峨眉產味連指紋圖譜研究論文

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【關鍵詞】峨眉產味連；指紋圖譜；高效液相色譜法

Abstract：ObjectiveToestablishasensitiveandspecificHPLCmethodforthequalitycontrolofEmei''''sCoptischinensisFranch.MethodsThechromatographicfingerprintofEmei''''sCoptischinensisFranchwasobtainedbyRP-HPLC(DAD)andthegradientelutionmodewasappliedinchromatographicseparation,datawasanalyzedbyFingerprintSimilarityEvaluationSoftwaretocomparethesimilarityofsamples.ResultsTheHPLCfingerprintofEmei''''sCoptischinensisFranchwasestablishedpreliminarily,showing9characteristicpeaks,bycomparisionoftheretentiontimeofchemicalstandards,peak6,8and9wereidentifiedasJatrorrhizine,PalmatineandBerberine.ConclusionTheHPLCfingerprintmethodisrepeatableandcanbeusedforqualitycontrolofEmei''''sCoptischinensisFranch.

Keywords：Emei''''sCoptischinensisFranch；Fingerprint；HPLC

峨眉產味連為四川著名道地藥材，來源于毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch（習稱“味連”）的根莖，秋季采挖，除去須根及泥沙，干燥，去除殘留須根［1］。味苦、性寒，入心、肝、胃、大腸經，具有清熱燥濕、瀉火解毒的功能，是一種臨床應用廣泛的清熱燥濕解毒藥，常用于濕熱痞滿、嘔吐、瀉痢、黃疸、高熱神昏、心火亢盛、牙痛、消渴及癰腫疔瘡；外治濕疹、濕瘡、耳道流膿、中耳炎等腫瘍類疾病［2～4］。味連根莖的主要成分為藥根堿(jatrorrhizine)、黃連堿(coptisine)、巴馬汀(palmatine)、小檗堿(berberine)、偽小檗堿(epiberberine)等季胺型生物堿［5］。其中小檗堿含量最高，約5%～8%，一般用這些生物堿在生藥中的含量來評價黃連的質量，但單一成分難以反映黃連的整體特征，建立簡便可行的指紋圖譜方法是目前更好評價黃連質量的有效方法，也是中藥標準化的一項重要內容。目前色譜指紋圖譜技術已成為中藥質量控制最佳的方法之一。本研究采用反相高效液相色譜法，對四川峨眉產味連GAP基地主要產地（四川峨眉山市龍池鎮）的樣品進行研究，制定出峨眉產味連的指紋圖譜。

1儀器與試藥

1.1儀器島津高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器，CLASS-VP色譜工作站；色譜柱：WatersRP18（4.6mm×250mm）。

1.2試劑乙腈、甲醇為色譜純（天津科密歐公司），水為超純水（實驗室自制），其他試劑為分析純。

1.3對照品鹽酸小檗堿（批號110713-200208，供含量測定用）、鹽酸巴馬汀（批號0732-200005，供鑒別用）和鹽酸藥根堿對照品（批號0733-200005，供鑒別用）均由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.4樣品

味連根莖，生長年限為4年，采集時間2004-12，采集地點為峨眉龍池，經西南交通大學藥學院宋良科副教授鑒定為毛茛科植物黃連CoptischinensisFranch（味連），經低溫干燥，粉碎，過60目篩備用。

2方法與結果

2.1色譜條件

島津高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器；色譜柱：WatersRP18（4.6mm×250mm）；流動相：乙腈-磷酸二氫鉀溶液（0.033mol/L，磷酸調pH=2.6）為流動相梯度洗脫，流速1.0ml/min，梯度洗脫條件見表1；檢測波長268nm；柱溫30℃；進樣量：供試品和對照品各10μl。表1味連指紋圖譜流動相梯度洗脫條件（略）

2.2對照品溶液的制備

分別精密稱取鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、鹽酸藥根堿對照品各約0.001g，加甲醇溶解并定容至10ml，制成濃度為0.1mg/ml的標準混合溶液，待用。

2.3供試品溶液的制備

精密稱取峨眉產味連樣品粉末約0.1g，用甲醇（含1%鹽酸）溶解味連樣品并定溶于25ml容量瓶中，于60℃加熱15min，超聲萃取30min，靜置過夜，用甲醇補足減少的溶液至刻度，用0.45μm微孔濾膜過濾，待用。

2.4方法學考察

2.4.1樣品穩定性考察

取同一份峨眉產味連供試品溶液分別在0，1，2，4，8，12，24，48h不同時間點進行檢測，用相似度軟件（中國藥品生物制品檢定所中藥室提供的《中藥色譜圖分析和數據管理系統》）考察特征色譜峰的相似度，結果相似度＞0.905935，表明味連樣品供試品溶液在48h內穩定。

2.4.2儀器精密度考察

取同一份峨眉產味連供試品溶液連續進樣5次，考察特征色譜峰的相似度，結果相似度＞0.927432，表明儀器精密度良好。

2.4.3重復性實驗

取同一批峨眉產味連樣品，按“2.3”項下供試品制備方法分別制備5份供試品，同法檢測，考察特征色譜峰的相似度，結果相似度＞0.977846，表明本法測定的重復性良好。

2.5指紋圖譜的建立

精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，分別按“2.1”項下色譜條件測定。經過詳細分析比較多批次味連樣品的色譜圖所給出的峰數、峰面積和相對保留時間等相關參數，確定9個特征峰構成峨眉產味連的指紋圖譜，為方便分析，將整個色譜圖譜分成Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ3組。第Ⅰ組包括1～3號峰（保留時間范圍3～30min），其中1號峰為溶劑峰；第Ⅱ組包括4～7號峰（保留時間30～38min）；第Ⅲ組包括8～9號峰（保留時間38～43min）。各特征峰峰號及保留時間見表2，代表性指紋圖譜見圖1。表2特征峰峰號及保留時間（略）

3討論

建立簡便有效的質量控制方法是中藥標準化的重要內容，也是中知藥走向世界的重要課題，本實驗采用RP-HPLC法建立了峨眉產味連的指紋圖譜，方法簡便重復性好，能完全分離黃連中的6個主要生物堿成分可用于峨眉味連的質量評價。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會．中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2005：213.

［2］徐錦堂，王立群，徐蓓.黃連研究進展［J］.中國醫學科學院學報，2004,26(6):704.

［3］田智勇，李振國．黃連的研究新進展［J］.時珍國醫國藥，2004，15（10）：704.

［4］中華人民共和國衛生部藥典委員會．中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：人民衛生出版社，1990：275.

［5］黃小平，李隆云，瞿顯有，等．石柱黃連指紋圖譜研究［J］.中藥材，2006，29(7)：666．