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異十三基二胺體內外抗腫瘤作用

【關鍵詞】抗腫瘤藥;,腫瘤細胞,培養的;,腫瘤移植;,異十三基二胺

摘要:目的觀察異十三基二胺(D79)的體內外抗腫瘤作用。方法應用錐蟲藍排染法、MTT法檢測D79對多種體外培養腫瘤細胞的細胞毒作用;Bliss法觀察D79急性毒性實驗;在可耐受劑量下觀察D79對小鼠移植性實體瘤U14、腹水瘤EAC、HAC的抑制率。結果D79顯著殺傷多種體外腫瘤細胞,藥物作用48h,IC501.24~3.36μg/mL;D79的LD50為36.49mg/kg(靜脈注射)。D79抑制小鼠移植性實體瘤U14體內生長、提高移植性腹水瘤EAC、HAC小鼠生存時間的作用呈劑量依賴性。結論D79有較強的體內外抗腫瘤作用。

關鍵詞:抗腫瘤藥;腫瘤細胞,培養的;腫瘤移植;異十三基二胺

ABSTRACT:ObjectiveToobservetheantitumoreffectofallotritridecyldiamidogen(D79)invivoandinvitro.MethodsThecytotoxiceffectsofD79onvarioustumorcellslinesculturedinvitroweredeterminedbytrypanbluedyeexclusiontest,MTTmethod.AcutetoxicityofD79wasevaluatedbyBlissmethod:atatolerabledoselevel,D79wasadministratedtotreattransplantedsolidtumorU14andascetictumorsEACandHAC.Tumorweightinhibitionandlifeextensionwereobserved.ResultsD79inducedsignificantgrowtharrestinvariousmalignanttumorcelllinesculturedinvitro.IC50ofthesetumorcellsexposedtothedrugfor48hoursrangedfrom1.24~3.36μg/mL.LD50ofD79was36.49mg/kg(mice,iv).D79inhibitinvivogrowthofimplantedsolidtumorU14andprolongedlivetimeimplantedascetictumorsEACandHACofmiceinadosedependmentmanner.ConclusionD79hadobviousantitumoractivityinvivoandinvitro.

KEYWORDS:antineoplasticagents;tumorcells,cultured;neoplasmstransplantation;allotritridecyldiamidogen

2000年,Yang等證實末端支鏈飽和脂肪酸13甲基肉豆蔻酸(13MTD)體內外抗腫瘤作用并發現其主要通過誘導腫瘤細胞凋亡發揮作用[1]。異十三基二胺(D79)是在13MTD基礎上合成的一種新型胺類化合物,其化學結構明顯區別于當前常規抗腫瘤藥物。筆者研究其體內外抗腫瘤作用,初步結果報告如下。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1藥品

2%D79溶液(福建省振華851生物制藥有限公司,批號040507);RPMI1640培養基干粉(美國Gibco公司);小牛血清(美國HyClone公司);胰蛋白酶(美國Difco公司);錐蟲藍及噻唑藍(MTT,美國Sigma公司);環磷酰胺(上海華聯制藥廠生產,批號040202);氟尿嘧啶(250mg/10mL,天津金耀氨基酸有限公司,批號0501182);其余試劑均為國產分析純。

1.1.2儀器

6孔及96孔細胞培養板(美國Coster公司);生物安全柜(HFSafe1200型)及氣體培養箱(BB5060,上海力申科學儀器有限公司);全自動酶標儀(Mod550,美國BioRad公司);倒置顯微鏡及正置顯微鏡(日本Olympus公司);微量稱質量儀(BP221S,德國Sartorius公司);電子天平(TD6001B,余姚市金諾天平儀器有限公司);振蕩器(2002型,常州國華電器有限公司)。

1.1.3動物及瘤株

昆明種小鼠,體質量(20±2)g,雌雄不限,由福建醫科大學實驗動物中心(合格證號:醫動字2306號)。每次實驗使用同一性別小鼠。小鼠子宮頸癌實體型瘤株(U14)、小鼠艾氏腹水瘤(EAC)及肝癌腹水瘤(HAC)均引自福建醫科大學藥學系。

1.1.4腫瘤細胞

人慢性粒細胞白血病細胞株(K562)、人早幼粒白血病細胞株(HL60)、小鼠黑色素瘤細胞株(B16)、人肝癌細胞株(HEPG2)、人胃腺癌細胞株(SGC7901)均引自福建醫科大學藥學系。

1.2方法

1.2.1細胞培養

K562、HL60、B16、HEPG2、SGC7901細胞株培養于含10%小牛血清、青霉素100IU/mL、鏈霉素100μg/mL的RPMI1640培養液中,每3天換液一次,每5天傳代一次。細胞均置于37℃、體積分數為0.05的CO2,飽和濕度的氣體培養箱中。

1.2.2錐蟲藍排染法

取對數生長期的HL60、K562細胞,以全培養液稀釋成5×104mL1單細胞懸液,接種于96孔細胞培養板,每個濃度復種4孔,每孔190μL,置于氣體培養箱培養。12h后D79組每孔加不同濃度D7910μL,對照組加等量溶劑。共培養48h后每孔加0.4%錐蟲藍100μL,染色5min。計數各組拒染活細胞數,按下式計算抑制率：

抑制率%=(1藥物組活細胞數/對照組活細胞數)×100%

直線回歸法測該藥的半數抑制濃度(IC50)。實驗重復3次[2]。

1.2.3MTT法

取對數生長期的B16、HEPG2、SGC7901細胞,0.25%胰酶PBS液消化后,全培養液稀釋成5×104mL1單細胞懸液,接種于96孔細胞培養板,每個濃度復種4孔,每孔190μL。置于氣體培養箱內,12h后D79組每孔加不同濃度D7910μL,對照組加等量溶劑,共培養48h。反應結束前4h每孔加入MTT(1mg/mL)50μL。繼續培養4h,吸盡上清,每孔加入DMSO200μL充分溶解MTT還原產物。酶標儀550nm檢測光密度(Dλ)并計算抑制率。直線回歸法計算IC50。實驗重復3次[2]。

抑制率%=[1藥物組D(550nm)值/對照組D(550nm)值]×100%

1.2.4D79急性毒性實驗

根據文獻[3]方法,小鼠靜脈注射(iv)不同劑量D79,連續觀察7d。

1.2.5小鼠移植性腫瘤接種及傳代

1.2.5.1U14實體瘤接種傳代[4]

取腫瘤生長旺盛的小鼠,無菌操作摘取實體腫瘤,稱質量,按1∶4比例加入無菌生理鹽水,磨成勻漿,取0.2mL接種于小鼠右腋部皮下。

1.2.5.2EAC、HAC腹水瘤接種傳代[4]

取腫瘤生長旺盛的小鼠,無菌操作抽取腹水,稱體積后按1∶4比例加入無菌生理鹽水,取0.2mL接種于小鼠腹腔內。

1.2.6D79對小鼠移植性腫瘤的抑制作用

根據急性毒性實驗結果,選擇3個劑量(10.0,7.0,4.9mg・kg1・d1)連續腹腔注射(ip)。接種腫瘤后按體質量隨機分組,設陰性對照組、陽性對照組及D79組。陽性對照組給予環磷酰胺或氟尿嘧啶[1，3],陰性對照組給予等量溶劑,D79組按給予劑量分為高、中、低劑量組;于接種當日開始給藥(ip),連續10d。U14荷瘤小鼠于實驗第12天取瘤稱質量,計算瘤質量抑制率。EAC、HAC荷瘤小鼠記錄實驗小鼠生存時間,并計算生命延長率。

瘤質量抑制率%=(1藥物組平均瘤質量/陰性對照組平均瘤質量)×100%

生命延長率%=(藥物組平均生存時間/陰性對照組平均生存時間1)×100%

1.3統計學處理

數據以x±s表示。采用SPSS11.5統計軟件處理,差異顯著性檢驗采用方差分析。

2結果

2.1D79對多種腫瘤細胞的體外細胞毒作用

D790.25~4.00μg/mL作用48h,對多種體外培養腫瘤細胞均產生顯著殺傷作用,抑制率隨藥物劑量的增加而升高,IC501.24~3.36μg/mL(表1)。表1D79對腫瘤細胞的體外細胞毒作用（略）

2.2D79小鼠急性毒性實驗

小鼠ivD79后未發現明顯異常。死亡小鼠解剖觀察主要臟器未發現明顯異常。D79急性毒性實驗結果見表2。表2小鼠靜脈注射D79急性毒性實驗（略）

2.3D79對小鼠移植性腫瘤U14的抑制作用

結果見表3。表3D79對小鼠移植性腫瘤U14的抑制作用（略）

2.4D79對小鼠移植性腫瘤EAC、HAC的抑制作用

結果見表4。表4D79對小鼠移植性腫瘤EAC、HAC的抑制作用（略）

3討論

惡性腫瘤是本世紀人類面臨最大威脅的疾病之一。目前臨床常用抗腫瘤藥物廣泛存在對腫瘤選擇差、毒副作用大以及易產生耐藥性等缺點，因此,尋找療效好、毒副作用小的新型抗腫瘤藥已成為人類戰勝惡性腫瘤的當務之急。D79是在13MTD基礎上合成的一種新型胺類化合物,其化學結構明顯區別于當前常規抗腫瘤藥物[5],因此可能不易與臨床常規抗腫瘤藥物發生交叉耐藥。

13MTD對多種體外培養腫瘤細胞具有殺傷作用,抑制裸鼠原位移植人前列腺癌細胞株及肝癌細胞株腫瘤的生長,其體內外抗腫瘤作用主要通過誘導腫瘤細胞凋亡發揮作用[1]。本實驗中,D79對K562、HL60、B16等5種體外培養腫瘤細胞均有顯著殺傷作用,并且作用呈劑量依賴性。對人早幼粒白血病細胞株HL60最敏感,對人肝癌細胞株HEPG2最不敏感,平均IC50在1.24~3.36μg/mL。D79小鼠急性毒性實驗結果Bliss法計算LD50=36.49mg/kg(iv),其LD95是32.34~41.18mg/kg(iv)。D79在可耐受劑量下,其對小鼠移植性宮頸癌U14實體瘤和肝癌HAC及EAC腹水瘤亦有明顯的劑量依賴性抑制作用。D79體內外抗腫瘤作用明顯強于13MTD[1]。D79是在13MTD基礎上合成的一種新型胺類化合物,因此筆者推測D79可能亦通過誘導腫瘤細胞凋亡而發揮抗腫瘤作用。

D79有較強的體內外抗腫瘤作用,有望成為一種廣譜、強效、毒性小的新型抗腫瘤藥物,筆者將進一步研究其抗腫瘤作用機制。

參考文獻：

[1]YangZH,LiuSP,ChenXD,etal.Inductionofapoptoticcelldeathandinvivogrowthinhibitionofhumancancercellsbyasaturatedbranchedchainfattyacid13methyltetradecanoicacid[J].CancerRes,2000,60(3):505509.

[2]林心建,黃自強,李常春.洋地黃毒甙體外抗人癌細胞株的作用[J].福建醫學院學報,1996,30(1):1718.

[3]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].2版.北京:人民衛生出版社,1991:201206.

[4]吳國土,林建忠,王瑞幸,等.桂苓散的抗癌作用[J].福建醫科大學學報,2003,37(1):8991.

[5]潘啟超,胥彬.腫瘤藥理學與化學治療學[M].2版.鄭州:河南醫科大學出版社,2000:99325.