硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)研究論文

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【關(guān)鍵詞】腫瘤/病理學(xué)；蛋白質(zhì)類/分析；硒；免疫組織化學(xué)

【Abstract】AIM:ToinvestigatetheexpressionandsignificanceofselenoproteinPincoloncarcinomatissues.METHODS:Sampleswerederivedfrom30casesofcoloncarcinoma，and30correspondingnormalcolontissueswereusedascontrols.TheexpressionofselenoproteinPincoloncarcinomatissueswereinvestigatedbyimmuohistochemicalstain.RESULTS:TheexpressionrateofselenoproteinPincoloncarcinoma(60.0%)wassignificantlylowerthanthatoftheircontrolnormaltissues（80.0%,P<0.05).TheexpressionrateofselenoproteinPinhighandmoderatedifferentiationcases（86.7%）washigherthanthatoflowerdifferentiationtissues（33.3%,P<0.05).TheexpressionrateofselenoproteinPwas58.8%inIIIstagecases,and61.5%inIIIstagecases(P>0.05).CONCLUSION:TheexpressionwhichofselenoproteinPislowincoloncarcinomatissues,whichisrelatedwithdifferentiationlevelsofcoloncarcinoma,butnotwithTNMstageoftumor.

【Keywords】Neoplasms/pathology;proteins/analysis;selenium;immuohistochemistry

【摘要】目的：研究結(jié)腸癌組織中硒蛋白P的表達(dá)及其意義.方法：選用手術(shù)切除結(jié)腸癌組織30例，同時另取30例正常結(jié)腸組織作為對照，用免疫組化的方法觀察硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的表達(dá).結(jié)果：硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的陽性表達(dá)率(60.0%)低于其在正常結(jié)腸組織中的表達(dá)率（80.0%），二者相差有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；硒蛋白P在高、中分化病例中表達(dá)率(86.7%)高于低分化例病例中表達(dá)率(33.3%)，二者相差有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；硒蛋白P在Ⅰ~Ⅱ期病例中表達(dá)率為58.8%，Ⅲ期病例中表達(dá)率為61.5%，二者相差無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05).結(jié)論：硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中為低表達(dá)，與腫瘤的分化程度有關(guān)，與腫瘤的TNM分期無關(guān).

【關(guān)鍵詞】腫瘤/病理學(xué)；蛋白質(zhì)類/分析；硒；免疫組織化學(xué)

硒是哺乳動物必需的一種微量元素，缺硒會導(dǎo)致多種病理狀態(tài).硒蛋白是微量元素硒發(fā)揮生物學(xué)功能的主要形式.為了進(jìn)一步探討硒蛋白P在腫瘤中的作用，我們利用免疫組化技術(shù)觀察該抗體在結(jié)腸癌中的表達(dá).

1對象和方法

1.1對象結(jié)腸癌30例，為第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院普通外科200310/200505手術(shù)切除標(biāo)本,男17例，女13例.年齡45~79(平均61.4)歲；高分化10例，中分化5例，低分化15例；腫瘤TNM分期：I期8例，II期9例，III期13例.另取30例原發(fā)器官正常結(jié)腸組織作為對照.

兔抗人硒蛋白P多克隆抗體，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所分子腫瘤學(xué)國家重點實驗室先期制備保存.免疫組化試劑盒購自北京中杉公司.

1.2方法①將組織蠟塊切片，常規(guī)脫臘：70℃烤片2h，二甲苯10min×2次.水化：PBS洗3min×2次.②30mL/LH2O2溶液室溫處理10min，雙蒸餾水洗3min×3次.③在0.01mol/L枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）92~98℃水浴中處理25min修復(fù)抗原，自然冷卻到室溫.緩沖液洗3min×2次.④分別用正常山羊血清和卵白素室溫封閉2h.⑤滴加稀釋的一抗SelP多克隆抗體（1∶50），37℃孵育4h.PBS洗3min×3次.⑥生物素結(jié)合的羊抗兔IgG二抗和ABC復(fù)合物室溫分別孵育2h.⑦滴加DAB溶液顯色，注意觀察顏色變化，及時終止，沖洗.⑧蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，封片.

combsp;以免疫組化試劑盒中的陽性片作陽性對照，以0.01mol/LPBS（pH7.4）和正常羊血清分別替代一抗和二抗作為陰性對照.陽性染色為棕黃色，定位于細(xì)胞胞質(zhì)和細(xì)胞膜.染色陽性細(xì)胞數(shù)量評分：0分（全片未見著色或少于5%細(xì)胞散在著色），1分（5%~25%細(xì)胞著色），2分（25%~50%細(xì)胞呈陽性），3分（50%~75%細(xì)胞染色陽性），4分（>75%細(xì)胞染色陽性）.染色強度評分：0分（陰性），1分（弱陽性），2分（中等陽性），3分（強陽性）.染色陽性細(xì)胞數(shù)量評分與染色強度評分之積為最終染色評分標(biāo)準(zhǔn)：0分（陰性），0~4分（弱表達(dá)），4~8分（中等表達(dá)），8~12分（強表達(dá)）.

統(tǒng)計學(xué)處理:采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包，用非參數(shù)檢驗，兩個獨立樣本W(wǎng)ilcoxon檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析.P<0.05認(rèn)為存在顯著性差異.

2結(jié)果

2.1硒蛋白P在腫瘤及正常對照組織中的表達(dá)免疫組化染色結(jié)果見表1.表1硒蛋白P在腫瘤及正常對照組織中的表達(dá)陽性信號為棕褐色或棕黃色，呈彌漫狀或片狀分布.硒蛋白P染色主要定位于細(xì)胞胞質(zhì)及胞膜中，細(xì)胞外間質(zhì)也有部分染色，而細(xì)胞核無染色.在結(jié)腸癌中硒蛋白P表達(dá)與分化程度有關(guān)，尤其是伴黏液分泌者中低表達(dá)明顯；細(xì)胞富于黏液成分或杯狀細(xì)胞無論是正常還是腫瘤中表達(dá)均為陰性.硒蛋白P在正常對照組織中的陽性率表達(dá)高于結(jié)腸癌中的表達(dá)（圖1）.

2.2硒蛋白P在腫瘤中的表達(dá)與其分化程度及臨床分期的關(guān)系見表2.

3討論

目前硒蛋白P真正的生物學(xué)功能還不清楚，特別是與腫瘤發(fā)生的關(guān)系不甚明了.Burk等［1］認(rèn)為硒蛋白P可能是自由基的清除劑.硒蛋白P可能由于其抗氧化的保護(hù)性作用，通過消除自由基，減少DNA損傷，預(yù)防突變阻止腫瘤的發(fā)生［2-3］.其他可能的機制是調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)，增強機體免疫系統(tǒng)的抗癌活力；拮抗腫瘤細(xì)胞內(nèi)cGMP的增加，抑制DNA,RNA及蛋白質(zhì)的合成；抑制腫瘤病變中新生血管生成［4-6］

A:結(jié)腸癌組織;B:正常結(jié)腸組織.

圖1硒蛋白P的表達(dá)ABC×200表2硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與臨床病理學(xué)因素的關(guān)系現(xiàn)認(rèn)為血漿中硒蛋白P水平和腫瘤的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)，PerssonMoschos等［7］發(fā)現(xiàn)對應(yīng)于硒蛋白P濃度的5個水平，從低到高，發(fā)生腫瘤的相對危險度分別為5.2,2.3,2.9,2.2和1.0，硒蛋白P水平最低組發(fā)生呼吸道和消化道腫瘤的概率分別是硒蛋白P高水平組的6倍和3.4倍，表明隨著硒蛋白P濃度增高，腫瘤發(fā)生的危險度降低.

Mork等［2］發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸腺瘤較鄰近正常黏膜硒蛋白PmRNA表達(dá)下降，并認(rèn)為在結(jié)直腸腺瘤硒蛋白PmRNA表達(dá)下調(diào)可能是腺瘤到腺癌發(fā)展過程中的一個早期事件，這種下調(diào)使硒蛋白P表達(dá)減少，導(dǎo)致DNA受到氧化損傷，從而發(fā)生基因突變，引起腫瘤的發(fā)生和促進(jìn)腫瘤的發(fā)展，而且硒蛋白P和同屬硒蛋白的胃腸谷胱甘肽過氧化物酶在抗氧化細(xì)胞抵抗腺瘤腺癌演變中起到互補作用.AlTaie等［3］證實在結(jié)直腸癌中其mRNA表達(dá)明顯減少或缺失，表明在結(jié)腸癌中可能存在著硒蛋白P基因的突變和轉(zhuǎn)錄異常.

本結(jié)果提示，硒蛋白P表達(dá)在結(jié)腸癌與正常組織差異顯著，表達(dá)與分化程度有關(guān).伴黏液分泌者中低表達(dá)，細(xì)胞富于黏液成分或杯狀細(xì)胞無論是正常還是腫瘤中表達(dá)均為陰性.或許提示正常腸黏膜杯狀細(xì)胞分泌功能與硒蛋白P表達(dá)無關(guān)；同樣，其在結(jié)腸癌中的表達(dá)與腫瘤分期無關(guān).在結(jié)腸癌硒蛋白P低表達(dá)，除了受硒營養(yǎng)狀況（血漿中硒蛋白P濃度）的影響，可能存在著硒蛋白P基因的突變和轉(zhuǎn)錄異常［3］，失去這一保護(hù)性因素，可能導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生.

【參考文獻(xiàn)】

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