智子疑鄰的大意范文
時間：2023-03-16 08:03:23
導語：如何才能寫好一篇智子疑鄰的大意，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公務員之家整理的十篇范文，供你借鑒。
篇1
此情只應天上有
金岳霖先生的愛情是最浪漫，也是最純潔的。他終生未娶，因為他深深愛戀林徽因。金岳霖對林徽因的人品才華贊羨至極，林徽因對他亦十分欽佩敬愛，因此，他們之間因為能夠心靈溝通，從而成為彼此的知己。
金岳霖和梁思成夫婦交情很深，長期以來，一直是毗鄰而居，常常是各踞一幢房子的前后進。偶爾不在一地，他也總是跑到梁家居住。林徽因的丈夫梁思成曾坦言：“最愛林徽因的人，其實是金岳霖?！苯鹪懒卦鵀榱核汲?、林徽因夫婦寫過一副對聯：“梁上君子，林下美人?！?/p>
1955年，林徽因去世，金岳霖異常痛苦，他當時只說了一句話：“林徽因走了！”然后便號啕大哭。在林徽因追悼會上，金岳霖與鄧以蜇聯名題寫的挽聯格外引人注目：“一身詩意千尋瀑，萬古人間四月天。”林徽因死后多年，一天，九十歲的金岳霖鄭重其事地邀請一些至交好友到北京飯店赴宴，眾人大惑不解。開席前他宣布說：“今天是林徽因的生日！”頓使舉座感嘆不已。
【運用點撥】
對于名人素材，在運用時不能不加選擇、不加修飾地堆砌，而且名人素材不一定非要運用到議論文中充當論據。掌握一定的技巧和方法，也可以創造性地運用這些素材。高考《考試大綱》對作文有一個要求，就是“感情真摯”。歷史文化人物和我們距離較遠，因此，在運用歷史文化人物素材時，要把握一個原則，那就是要有“我”的存在。如果沒有“我”的存在，那就不可能有真摯的感情，也就不可能運用此類素材寫出好文章。
要有“我”的存在就要用“我心”去感受歷史人物。這就要求我們在表現人物的精神和思想時，要深入到人物的“內心”，用“我”的心去感知“他”的心， “他”的精神和思想。
【運用示例】
“我的話，只對她說?！边@句看似輕描淡寫的話語，多年以后的今天拿出來，依然那么有分量，砸得人心隨之一顫。那個生命中，無法替代的那個女人啊，就這樣，用一生的時間，跟著你，愛著你，感受你，以心撫摸你，卻總是傷了自己。
有人說，成熟的心境在于，可以一邊哭泣，一邊微笑。金岳霖，那留在世人面前的微笑背后，有誰讀懂了他的淚？淺愛深深，靜默于心。淡淡地，看似無味，卻心甘情愿地交付了一生。
這個偉大的哲學家，使自己的一生都活在哲學的范疇，理性，而從不逾越。他愛林徽因，可以當著梁思成的面，愛得自然，愛得坦然，愛得無私無邪，亦無怨無悔。多么神奇的大智慧！
這樣的愛，就像午后的陽光，慵懶，倦怠，卻異常的清醒，熱辣。從午后，拉至深夜，就好像一個輪回般的久遠綿長，日復一日。
俗話說，用進廢退。可這個沉默理性的大男人，竟以沉默，讓自己的愛意常好常新，永不退轉。愛一個人，能讓自己的心常安常在，該是怎樣的大愛，有著怎樣的緘默情懷。
【素材呈現二】
一通哭笑不得的緊急電話
金岳霖很有紳士氣度，但他又常常表現得很不像紳士。他酷愛養大斗雞，屋角還擺著許多蛐蛐缸。吃飯時，大斗雞堂而皇之地伸脖啄食桌上菜肴，他竟安之若素，與雞平等共餐。有一天，金岳霖給他的朋友醫科博士楊步偉打電話，說有要緊的事，想請楊步偉進城，說越快越好，事辦好了請吃烤鴨。楊步偉是醫生，以為金岳霖的家人生了急病，便和趙元任將信將疑地進了城。到了金岳霖家，他才知道不是人的事而是雞的事。原來，金岳霖養了一只雞，三天了，一個蛋生不下來。楊步偉聽了，又好氣，又好笑。把雞抓來一看，原來金岳霖經常給它喂魚肝油，以至于雞有十八磅重，因此雞蛋下不來，但是已有一半在外面，楊步偉一掏就出來了。金岳霖一見，贊嘆不已。事后，為表慶賀，他們一起去烤鴨店吃烤鴨。
【適用話題】心態、人生態度、率性而為……
【運用點撥】穿插素材，印證觀點。
【運用示例】
讓別人折磨自己，是弱者;自己折磨自己，是傻子;真正的智者，是永遠不會囿于困境之中的。就像金岳霖，作為品格高尚的紳士，卻從來不拘泥于紳士的形式，為了一只三天不下蛋的母雞，而給醫科博士打緊急電話，足以證明他以自己的率性享受著最快樂的生命。他是一個真正的智者，一個能夠駕馭生活的智者。
【素材呈現三】
重寫《知識論》
《知識論》是金岳霖的嘔心瀝血之作，命運多舛。金岳霖曾回憶：“花時間最長、災難最多的是《知識論》?？箲鹌陂g，這本書我在昆明就已寫成。那時日本飛機常來轟炸，我只好把稿子帶著跑，到了北邊山上，我就坐在稿子上。那次轟炸時間長，天也快黑了，我站起來就走，稿子就落在山上了。等到我記起回去，已不見了蹤影。一本六七十萬字的書不是可以記住的，所謂再寫只可能是從頭到尾寫新的。”世間帝王坐失江山的不乏其人，學者坐失手稿的卻罕見，這件事當年就傳為笑談。
篇2
【摘要】 目的 探討拉米夫定對慢性乙型肝炎(CHB)患者治療前后血清IFNγ、IL4、IL6水平的影響及臨床意義。方法 根據48例患者對拉米夫定治療的應答效應情況分組（完全應答組27例，部分應答組14例，無應答組7例），采用雙抗體夾心ELISA法分別檢測治療前后血清IFNγ、IL4、IL6水平，取健康獻血員20例作對照。結果 48例患者治療前后IFNγ、IL4、IL6水平與對照組比較有統計學意義(P＜0.01)；不同應答效應IFNγ、IL4、IL6含量不同，完全應答組反應快于不完全應答組和無應答組（P＜0.01）。結論 拉米夫定治療應答效應和血清IFNγ、IL4、IL6水平及細胞平衡的恢復程度有關，血清IFNγ、IL4、IL6水平可作為早期預測拉米夫定療效的免疫學指標，治療后慢性乙型肝炎患者Th1 /Th2功能平衡狀態恢復是完全應答的保證。
【關鍵詞】 拉米夫定；慢性乙型肝炎；病毒載量；細胞因子
IFNγ屬于Th1細胞因子，IL4、IL6屬于Th2型細胞因子，以IFNγ作為Thl型鑒別指標;IL4、IL6作為Th2型鑒別指標［1］，它們在慢性乙型肝炎(CHB)病毒持續感染的發病機理中起重要作用。機體免疫功能紊亂特別是細胞免疫功能紊亂可能是引起肝損害和病程遷延不愈的主要原因。Th1／Th2免疫應答的研究將有助于更好地闡明疾病的發生發展過程，并可望通過調節優勢應答類型達到預防疾病、治療疾病的最終目的。為了闡明拉米夫定對慢性乙型肝炎患者血清中Th1、Th2型細胞因子表達水平的影響，我們檢測了拉米夫定治療前后慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA載量及血清中IFNγ、IL4、IL6的水平，探討拉米夫定治療CHB的理論依據。
1.病例選擇
2005年3月～12月期間在我院住院治療的慢性乙型肝炎患者48例，男性32例，女性16例，年齡19～48歲，平均年齡35±5歲。診斷符合2000年西安會議修訂的《病毒性肝炎防治方案（試行）》的標準［2］。HBVDNA含量(Copies.ml-1)將CHB患者分為高病毒載量組(＞107 Copies.ml-1)24例，中病毒載量組(106～105 Copies.ml-1)13例和低病毒載量組(＜105 Copies.ml-1)11例，另選擇20例獻血員為對照組，基本資料同治療組。
2.治療方法
受選者給予拉米夫定(賀普丁，英國葛蘭素威康公司提供)，每日1次，每次100 mg口服，療程24周，治療前后查HBVDNA，肝功能、血常規、IFNγ、IL4、IL6。
3.療效判斷標準
完全應答：HBeAg、HBVDNA陰轉、ALT復常；部分應答：HBeAg、HBVDNA、ALT 中有一項或二項未達到完全應答標準；無應答：HBeAg、HBVDNA、ALT三者均未達到完全應答標準。
4.相關檢測
抽取靜脈血5 ml分離血清，置-80℃備檢。檢測HBVDNA試劑盒購自上海復星生物技術有限公司，IFNγ、IL4、IL6采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA），試劑盒由深圳晶美生物工程有限公司提供。
5.統計學處理
1計量資料以均數±標準差 (-±s )表示，組間比較采用t檢驗，用SPSS 11.0統計軟件分析，以P＜0.05為有統計學意義。結
果
1.治療前不同HBV載量組IFNγ、IL4、IL6的水平 不同的病毒載量，細胞因子的水平各不相同，IFNγ水平隨著病毒載量的降低而升高， IL4、IL6則相反，各組與對照組以及中、低載量組與高載量組比較均有統計學意義（P＜0.05或0.01），見表1。表1 治療前不同HBV載量組IFNγ、IL4、IL6的水平注：與對照組比較，P＜0.01；與高載量組比較，P＜0.05
2.治療前后IFNγ、IL4、IL6水平比較 IFNγ水平隨著拉米夫定治療后增加但仍低于對照組，各組比較有統計學意義（P＜0.05或0.01）；IL4、IL6的水平則與IFNγ呈負相關，治療后明顯下降，但仍高于對照組，各組比較有統計學意義（P＜0.05或0.01），見表2 。 表2 治療前后IL6、IL4、IFNγ水平 注：與對照組比較，P＜0.01；與治療前比較，P＜0.05
3.治療后不同應答效應者的細胞因子水平比較 經拉米夫定治療后，完全應答27例，部分應答14例，無應答7例。不同應答效應組IFNγ、IL4、IL6含量各不相同。各組患者IFNγ水平依次是完全應答＞部分應答＞無應答，各組患者之間IFNγ水平比較有統計學差異(P＜0.05或0.01)，而IL4、IL6含量則相反，隨著治療應答的增強，水平有所下降(P＜0.05或0.01)，見表3。 表3 治療后不同應答組IFNγ、IL4、IL6的水平比較
討
論
乙型肝炎的發病機制十分復雜，目前認為宿主免疫系統功能紊亂是其病理損傷的主要機制［3］，大量證據表明，細胞免疫機制是乙型肝炎感染的發病機制之一，而 T細胞是人體主要免疫細胞，是免疫系統發揮功能的重要組成部分，在乙型肝炎病毒的清除和發病機制中起著重要作用［4］。T細胞免疫應答及其效應機制主要有分泌不同細胞因子的Th亞群細胞所調節，Th1細胞主要分泌IL2、IL12、IFNγ和TNFβ/a，介導細胞免疫應答；Th2主要分泌IL4、IL5、IL6和IL10，調節體液免疫反應。拉米夫定是在我國和國外均被批準用于治療慢性乙型肝炎的第一個口服藥，其作用靶位是抑制HBVDNA聚合酶的活性，使HBVDNA的復制受到抑制，但不影響病毒蛋白的表達，故拉米夫定往往能快速抑制HBVDNA復制使之在檢出限以下。因此可通過拉米夫定降低病人體內的病毒含量來恢復機體的 T淋巴細胞免疫功能，從而達到清除病毒的目的［5］。
肝細胞的破壞并不是通過乙肝病毒的復制直接造成的，而是通過機體的免疫系統識別肝細胞膜上的靶抗原，在殺傷病毒的同時也破壞肝細胞，釋放出胞內的轉氨酶，故轉氨酶升高往往提示機體有一定的免疫清除能力，這時如果加用抗病毒藥物，往往能達到較好的療效。高水平病毒復制和抗原負載是T細胞對HBV抗原低反應性的主要因素，通過藥物治療降低患者體內乙肝病毒數量/抗原量能否增強慢性乙肝患者體內的T細胞免疫反應是目前研究的熱點之一。本研究結果表明慢性乙型肝炎患者不同病毒載量組血清中IFNγ、IL4、IL6水平各不相同，與對照組比較有顯著性差異，高病毒載量組IFNγ含量最低，并隨著病毒載量的降低而增加；而 IL4、IL6水平則明顯升高，并隨著病毒載量減少而下降，表明慢性乙型肝炎患者存在一定程度Th1/Th2型細胞的失衡，以Th2型細胞因子表達占優勢。經過拉米夫定抗病毒治療以后能夠有效抑制病毒復制和減少病毒抗原負載，并能夠成功重建CTL反應，使Th1/Th2恢復平衡。早年的一項研究認為，拉米夫定可以使血清HBVDNA迅速下降，但不能重新恢復受損的HBV特異性T細胞反應。最近的研究認為，拉米夫定可以重建HBV特異性細胞免疫［6］，本研究結果也顯示經拉米夫定治療后，隨著病毒負載的下降，TH1/TH2型細胞的失衡可以恢復。在不同的治療反應中，完全應答組免疫細胞因子表現為IFNγ水平顯著升高，IL4、IL6含量明顯降低，各組患者IFNγ水平依次是完全應答＞部分應答＞無應答，各組患者之間IFNγ水平比較有統計學意義(P＜0.05或0.01)，而IL4、IL6含量則相反，隨著治療應答的增強，水平有所下降，因此本研究表明拉米夫定通過降低體內的病毒含量恢復Th1/Th2平衡。機體清除HBV的關鍵是健全的特異性免疫功能，抗病毒治療則強化機體的清除病毒能力，最終清除病毒還須機體的特異性免疫功能，細胞免疫在抗HBV感染中起著核心的作用。
總之，HBV感染可導致慢性乙型肝炎患者細胞免疫功能改變，HBVDNA的載量和HBeAg的含量不僅是乙型肝炎病毒復制的直觀依據，也是激發機體免疫反應而引起肝臟損傷的重要原因之一［7］，HBVDNA復制增加可進一步導致慢性乙型肝炎患者細胞免疫功能紊亂。IFNγ、IL4、IL6的水平能很好的反映治療后患者機體的免疫功能狀態，可以間接反映機體抗HBV免疫功能的恢復情況并作為拉米夫定療效評價的參考指標。
參考文獻
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篇3
[關鍵詞] 宮頸癌；DAPK1；甲基化
[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）35-0016-02
研究發現宮頸癌的發生發展與基因表達異常有關，其中基因甲基化導致基因表達下降是目前發現的基因突變外最重要發病機制[1]。死亡相關蛋白激酶1（death-associated protein kinase 1，DAPK1）為新近發現的抑癌基因，在腫瘤的發病機制中扮演重要角色，在多種腫瘤中可檢測到其甲基化抑制基因表達狀態[2，3]。本研究采用甲基化特異性PCR檢測宮頸癌患者和正常人DAPK1基因啟動子甲基化，研究DAPK1基因啟動子甲基化在宮頸癌中的臨床意義。
1 資料與方法
1.1 研究對象
選擇2010年1月～2013年6月初治宮頸癌患者為研究目標，經臨床表現、癥狀體征、影像學、細胞學和（或）病理組織學確診為宮頸癌。本組研究對象包括80例宮頸癌患者，年齡32～78歲，平均（51.3±12.7）歲。另以同期健康體檢的50例正常女性為對照，年齡30～80歲，平均（51.5±13.3）歲。兩組研究對象在年齡等方面的差異無統計學意義（P > 0.05）。
1.2 材料與試劑
所有研究對象宮頸取活檢組織后立即提取基因組DNA，根據基因組DNA提取試劑盒操作說明進行，提取的DNA立即行甲基化檢測或-20℃保存待檢。
1.3 DAPK1基因啟動子甲基化檢測
采用甲基化特異性PCR檢測DAPK1基因啟動子甲基化。將提取的基因組DNA行重硫酸鹽轉化。引物采用在線引物設計軟件Methprimer（http：///cgi-bin/methprimer/methprimer.cgi）設計。轉化后的產物行PCR擴增，PCR序列見表1，反應條件為95℃預變性12 min，95℃變性1 min，65℃退火45 s，72℃延伸45 s，共32個循環，最后一輪72℃延伸10 min。
1.4 統計學分析
統計學分析采用SPSS 11.5統計學軟件。基因啟動子甲基化與臨床病理因素的關系比較采用χ2檢驗或Fisher精確概率法計算P值，P < 0.05為差異有統計學意義。
2 結果
47例宮頸癌患者活檢組織檢測到DAPK1基因啟動子甲基化，甲基化率為58.8%，正常女性中2例檢測到DAPK1基因啟動子呈甲基化，甲基化率為4.0%，宮頸癌患者宮頸活檢組織DAPK1基因啟動子甲基化率顯著高于正常女性（P < 0.05）。宮頸癌患者DAPK1基因啟動子甲基化率在年齡、吸煙史、酗酒史和病理類型方面無明顯差異（P > 0.05），在HPV感染、分化程度、腫瘤直徑、淋巴結轉移、遠處轉移和Figo分期中的差異有統計學意義（P < 0.05）。見表2。
表2 不同臨床病理因素宮頸活檢組織DAPK1基因啟動子甲基化的差異
3 討論
DNA甲基化是表觀遺傳學最主要的調控基因表達方式，甲基化可導致染色質空間結構發生改變，甲基化CG或結合甲基結合蛋白后可阻遏轉錄因子結合到轉錄起始點，導致基因無法復制而抑制基因表達，因真核生物的CpG島主要分布于啟動子區域，故目前研究DNA甲基化主要集中在基因啟動子[4，5]。越來越多的研究證實，基因啟動子甲基化導致基因表達下降，其甲基化率與腫瘤的病情及預后密切相關，較傳統的蛋白質水平的標志物具有更高的靈敏度和特異性[6]。DAPK1是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是新近發現的抑癌基因，可調控細胞周期，可促進正常細胞發生凋亡，與腫瘤的發生、發展緊密相關[7]。目前研究發現，DAPK1基因啟動子甲基化在消化道腫瘤、呼吸系統腫瘤等眾多腫瘤中處于高甲基化、表達缺失狀態，且其甲基化與病情及預后相關，甲基化率越高意味著腫瘤患者病情越重、預后越差[8]。我們的研究發現，宮頸癌患者DAPK1基因啟動子甲基化發生率顯著高于正常女性，證實與其他腫瘤類似，宮頸癌患者存在DAPK1基因啟動子高甲基化狀態。
在本研究中，腫瘤分化程度低、腫瘤直徑大、有淋巴結轉移、遠處轉移及分期晚的患者宮頸活檢組織DAPK1基因啟動子甲基化率顯著高于分化程度高、腫瘤直徑小、無淋巴結轉移、無遠處轉移及分期早的宮頸癌患者，這些數據均表明DAPK1基因啟動子甲基化在宮頸癌病情及預后中具有一定價值。有研究表明DAPK1基因甲基化與HPV感染密切相關，花敏慧等[9]研究證實DAPK1甲基化是宮頸癌發生的早期事件，且其與高危型HPV感染呈正相關?；谀[瘤的分化程度和臨床分期與宮頸癌病情及預后密切相關這一事實，推測DAPK1基因啟動子甲基化可作為宮頸癌基因層次的標志物，可能在宮頸癌的診斷、病情與預后評估中扮演重要角色。此外，DAPK1基因啟動子甲基化或許能反應HPV感染，尤其在無法直接取得HPV感染證據下檢測基因水平的DAPK1基因啟動子甲基化有利于對HPV治療做出評價。值得一提的是，目前尚無DAPK1與宮頸癌的相關研究，本研究僅僅在臨床病理因素方面發現DAPK1與宮頸癌的關系，其具體作用機制有待于進一步研究。
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篇4
[關鍵詞] 子宮內膜癌；丙氨瑞林；移植瘤
[中圖分類號] R737.33[文獻標識碼] A[文章編號] 1673-9701（2012）12-0006-03
子宮內膜癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，嚴重危害著女性的健康。近年來隨著對促性腺激素類似物GnRH-a研究的不斷深入及臨床工作者追求低毒高效安全的腫瘤內分泌治療方法熱情的不斷高漲，使其在治療子宮內膜癌方面越來越受到人們的青睞。GnRH-a是人工合成的促性腺激素，文獻報道[1，2]其對子宮內膜癌的治療已取得一定的效果。本研究通過不同劑量國產GnRH-a醋酸丙氨瑞林對裸鼠人子宮內膜癌移植瘤的生長及FHIT蛋白表達的影響，探討其對子宮內膜癌的治療作用及可能的機制，為GnRH-a在子宮內膜癌臨床治療方面提供理論基礎。
1 材料與方法
1.1 材料
人子宮內膜癌HEC-1-B細胞株，BALB/c雌性裸小鼠26只，醋酸丙氨瑞林，兔抗人FHIT多克隆抗體，免疫組織化學PV試劑盒。
1.2 細胞培養
將子宮內膜癌細胞株HEC-1-B培養于10%標準胎牛血清DMEM培養基中，溫度37℃，pH 7.2，相對飽和濕度為40%～60%，CO2體積分數為5%，當細胞達到70%～80%融合時，收集對數生長期的細胞制備成濃度為3.0×106/mL的單細胞懸液備用。
1.3 制備人子宮內膜癌裸鼠移植瘤模型及生長檢測
于裸鼠左前肢近腋窩處皮下注射子宮內膜癌細胞株HEC-1-B細胞懸液0.2 mL（約含6×106個細胞）后觀察：當瘤體直徑約0.3～0.5 cm時將瘤體最大和最小的兩只裸鼠舍去，剩余的隨機分成4組，分別給予18 μg/kg、36 μg/kg、72 μg/kg醋酸丙氨瑞林及生理鹽水背部肌肉注射，1次/d，共4周。每4天測量1次瘤體的長徑a和短徑b，計算其體積（mm3）=a×b2×0.52。實驗后計算抑瘤率（IR%）=[1-治療組平均腫瘤體積/對照組平均腫瘤體積]×100%。抑瘤率＞15%為藥敏陽性。
1.4 免疫組織化學法檢測FHIT蛋白在移植瘤中的表達
將瘤體標本經10%甲醛固定、石蠟包埋，制成4 μm左右切片，免疫組化染色后脫蠟浸水；熱修復2 min，3% H2O2室溫孵育滅活內源性過氧化氫酶；滴加兔抗人FHIT多克隆抗體（1∶75），4℃濕盒過夜；加二抗，PBS浸洗后DAB顯色，最后蘇木素襯染、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片、顯微鏡觀察。陰性對照組用PBS代替一抗。結果判斷標準：免疫組織染色后，FHIT蛋白在移植瘤中的陽性表達為棕黃色或棕褐色顆粒，主要定位于胞漿內，少部分定位于胞核。每張切片隨機選取5個不連續、不重復的高倍視野（×400），用病理圖像分析軟件分析各切片陽性產物的灰度值，取均數后行統計學處理。
1.5 統計學處理
數據采用SPSS 16.0軟件行統計學處理，計量數據以（x±s）表示，采用單因素方差分析及LSD-t檢驗，P ＜ 0.05為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 裸鼠移植瘤的形成及受不同干預后瘤體變化情況
接種子宮內膜癌細胞懸液后，局部稍發紅、腫脹，后出現圓形或橢圓形的瘤體逐漸增大，且邊界清楚，質由軟變硬，活動較好。裸鼠逐漸出現消瘦，反應力、活動力下降等癥狀。對照組腫瘤體積增長較快，其余各組均受到不同程度的抑制，而且隨著劑量的增加移植瘤生長明顯減慢。
2.2 繪制體積變化曲線（圖1）
可見各組腫瘤生長曲線斜率不同，斜率越小，腫瘤生長速度受抑制越明顯，各組之間差異有統計學意義（P ＜ 0.05）。同時可以看出干預組較對照組瘤體積均較小，差異有統計學意義（P ＜ 0.05），各組瘤體也隨劑量增加而明顯減小，且呈劑量依賴性。低、中、高劑量干預組的抑瘤率分別為17.0%、24.1%、42.1%，且組與組之間差異有統計學意義（P ＜ 0.05）。見表1。
2.3 醋酸丙氨瑞林對子宮內膜癌移植瘤中FHIT蛋白表達的影響
隨著丙氨瑞林劑量的增加，FHIT蛋白陽性染色逐漸加深。對各切片陽性產物進行灰度值分析（表2）發現：與對照組比較，各治療組中FHIT蛋白表達水平灰度值均明顯降低（P ＜ 0.05），且不同劑量組間差異也有統計學意義（P ＜ 0.05）。
3 討論
近年來，隨著對GnRH及其類似物研究的盛行，以及內分泌治療在治療腫瘤中的應用越來越廣泛，使GnRH及其類似物在治療子宮內膜癌方面也越來越受到人們的關注。GnRH-a的作用機制可能是直接作用于腫瘤，也可能通過抑制細胞增殖、促進細胞凋亡等間接起到抗腫瘤的作用，但其具體分子機制仍不十分清楚。近來有很多關于用GnRH-a成功治療復發或進展期子宮內膜癌的報道[3]，且沒有臨床數據顯示有副作用。Wang CB等[4]隨訪的年輕子宮內膜癌患者中，應用亮丙瑞林聯合甲地孕酮、他莫西芬的緩解率較不聯合亮丙瑞林治療的緩解率高。此外，也有研究報道，晚期子宮內膜癌經GnRH-a治療，可以得到很好的緩解，且耐受性好、毒性低。FHIT（脆性組氨酸三聯體基因）蛋白是新近發現的抑癌基因[5]，屬于組氨酸三聯體蛋白家族，具有抑癌活性，一方面可以促進微管的裝配，另一方面抑制細胞周期、促進細胞凋亡，從而抑制腫瘤生長。FHIT有1個專門與微球蛋白結合的位點，可促使微管集中，限制微管動態活動或干擾微管分散而阻止細胞的有絲分裂過程，抑制細胞過度增殖，使細胞受阻于增殖周期的S期，并激活Caspase28、Caspase29，引起Caspase酶介導的凋亡級聯反應[6]。Su TH及Ozaki K等[7，8]都證明了FHIT 基因的失活與子宮內膜腺癌的發生發展密切相關。
本研究選用免疫缺陷的裸鼠接種HEC-1B細胞株進行造模以觀察醋酸丙氨瑞林的抗子宮內膜癌作用。結果發現，子宮內膜癌皮下移植瘤的生長受到丙氨瑞林的抑制，呈劑量依賴性。劑量越大，腫瘤生長受抑制程度越深。免疫組化法對胞質中的FHIT蛋白活性檢測顯示隨著醋酸丙氨瑞林劑量的升高，FHIT的蛋白活性表達升高，顯示醋酸丙氨瑞林抑制子宮內膜癌移植瘤生長的作用機制可能通過上調FHIT蛋白的活性，激活Caspase28、Caspase29，引起Caspase酶介導的凋亡級聯反應，誘導子宮內膜癌細胞凋亡，發揮抗腫瘤作用。
綜上所述，GnRH及其類似物在一定程度上可以抑制子宮內膜癌的生長，其可能作為子宮內膜癌內分泌治療的一種有效藥物來應用，因此展示在腫瘤患者面前的將是一個廣闊的前景。
[參考文獻]
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篇5
江蘇省徐州市中心醫院神經內一科，江蘇徐州 221009
[摘要] 目的 觀察并分析腦梗死應用依達拉奉聯合低分子肝素鈣治療的臨床療效。方法 資料隨機選自2011年1月—2013年12月本院診治的腦梗死患者60例，按照完全隨機法1:1分成兩組，30例對照組患者給予內科常規對癥處理，30例研究組患者在對照組基礎上給予依達拉奉聯合低分子肝素鈣治療，比較分析兩組患者的臨床療效、血液學指標與不良反應情況。結果 研究組患者治療后的不良反應發生率13.33%與對照組20.00%組間比較，無統計學意義（P＞0.05）；研究組治療后的NIHSS評分（5.38±2.87）分與舒張壓（11.37±0.95）kPa均比對照組（10.45±3.09）分與（13.27±0.87）kPa低，均有統計學意義（P＜0.05）；研究組患者治療后的血漿ET、AngⅡ、血小板粘附率水平均比對照組低，PT比對照組長，均有統計學意義（P＜0.05）。結論 腦梗死應用依達拉奉聯合低分子肝素鈣治療的臨床療效顯著，具有研究應用與推廣價值。
[
關鍵詞 ] 腦梗死;依達拉奉;低分子肝素鈣;療效
[中圖分類號] R743.42[文獻標識碼] A[文章編號] 1672-5654（2014）07（b）-0089-02
腦梗死是臨床常見的一種心血管疾病，具有起病突然、進展快、致殘率高的特點，臨床以抗凝血、溶栓與擴張血管治療手段為主[1]。為探討藥物治療方案對腦梗死患者神經和供血功能的影響，改善患者的生命質量，本文對腦梗死應用依達拉奉聯合低分子肝素鈣治療的臨床療效進行分析，結果報道如下。
1資料與方法
1.1一般資料
資料隨機選自2011年1月—2013年12月本院診治的腦梗死患者60例，按照完全隨機法1:1分成研究組和對照組，每組30例；對照組男女比例20:10，年齡46~80歲，平均（56.93±8.27）歲，病情分級為輕度9例，中度13例，重度8例；研究組男女比例19:11，年齡45~79歲，平均（56.84±8.15）歲，病情分級為輕度8例，中度13例，重度9例。兩組患者的性別、年齡以及病情分級等基線資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。
1.2診斷標準
參照全國腦血管疾病學術會議（第4屆）制定的腦梗死診斷標準[2]。
1.3納入與排除標準
納入標準：臨床征象符合腦梗死患者；均經頭顱CT或MRI掃描等輔助檢查證實；均簽署治療方案與臨床研究知情同意書；無應用相關藥物的禁忌癥[3]。排除標準：血壓≥200/120mmHg；CT確診為顱內出血者；腦梗死多次發作者；合并有血液系統與重要臟器功能衰竭疾病者；近期接受過抗凝藥物治療者。
1.4治療方法
對照組患者行常規內科對癥處理，包括降壓、調脂、降糖與抗感染等，同時給予阿司匹林腸溶片以抗血小板凝聚，胞二磷膽堿以保護神經，甘露醇以降顱內壓與抗腦水腫。研究組在對照組基礎上行依達拉奉（易達生，吉林省博大制藥有限公司，國藥準字H20051992）聯合低分子肝素鈣（速碧林，天津葛蘭素史克有限公司，國藥準字J20090006）治療，具體方法如下：靜脈滴注60mg依達拉奉+250mL5%葡萄糖（2次/d），皮下注射0.4mL低分子肝素鈣（12h/次），連續用藥7d。用藥結束后均來院復診，行凝血功能生化檢驗、血壓測定。
1.5觀察指標
臨床效果觀察指標：神經功能缺損量表(NIHSS）評分[4]與舒張壓；血液學觀察指標[5]：內皮素（ET)、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、凝血酶原時間（PT)以及血小板粘附率。
1.6統計學處理
本研究所有數據均用spss 20.0統計軟件進行分析處理，用標準差（x±s）表示計量資料，用χ2檢驗計數資料，用t檢驗組間比較，以P＜0.05時表示差異具統計學意義。
2結果
2.1兩組患者治療前后的臨床效果評價指標變化情況
兩組患者治療前后的NIHSS評分與舒張壓組內比較，治療后的兩項指標組間比較，差異均具有統計學意義（P＜0.05），詳細情況見表1。
2.2兩組患者治療前后的血液學指標水平變化情況
兩組患者治療前后的血漿ET、AngⅡ與PT水平組內比較，治療后的血漿ET、AngⅡ、PT與血小板粘附率組間比較，差異均有統計學意義（P＜0.05），如表2。
2.3兩組患者治療后的不良反應發生情況
研究組患者治療后的不良反應發生率為13.33%（4/30），其中出現皮疹1例，肝功能異常1例，皮下注射部位紅腫2例；對照組不良反應發生率為20.00%（6/30），其中出現上腹部不適2例，胃腸道反應4例；兩組患者不良反應發生率組間比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。
3討論
腦梗死形成的主要誘因為灌狀動脈粥樣硬化，當其產生的斑塊破裂并出現潰瘍時，血小板、不溶性纖維蛋白與血液中聚集的細胞會粘附在受損內膜下，逐漸形成附壁血栓，導致腦血管完全阻死[6]。腦梗死早期臨床表現為頭暈、肢體麻木等其他局源性神經功能缺損，中晚期可出現感覺障礙與運動障礙等癥狀，嚴重影響患者的日常生活與生存質量。本研究結果顯示，兩組患者治療后的NIHSS評分與舒張壓均明顯低于治療前，表明抗凝血治療方案在改善患者的神經功能損傷情況上具有一定臨床療效。且研究組治療后的NIHSS評分與舒張壓顯著低于對照組，比較差異具有統計學意義（P＜0.05），表明依達拉奉聯合低分子肝素鈣治療腦梗死患者，能夠降低患者動脈舒張壓，保留腦部動脈血管的通暢。
相關文獻研究表明，血漿ET通過與受體結合，將磷脂酶C分泌與形成自由基作用激活，進而導致血管內皮細胞與神經細胞的氧化與損傷，增加血腦屏障的通透性，促進異常栓子沿血循環進入動脈系統，引發動脈管腔的閉死，造成局部腦組織壞死，并指出AngⅡ的升高與腦梗死患者的缺血損傷的程度之間存在緊密聯系[7]。在本研究中，通過對兩組患者治療前后的血漿ET、AngⅡ水平變化情況進行分析，得出與治療前和對照組比較，研究組治療后的血漿ET、AngⅡ水平有明顯下降，提示依達拉奉聯合低分子肝素鈣治療能夠有效降低腦梗死患者的血管內皮素與血管緊張素Ⅱ的水平。起效機制為依達拉奉是一種新型自由基清除劑，通過抑制脂質以及黃嘌呤氧化酶活性，相應減少血栓周圍局部炎性介質的釋放，提高腦局部灌狀動脈的血流量，進而有效降低細胞內的自由基與血漿ET、AngⅡ濃度，避免血管內皮細胞與神經細胞的過度氧化與損傷，緩解腦梗死引發的局源性神經功能缺損癥狀。本研究結果與李東海的文獻研究成果類似，證實依達拉奉作為腦保護劑治療腦梗死患者，能夠緩解病情、降低神經損傷程度[8]。
同時，本研究通過對兩組患者治療前后的凝血功能指標水平變化情況進行分析，得出研究組治療后的PT與對照組與治療前比較有所延長，血小板粘附率有所下降，表明依達拉奉聯合低分子肝鈣素在延緩血小板表面凝血酶形成時間、減少血小板在損傷內膜下的粘附計數具有較理想的效果。分析原因是：低分子肝鈣素作為肝素的解聚衍生物，其具有肝素增強抗凝蛋白質抗凝活性與抑制凝血過程的作用，同時通過增加抗因子Xa活性與抗因子Ⅱa活性的比值，其具有更強的抑制血栓形成與促進血栓溶解的作用，進而有效改善患者缺血區域血液供應。且本研究結果得出兩組患者治療后的不良反應發生率組間比較，差異無統計學意義（P＞0.05），表明依達拉奉聯合低分子鈣素治療腦梗死具有一定的安全性。關于依達拉奉聯合低分子鈣素在治療腦梗死不同形成期的深入應用價值，需要臨床進一步研究驗證與證實。
綜上所述，腦梗死患者應用依達拉奉聯合低分子肝鈣素治療，能夠降低患者體內血漿ET、AngⅡ濃度，抑制血小板的凝聚作用，進而改善患者腦部缺血與神經功能缺損狀態，提高患者的生活質量，值得臨床推廣與應用。
[
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篇6
關鍵詞：血管內皮生長因子；基質金屬蛋白酶；肝癌
Abstract： objective： to detect liver cancer patient's blood and tissue in the expression of VEGF and MMP-9， analysis of the relationship of them and the significance. Methods： selected hospitalized in our hospital surgical excision of 40 patients with liver cancer as the experimental group， 40 patients without liver cancer patients as control group. Using enzyme-linked immunosorbent method and test into the group of patient's blood and immune histochemical method in the organization the expression of VEGF and MMP-9. Results： using the method of enzyme-linked immunosorbent VEGF on two groups of patients， the level of MMP-9 for testing， the results found that the experimental group patients in the blood， VEGF and MMP - 9 is significantly higher than the control group， the difference was statistically significant（P
Keywords： VEGF； MMP-9； Liver cancer
肝細胞癌（HCC） 的發病率逐年升高，其死亡率居全球第三位，極易發生復發轉移[1]。本實驗擬通過應用酶聯免疫吸附法及免疫組織化學法檢測在HCC血液及組織中VEGF、MMP-9的表達變化情況，探討VEGF、MMP-9的表達與HCC侵襲轉移的關系。
1.資料和方法
1.1 研究對象：
選取2012年1月至2015年1月在我院住院治療的HCC患者40例作為實驗組，經病理確診為HCC，且未經放、化療等抗腫瘤治療，男性20例，女性20例，年齡31-81 歲，平均（51.23±2.63）歲，取新鮮HCC中最典型的癌灶部分。對照組患者40例，包括局灶性增生性結節16例，肝血管瘤13例，肝外傷11例，男性20 例，女性20 例，年齡34-70歲，平均（50.78±3.87）歲。入組患者的性別、年齡等方面比較，差異無統計學意義（P>0.05）。
1.2 實驗方法
1.2.1 酶聯免疫吸附法檢測兩組患者血液中VEGF、MMP-9的表達
取入組患者的靜脈血，離心后凍存。計算出需要的板孔數；試劑盒常溫放置30min；標準品稀釋；每個濃度均設5個復孔，加樣；配液；洗滌；顯色；終止；酶標儀以450nm的波長處測量吸光值；繪制線性回歸方程，計算樣品濃度。
1.2.2免疫組織化學法檢測兩組患者組織中VEGF、MMP-9的表達
標本切除后立即取100 mg 標本，在- 80℃超低溫冰箱凍存備用。福爾馬林固定；脫水、透明；浸蠟、包埋；切片、貼片、烤片；脫蠟、脫水；高壓熱修復；阻斷：3%過氧化氫孵育10min；封閉：山羊血清封閉液室溫孵育10min；加一抗50ul室溫靜置1h；加辣根過氧化物酶標記的二抗50ul靜置10min；加鏈霉親和素-過氧化物酶50ul靜置10min；顯色；終止；蘇木素復染，鹽酸酒精分化；常規脫水、透明；封片；顯微鏡下觀察。
1.3 判斷標準
以已知的該指標的免疫組化染色陽性片作陽性對照，以PBS緩沖液代替一抗作陰性對照，HE切片作對照觀察。
VEGF、MMP-9 陽性結果判定以細胞核不染色，細胞膜或胞質內出現棕色或棕黃色顆粒為陽性染色，陰性（-）：染色細胞數≤10%；弱陽性（+）：染色細胞數11%～25%；陽性（++）：染色細胞數26%～50%；強陽性（+++）：染色細胞數>50%。以上均以（-）為陰性；（+）～（+++）為陽性。圖像分析：計算機圖像系統拍照，每張切片隨機選取5個視野，并記錄。
2.結果
2.1酶聯免疫吸附法檢測兩組患者血液中VEGF、MMP-9的表達
采用酶聯免疫吸附法對兩組患者VEGF、MMP-9的水平進行檢測，結果發現，實驗組患者血液中VEGF、MMP-9明顯高于對照組，差異有統計學意義（P
表1 兩組患者血液中MMP-2、MMP-9的表達比較
注：*實驗組與對照組比較，差異有統計學意義，P
2.2免疫組織化學法檢測兩組患者組織中VEGF、MMP-9的表達
采用免疫組織化學法對實驗組肝癌組織、對照組進行VEGF、MMP-9的檢測，結果發現，肝癌組織中VEGF強陽性（+++）表達30例，MMP-9強陽性（+++）表達31例，陽性率為87.5%、85%；對照組陰性（-）表達分別為37例、36例，陽性率分別為7.5%、10%。實驗組肝癌組織VEGF、MMP-9的表達陽性率較對照組明顯升高，差異有統計學意義（P
表2 實驗組及對照組VEGF、MMP-9的表達情況
注：*實驗組與對照組比較，差異有統計學意義，P
3.討論
惡性腫瘤發生侵襲、轉移是由多個步驟組成的過程，細胞外基質及基底膜的降解是腫瘤發生侵襲轉移的第一步，癌細胞突破細胞外基質及基底膜，向臨近組織浸潤，并逐漸向遠處轉移[2]。
血管內皮生長因子（VEGF）對血管內皮細胞的作用具有其效應的特異性。VEGF有許多生物學特性，包括促進血管內皮細胞分裂增殖，促進新生血管形成，增加血管的通透性【12】等[3]。新生的腫瘤血管，在其生成過程中，VEGF還能夠刺激內皮細胞產生多種MMPs，引發激活基質降解的作用，呈現“瀑布式反應”效應，引發腫瘤細胞更加容易穿透基質組織，影響腫瘤細胞的浸潤、轉移[4]。
基質金屬蛋白酶（MMPs）屬于蛋白水解酶，重點參與細胞外基質和基底膜的降解，與腫瘤的侵襲、轉移關系密切[5]。研究表明，在不同類型的腫瘤中，MMPs的表達水平與腫瘤的惡性程度相關，不僅利于細胞外基質的降解，而且能維持腫瘤微環境的穩定，促進腫瘤生長[6]。其中，Ⅳ型膠原酶（MMP-9）與腫瘤侵襲轉移最為密切。
在本實驗中，取入組實驗組及對照組患者的靜脈血，采用酶聯免疫吸附法檢測靜脈血中VEGF、MMP-9的表達發現，實驗組患者血液中VEGF、MMP-9水平明顯高于對照組。將實驗組患者手術切除的肝癌組織、癌旁組織以及對照組肝臟組織中，采用免疫組織化學法檢測其中VEGF、MMP-9的表達發現，肝癌組織中VEGF強陽性（+++）表達30例，MMP-9強陽性（+++）表達31例，陽性率為87.5%、85%，明顯高于對照組。這表明，肝癌患者VEGF、MMP-9均高表達[7]。MMPs在正常機體同樣存在，肝癌組織VEGF、MMP-9的表達高于癌旁組織，具有導致腫瘤侵襲轉移的能力[8]。對肝內膽管癌組織的研究發現，MMP- 9過表達是淋巴轉移的前兆，肝癌可能會發生侵襲轉移 [9-10]。這均與本實驗結果一致。
綜上所述，MMPs 是參與細胞外基質和基底膜降解的蛋白水解酶，VEGF、MMP-9在肝癌中表達升高，其表達水平與肝癌的侵襲和轉移密切相關，經過進一步研究探索，會成為判斷肝癌生物學行為、預測肝癌預后的新指標。
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篇7
[關鍵詞] Beclin1；MAP1LC3B；膽囊癌
[中圖分類號] R735.8 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）02（b）-0007-04
膽囊癌是膽道系統中最常見的惡性腫瘤，在消化系統惡性腫瘤中居第5位[1]。膽囊癌發病隱匿，惡性程度高，早期常無特殊臨床癥狀，大量臨床資料報道多患者在明確診斷時多已處于中、晚期，其中晚期患者5年生存率
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取2008年1月～2011年12月山西醫科大學第一附屬醫院普外科46例膽囊癌患者癌組織標本，取同期手術切除的46例慢性膽囊炎患者膽囊炎性組織作為對照。46例膽囊癌患者中，男20例，女26例，年齡43～80歲，平均65.5歲；46例膽囊炎患者中，男22例，女24例，年齡23～75歲，平均42.5歲。其中，腺癌40例，鱗癌6例；病理分級：低分化15例，中分化23例，高分化8例。患者術前均未接受任何放療、化療及生物、免疫治療。所取標本均經甲醛固定，石蠟包埋，切片后用免疫組織化學方法檢測。
1.2 試劑及方法
兔抗人Beclin1、MAP1LC3B單克隆抗體購于武漢三鷹生物技術有限公司，分別按1∶150及1∶200的比例稀釋后作一抗，二抗和DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物公司。按SP法說明，進行免疫組織化學檢測操作。采用陽性腫瘤標本作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。
1.3 結果判定標準
Beclin1與MAP1LC3B為淡黃色到棕褐色表達，顆粒狀或均質狀分布，Beclin1陽性表達見于細胞質和細胞膜；MAP1LC3B陽性表達見于細胞質。隨機選擇鏡下5個高倍視野觀察，計算1000個細胞，綜合陽性細胞比率和著色深度評估，陽性細胞百分比75%為3分；細胞無著色評0分，淡黃色評1分，棕黃色評2分，棕褐色評3分。結果取2項評分之積，0分表示陰性；1～9分表示陽性。
1.4 統計學方法
采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析；計數資料的比較采用χ2檢驗或者Fisher確切概率法；相關性采用等級相關的Spearman檢驗，以P
2 結果
2.1 免疫組織化學檢測結果
2.1.1 Beclin1表達情況 在膽囊癌組織及膽囊炎性組織中均有Beclin1表達，膽囊癌中Beclin1的陽性表達率（45.7%）顯著低于膽囊炎性組織（78.3%）（P
圖1 膽囊癌及慢性膽囊炎組織Beclin1表達免疫組織化學檢測結果
A.慢性膽囊炎；B.低分化膽囊癌；C.中分化膽囊癌；D.高分化膽囊癌
2.1.2 MAP1LC3B表達情況 MAP1LC3B 在膽囊癌和膽囊炎性組織中均有表達，膽囊癌中MAP1LC3B的陽性表達率（47.8%）明顯低于膽囊炎性組織（71.7%）（P
圖2 膽囊癌及慢性膽囊炎組織MAP1LC3B表達免疫組織化學檢測結果
A.慢性膽囊炎；B.低分化膽囊癌；C.中分化膽囊癌；D.高分化膽囊癌
2.2 Beclin1和MAP1LC3B表達情況與膽囊癌臨床病理特征的關系
Beclin1和MAP1LC3B在不同年齡、性別、癌組織分化程度患者中的表達水平差異無統計學意義（P>0.05），但與周圍臟器侵犯情況、TNM分期有關（P
表1 膽囊癌組織中Beclin1和MAP1LC3B的表達情況與臨床病理特征的關系（n）
2.3 Beclin1與MAP1LC3B 表達的相關性
Spearman 相關分析顯示，Beclin1與MAP1LC3B在膽囊癌組織中表達呈正相關（r=0.538，P
表2 Beclin1和MAP1LC3B在膽囊癌組織中表達的相關性（n）
3 討論
自噬介導的細胞死亡不同于凋亡（Ⅰ型程序性死亡），被稱為Ⅱ型程序性死亡。自噬過程在生物進化過程中高度保守，從低等生物酵母、果蠅到高等生物人均能找到自噬過程的同源基因。雙層膜結構包裹部分或整個細胞成分，形成自噬泡，然后與溶酶體結合，形成自噬溶酶體，導致被包裹的物質和自噬體內膜的降解。通過自噬過程，細胞實現氨基酸、核酸等生物分子的循環使用[7]，維持內環境穩態，清除衰老和無功能的細胞，抑制癌細胞過度增殖，清除病原微生物[8]。
自噬體的形成與自噬相關基因（ATG）有關[9]。自噬體的形成過程中有3個關鍵步驟：ULK1絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、ATG13和FIP200形成ULK1復合物；Beclin1與Ⅲ型PI3K形成復合體；微管相關蛋白輕鏈3（LC3）的脂化[10]。
Beclin1位于人染色體17q21上，大小約為150 kb，是酵母ATG6基因的同源物。Beclin1參與誘導自噬泡的行成。Beclin1與Ⅲ型PI3K形成復合體，能調控其他自噬蛋白在自噬前體中的結構定位[11]。研究發現，抗凋亡蛋白Bcl-2和Beclin1結合后，抑制Beclin1活性，降低自噬水平[12]。Liang等[13]發現與正常乳腺上皮結構中Beclin1蛋白高表達不同，乳腺癌組織中Beclin1表達顯著降低。此后諸多研究闡明，與正常組織對比，Beclin1在食管癌[14]、卵巢癌[15]、喉癌[16]等多種腫瘤組織中的表達均明顯降低，表明自噬對腫瘤的發生、發展有一定的抑制作用。
LC3是酵母ATG8基因的類似物，定位于自噬前體和自噬泡的膜表面。MAP1LC3B是編碼自噬相關蛋白的重要基因。在缺氧狀態下，MAP1LC3B和ATG5表達能調控轉錄子ATF4介導的腫瘤細胞轉移[17]。人MAP1LC3B并沒有發生羧基端的切割反應，而且羧基端的甘氨酸被賴氨酸代替，成為人MAP1LC3B發生修飾反應的活性位點。人LC3A的膜定位與Gly120位點的切割和修飾密切相關，進一步研究表明參與其修飾的分子也與其他基因不同，以上結果提示MAP1LC3B存在翻譯后修飾羧基端切割自噬作用[18-19]。
惡性腫瘤的轉移是一個多基因共同參與的多階段過程，Beclin1和MAP1LC3可能與其他調控自噬的基因共同作用，抑制腫瘤轉移。有研究表明PTEN可下調ClassⅠPI3K活性通路，可能使血管內皮細胞發生自噬性死亡，抑制新生血管形成，抑制腫瘤轉移。
綜上所述，Beclin1與MAP1LC3B在膽囊癌中表達水平降低，說明自噬活性的降低參與膽囊癌的發生、發展。在腫瘤中，自噬起著“雙刃劍”的作用，在低氧條件下，自噬可以通過能量物質的循環使用，避免細胞死亡；但自噬又是重要的細胞死亡途徑。而自噬在膽囊癌中的具體調控機制有待進一步研究。
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篇8
結果乳腺癌組COX-2、VEGF-C表達的陽性率及表達程度均高于纖維腺瘤組(P
【關鍵詞】 乳腺癌;環氧化酶-2;血管內皮生長因子C;淋巴結轉移
ABSTRACT: ObjectiveTo detect the expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and vascular endothelial growth factor C (VEGF-C) in breast cancer and get further understanding of the correlation between these two indexes and lymph node metastasis of breast cancer.MethodsImmunohistochemical SP method was adopted in detecting COX-2 and VEGF-C protein expression in 60 cases of invasive ductal carcinoma and 15 cases of breast fibroadenoma.ResultsThe positive rate and expression level of COX-2 and VEGF-C in breast cancer were higher than those in fibroadenoma group (P
KEY WORDS: breast cancer;cyclooxygenase-2; vascular endothelial growth factor C; lymph node metastasis
乳腺癌是全世界范圍內女性最常見的惡性腫瘤之一。經淋巴道轉移是乳腺癌最常見的轉移途徑，淋巴結受累程度是決定乳腺癌分期及選擇治療方案、判斷預后的關鍵因素之一。檢測與淋巴結轉移有關因素的表達對乳腺癌轉移和預后有一定預測價值。環氧化酶-2(cyclooxygenase-2， COX-2)是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，在乳腺癌、胃腸道腫瘤等多種腫瘤中呈過度表達。研究發現，COX-2可能通過上調血管內皮生長因子C(vascular endothelial growth factor C， VEGF-C)的表達而參與腫瘤新生血管的形成，利用抗VEGF及其受體的特異性單克隆抗體，可阻斷VEGF誘發的血管及淋巴管內皮細胞的信號傳導，抑制腫瘤血管、淋巴管的形成和經血液及淋巴道轉移。本研究通過檢測乳腺癌組織中COX-2及VEGF-C表達，探討其與淋巴結轉移的關系。
1材料與方法
1.1標本來源收集西安交通大學醫學院第一附屬醫院2006年3月～2007年5月間手術切除的乳腺非特異性浸潤性導管癌標本60例為研究對象，其中有腋淋巴結轉移的30例，無腋淋巴結轉移的30例;腫塊長徑≤2cm 23例，>2cm且≤5cm 30例，>5cm 7例。按WHO乳腺浸潤性導管癌病理學分級標準，Ⅰ級19例，Ⅱ級18例，Ⅲ級23例。所有患者均為女性，年齡29～70歲，平均(45.21±8.23)歲，術前均未接受放療、化療等其他治療，未合并其他系統惡性腫瘤，均行乳腺癌改良根治術，清除淋巴結數目均大于10枚。取門診乳腺纖維腺瘤手術標本15例作為對照。
1.2主要試劑鼠抗人COX-2、VEGF-C單克隆抗體及SP試劑盒均購自中山生物技術有限公司。
1.3檢測方法采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組織化學染色方法(SP法)，操作在室溫下進行。切片常規脫蠟脫水，微波抗原修復，3mL/L雙氧水孵育，正常山羊血清室溫孵育30min;分別滴加鼠抗人COX-2、VEGF-C單克隆抗體50μL，4℃過夜;滴加生物素標記二抗40～50μL，37℃孵育15min;滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育15min;DAB顯色，蘇木素復染，酒精脫水，樹膠封片。每批免疫組化染色均采用PBS稀釋液代替一抗作為陰性對照，用已知陽性的結腸組織切片作陽性對照。
1.4結果判斷結果判定標準根據SHIMIZU法[1]改良而成：顯微鏡下細胞質顯示棕黃色顆粒視為陽性著色。結合著色范圍和著色強度，對圖片進行半定量處理。①著色范圍積分：在顯微鏡下(×200)隨機選取5個視野，以陽性染色細胞占視野中所有細胞的百分比均值作為著色范圍：≤1%為0分，2%～20%為1分，21%～50%為2分，≥51%為3分。②著色強度積分：無著色為0分，淺著色為1分，深著色為2分。上述兩項積分相乘之積為范圍強度積分：≤1.9為陰性(-)，2～2.9為弱陽性(+)，3～3.9為陽性()，≥4為強陽性()。
1.5統計學處理應用SPSS16.0統計分析軟件行統計學處理。數值均以均數±標準差(±s)表示，計數資料比較使用χ2檢驗或Fisher確切概率法，計量資料使用t檢驗，采用Spearman法進行相關分析。P
2結果
2.1COX-2蛋白的表達情況
2.1.1兩組COX-2蛋白陽性表達率的比較
COX-2主要表達于乳腺癌癌細胞的胞質中，呈淡黃色或棕黃色顆粒，細胞膜及細胞核未見染色。60例乳腺癌組織中，COX-2的陽性率為73.3%(44/60)，明顯高于對照組的20.0%(3/15)，差異具有統計學意義(χ2=14.590，P
2.1.3COX-2蛋白表達程度的比較乳腺癌組COX-2蛋白表達程度明顯高于對照組(P
2.2VEGF-C蛋白的表達情況
2.2.1兩組VEGF-C蛋白陽性表達率的比較VEGF-C主要表達于乳腺癌癌細胞的胞質中，呈淡黃色或棕黃色顆粒，細胞膜及細胞核未見染色。乳腺癌組VEGF-C表達陽性率為71.7%(43/60)，明顯高于對照組的13.3%(2/15)，差異具有統計學意義(P
2.2.2VEGF-C表達與乳腺癌淋巴結轉移的關系乳腺癌淋巴結轉移組VEGF-C表達的陽性率明顯高于淋巴結無轉移組，差異有統計學意義(P
2.2.3VEGF-C蛋白表達程度的比較
乳腺癌組VEGF-C蛋白的表達程度明顯高于對照組，差異具有統計學意義(P
2.3乳腺癌中COX-2與VEGF-C蛋白聯合表達的分析
2.3.1COX-2與VEGF-C蛋白表達的關系經Spearman相關分析，乳腺癌組COX-2與VEGF-C表達呈正相關關系(r=0.582)。
2.3.2COX-2與VEGF-C聯合表達與乳腺癌淋巴結轉移的關系
COX-2及VEGF-C均陽性組淋巴轉移發生率(76.7%)明顯高于COX-2及VEGF-C均陰性組(6.7%)，差異有統計學意義(χ2=6.481，P
3討論
COX是一種膜結合型的含有血紅素的蛋白，是催化花生四烯酸(arachidonic acid， AA)轉化成為前列腺素(prostaglandin， PG)和血栓素(thromboxane， TX)的限速酶[2]。目前已識別出COX的3種同工酶：COX-1、COX-2和COX-3。COX-2是誘導型酶，正常生理狀態下在大多數組織中表達極低或不表達，但是它可以被許多刺激因素所誘導而發生高表達，因而可作為對包括腫瘤在內的多種疾病進行治療性干預的良好靶點。COX-2已被報道表達于包括胰腺癌、肺癌、乳腺癌等在內的多種惡性腫瘤中，而應用COX-2抑制劑有助于腫瘤的預防和治療，而研究COX-2與惡性腫瘤的關系具有重要的臨床意義[3]。
VEGF又名血管通透因子或血管調理素，具有促進細胞有絲分裂，防止內皮細胞凋亡、誘導血管生成、增加微血管通透性等作用。VEGF-C具有誘導淋巴管生成及血管生成的雙重作用。研究證實，多種人類腫瘤組織如乳腺癌、前列腺癌、肺癌、大腸癌等中VEGF-C表達均增高，且VEGF-C表達上調與這些腫瘤的淋巴結轉移密切相關，因而，VEGF-C已成為研究腫瘤生長及淋巴轉移的新途徑。
本實驗檢測了60例乳腺癌及15例乳腺纖維腺瘤中COX-2及VEGF-C的表達，二者在乳腺癌組織中表達率及表達程度均明顯高于乳腺纖維腺瘤(P
關于COX-2和VEGF-C的表達與乳腺癌淋巴結轉移的關系，DENKERT等[4]研究發現，乳腺癌組織中COX-2的表達與淋巴結轉移相關;亦有文獻顯示，VEGF-C通過促進淋巴管內皮細胞增生，使淋巴管數目增多，增大瘤細胞與淋巴管內皮的接觸面積與淋巴管的通透性，改變淋巴管內皮黏附特性或表面趨化因子的表達，從而促進腫瘤轉移[5]。本研究結果表明，COX-2與VEGF-C表達與乳腺癌淋巴結轉移相關，淋巴結轉移組COX-2及VEGF-C表達率明顯高于淋巴結無轉移組(P
研究表明，COX-2可通過上調VEGF-C的表達誘導淋巴管內皮細胞增殖，從而促進胚胎及腫瘤中淋巴管的生成及淋巴網絡的形成，最終導致腫瘤細胞經淋巴轉移[6]。COX-2可以通過EP1/SRC/HER-2/NEu途徑促進VEGF-C的高表達，從而促進淋巴管的形成[7]。實驗已證明，COX-2基因敲除的小鼠比野生型小鼠瘤體內血管密度低30%[8]，體外COX-2基因轉染或高表達的腫瘤細胞對凋亡的抵抗能力、血管形成因子的生成能力、轉移能力及促血管內皮細胞遷移能力均增強，而且與腫瘤生長及血管生成有關的多種因子表達都明顯增強[9]，而COX-2抑制劑則可抑制VEGF的表達，降低微血管密度[10]。
本研究結果顯示，COX-2陽性表達組中VEGF-C的表達率明顯高于COX-2陰性組;COX-2與VEGF-C在乳腺癌中的表達呈正相關，且COX-2及VEGF-C聯合表達與乳腺癌淋巴結轉移有關，即COX-2及VEGF-C均陽性組淋巴轉移發生率明顯高于COX-2及VEGF-C均陰性組。提示COX-2及VEGF-C在乳腺癌淋巴結轉移過程中可能有一定的協同作用，VEGF可能是COX-2影響淋巴結轉移的一個重要介質，COX-2通過調節VEGF而參與了促進乳腺癌的發展和轉歸。聯合檢測COX-2與VEGF-C在乳腺癌中的表達有助于判斷乳腺癌的發展狀態并制定合理的治療方案。
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篇9
1.目標要求過高或過低。
這方面的原因，一是教師沒有吃透教材，二是教師對學生情況了解不夠，高估或低估了學生的認知水平和語文能力。目標要求過高，脫離學生實際，導致大部分學生對目標內容茫然不知所措，加重了學生思想負擔，教學任務無法完成，教學效果可想而知；目標要求過低，所教內容學生低年級已經理解并掌握，到了高年級教師還要不斷訓練要求，學生強打精神，磨來磨去，教學效益低，更重要的是磨滅了學生學習語文的熱情，產生了厭煩的情緒。
2.教學目標不明確，不能突出教學重點內容。
對教材沒有進行深挖、吃透、靈活組織，導致教學目標不明確。要么面面俱到，突現不出重點，眉毛胡子一把抓，加上補充大量資料，顯得過度臃腫，喧賓奪主，一堂課下來學生一頭霧水，不知這節課要掌握什么，內容過多讓教師在45分鐘內難以完成教學任務；要么目標確立過低，課堂容量太小，一節課只抓一兩段，密度小，效率低下，學生沒有學到多少實用的東西。
3.教學目標不能體現語文的本體性。
由此導致教學過程中只是熱鬧地解讀文本內容，忽視了語文本體，將語文課上得像生物課、科學課、地理課、歷史課甚至建筑課、數學課等等，就是不像語文課。用洪鎮濤老師的話說就是：“我們都熱心去種別人的田，卻荒了自己的地”，“我們語文老師個個都是學雷鋒的模范”。
二、閱讀教學中怎樣才能合理明確地確立教學目標
筆者覺得應當注意下面幾點：
1.準確深入地解讀文本，深入地了解學生實際，結合文本內容及學生實際情況確立合理明確的教學目標，確保教學目標的切實可行，確保教學目標的落實。
在教學目標的制定上，應該根據學段目標、單元目標，結合學生階段特點和認知能力，照顧學生的認知差異，不能確立過高于或過低于學生實際的目標。例如對于初中階段的文言文教學，新課標作了明確要求，重在考查學生記誦積累淺顯文言文的過程。人教實驗版七年級上冊文字淺顯的傳統精品篇目，如《論語十則》、《智子疑鄰》、《塞翁失馬》，可以讓學生整篇背下來；至于《山寺》、《童趣》，難度較大，可以鼓勵程度好的學生背，大部分學生讀熟即可。另外，文言語法方面，例如詞法、句法等文言知識，新課程照顧到學生的年齡特點，初中階段不要求過多涉及，學生知其然即可，只要能憑借注釋和工具書理解詩文大意即可，教師不能像對高中學生那樣對詞法、句法作過高要求。當然，符合學生實際的目標一定要落實到位。
2.確立教學目標應整體把握，突出重點，點面結合，取舍適度。
一節課內容的教學目標不可以面面俱到，過于寬泛，要突出教學目標中的重點，合理分配教學時間、例如人教實驗版八年級上冊《陋室銘》一課，教學要求一課時，雖然文章很短，只有81字，但文章內涵很豐富，所謂一字千金。從思想內容上看，表現了作者安貧樂道的情趣、高潔孤岸的節操、不慕名利的人生追求。從表現手法上看，文章使用了托物言志的手法，借陋室來表明自己志向。從語言上來看，第一，含蓄精練，短小精悍，富有表現力；第二，駢散結合，一韻到底，平易流暢，瑯瑯上口，有很強的節奏感；第三，運用多種修辭格，除了駢文的排比對偶之外，還運用了比興、借代、反問、互文、引用等多種修辭格。從構思方面看，新穎別致，反向立意，結構嚴密，層次井然，比興開頭，引出陋室，類比作結，突出陋室。從文言知識上看，名詞動用、一詞多義、倒裝句式、實詞虛詞，不可謂不典型。一節課只有短短的45分鐘，要想讓學生掌握眾多的內容，根本不可能。要想面面俱到，平均分配教學時間，只能都是蜻蜓點水、點到為止。所以，必須結合學段特點和文本特點，篩選出教學內容，確立本課的教學目標，并突出其中一兩點作為教學重點。
3.要突出語文的本體性。