.2.6每次試驗的菌回收率應(yīng)不低于70%。若任一次試驗中菌回收率低于70%，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除產(chǎn)品的抑菌活性，并重新進行方法驗證。

2.3產(chǎn)品的檢驗：

2.3.1 薄膜過濾法：

2.3.1.1管類產(chǎn)品

2.3.1.a取滅菌前樣品，用200毫升PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗內(nèi)腔，振搖1分鐘(30次

/分鐘）匯集沖洗液作為檢驗液，膜過濾法過濾，于相應(yīng)溫度恒溫箱中培養(yǎng)，計數(shù)。重復(fù)操

作沖洗4次。

2.3.1.b封閉產(chǎn)品兩端開口，放入一個無菌的袋子中，加入400毫升PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖

液，振搖1分鐘(30次/分鐘）匯集沖洗液作為檢驗液，膜過濾法過濾，于相應(yīng)溫度恒溫箱

中培養(yǎng)，計數(shù)。重復(fù)操作沖洗4次。

2.3.1.2實體類產(chǎn)品直接放入一無菌的袋子中，加入100毫升PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，振

搖1分鐘(30次/分鐘）匯集沖洗液作為檢驗液，膜過濾法過濾，于相應(yīng)溫度恒溫箱中培養(yǎng)，

計數(shù)。重復(fù)操作沖洗4次。

2.3.2瓊脂覆蓋：將樣品剪成10cm長的段，較大產(chǎn)品放入無菌的盒子中，較小的產(chǎn)品直接放入培養(yǎng)

皿中，傾倒溫度不超過45℃的融化的相應(yīng)培養(yǎng)基，培養(yǎng)后計數(shù)。

2.3.3 陰性對照試驗：取試驗用浸提液100毫升，照上述薄膜過濾法操作，作為陰性對照。陰性對照

不得有菌生長。

2.4培養(yǎng)和計數(shù)

細菌培養(yǎng)3天，逐日點計菌落數(shù)，厭氧菌培養(yǎng)3天，計數(shù)，霉菌、酵母菌培養(yǎng)5天，逐日點計菌

落數(shù)，必要時延長培養(yǎng)時間至7天進行菌落計數(shù)報告。按菌數(shù)報告規(guī)責報告菌數(shù)。

2.4.1 菌數(shù)報告規(guī)則：計數(shù)整套供試品的菌落數(shù)，若濾膜上無菌落生長，以小于1報告菌數(shù)，如大于1

則以實際菌數(shù)乘以校正因子加瓊脂覆蓋菌數(shù)的值報告整套產(chǎn)品的菌落數(shù)。

2.4.2整套產(chǎn)品菌落數(shù)計算

產(chǎn)品菌數(shù)=（內(nèi)壁4次沖洗所有菌數(shù)*內(nèi)壁校正因子+外壁4次沖洗所有菌數(shù)*外壁校正因子）+瓊脂覆蓋菌數(shù)

三、總結(jié)

此方法在對一次性使用醫(yī)療器材上微生物提取檢驗過程，較其它方法簡便易行，數(shù)據(jù)較準確，適用于這些產(chǎn)品的檢測。

四、參考文獻

[1]ISO11737-1:2006 Sterilization of medical devices―Microbiological methods---Part1:Determination of a population of micoroorganisms on products

[2]中華人民共和國藥典2010版

[3]YY0267-2010心血管植入物和人工器官血液凈化裝置的體外循環(huán)血路

[4]ISO10993-1:1997 Biological evaluation lf medical devices―Part 1:Evalration and testing(GB/T16886.1-2001醫(yī)療器械生物學(xué)評價第1部分：評價與試驗)

[5]ISO10993-12:2002 Biolofical evaluation of medical devices---Part 12:Sample preparation and refrence materials(GB/T16886.12-2005醫(yī)療器械生物學(xué)評價第12部分：樣品制備與參照樣品)

[6]GB15980-1995一次性使用醫(yī)療用品衛(wèi)生標準

篇10

傳統(tǒng)的微生物學(xué)檢驗技能考核成績?yōu)?00分制,考核內(nèi)容包括:平時成績占總成績的10%、實驗報告占總成績的20%和基本技能操作(包括:細菌的涂片與革蘭染色、培養(yǎng)基的分裝及細菌的接種、顯微鏡的使用及染色結(jié)果的判斷等)占總成績的70%。傳統(tǒng)的考核方法沒有考查學(xué)生是否對微生物檢驗全過程的掌握情況,如標本的收集和處理、鑒定程序、具體的鑒定方法及結(jié)果的報告方式等內(nèi)容。同時,一站式的技能操作考核,部分學(xué)生在面對老師進行考核時心理緊張導(dǎo)致發(fā)揮失常而不能獲得與自身水平相符的成績。因此,該考核方式不能客觀真實的評價學(xué)生對微生物學(xué)檢驗技能的掌握情況和教學(xué)效果,進行微生物學(xué)技能考核評價體系的改革勢在必行。

2微生物學(xué)檢驗技能考核評價體系的規(guī)范與改革

為了較全面的考核學(xué)生的微生物學(xué)檢驗綜合操作能力、規(guī)范技能考核體系,筆者在原有考核體系的基礎(chǔ)上對微生物學(xué)檢驗的實驗考核體系進行了改革和創(chuàng)新,細化了考核指標和評分細則,增加了綜合能力的考核。

2.1平時成績(10%)

由原來只考查學(xué)生實驗課的出勤率改變成包括平時實驗課課堂提問、出勤率、實驗紀律和衛(wèi)生值日等考核內(nèi)容,主要反映學(xué)生參與實驗的積極性、學(xué)習(xí)態(tài)度和責任心等內(nèi)容。

2.2實驗報告(20%)

實驗報告是學(xué)生對實驗內(nèi)容的概括和總結(jié),體現(xiàn)了學(xué)生分析問題和解決問題的能力,評價實驗報告是實驗教學(xué)中不可缺少的環(huán)節(jié)。由原來只評價實驗報告的完成情況,規(guī)范為評價包括報告的完整性、規(guī)范性、結(jié)果分析的合理性等內(nèi)容,改革后更加有利于學(xué)生重視平時的實驗和實驗報告書寫的規(guī)范性。

2.3基本技能操作(30%)

采用老師對學(xué)生“一對一”的考試形式,時間為30min,主要考核學(xué)生對細菌的涂片與革蘭染色、培養(yǎng)基的分裝及細菌的接種、顯微鏡的使用、染色結(jié)果的判斷等基本操作技能及口試對微生物生化鑒定試驗原理的掌握情況。筆者在原有的技能考核標準上細化了評分細則,同時,基本技能操作分值由原來的70%降低為30%。

2.4微生物檢驗綜合能力考核(40%)

為了全面的考核學(xué)生微生物學(xué)檢驗綜合技能,筆者增加了微生物學(xué)檢驗綜合能力考核模塊。考核形式為,教師為學(xué)生提供血液、尿液、糞便、痰液等臨床未知病原體標本和相應(yīng)的臨床資料,學(xué)生抽簽決定考試標本,考試時間為4～5d,主要考核學(xué)生在微生物檢驗過程中對臨床標本的處理、鑒定程序的制定、鑒定方法的選擇和鑒定結(jié)果的報告方式等內(nèi)容。

3微生物學(xué)檢驗技能考核體系的應(yīng)用評價