關于PCR技術與細菌學的關聯透析

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摘要：在臨床微生物檢驗中，醫學論文常規分離方法是最基礎的，也是最廣泛的，并不是所有的病原菌的檢測都能用pcr技術代替，因此，應用PCR技術時，必須有所選擇。

關鍵詞：PCR技術感染衣原體

一、PCR檢測結核分支桿菌

結核桿菌不產生內外毒素，其毒性物質主要為索狀因子和硫脂，人類對其有較高的易感性，最易受損害的器官是肺，內消化道和接處感染者很少，絕大多數是由呼吸道人侵導致感染和發病。結核和其他分支桿菌感染疾病的診斷時間長，且非常復雜。臨床醫生根據臨床表現、X線檢查、直接鏡檢、皮膚實驗和抗結核療效進行初步診斷。涂片鏡檢雖然簡單，經濟和應用廣泛，但陽性率低，而且只能提示有分支桿菌，無法鑒別是結核分支桿菌還是其他分支桿。因此，確診病原只能依賴分支桿菌的培養和菌型鑒定分支桿菌的培養，不僅陽性率低，而且花費的時間也長，而且經常會因為被污染而失敗。PCR技術為解決這一問題開創了新的前景。微量DNA擴增1護~106倍績以上，可直接檢測臨床標本中的病原菌。標本的留取及送檢:痰、肺及氣管灌洗液、胸腹水、腦脊液、尿液、血液留取后送檢。按試劑盒說明步驟處理標本。PCR擴增和檢測。結果判斷:痰標本以外的體液標本，若陽性，可作為結核病診斷依據，若痰標本陽性結果還應結合X線檢查及臨床癥狀等，作出診斷。

二、PCR檢測衣原體

沙眼衣原體是常見的引起人類沙眼、結膜炎和性傳播疾病的病原體。包括尿道炎、宮頸炎、輸卵管炎、流產、性病性淋巴肉芽腫、直腸炎、肺炎、新生兒結膜炎等。近年來報道，1月一4月嬰兒由其引起肺炎的比例較高，患兒主要表現為痙攣性咳嗽，同時伴有臨床癥狀。因為衣原體的細胞內寄生性，臨床診斷必須通過細胞培養，其方法費時，而且難度也高，如果用免疫法測定，其結果的可靠性又低。這時，PCR的診斷就非常關鍵，應用PCR體外擴增DNA有效檢測特異性序列的方法，適合沙眼衣原體的檢測，其檢測出的陽性率比細胞培養及其它方法都高.標本采集：男性取尿道拭子或前列腺液立即送檢，女性取陰道拭子送檢。標本處理及擴增方法，按試劑盒說明進行。

三、PCR檢測支原體

1、解尿支原體

解脈支原體是非淋菌性尿道炎中重要的病原菌，可引起尿道炎、產褥熱、宮頸炎、盆腔炎、不育癥、羊膜絨膜炎等。臨床診斷使用PCR方法比較方便快捷。標本的采集:支原體實是包內寄生，因此在取材時要注意，對男性患者要求3小時內不排尿用較細的滅菌拭子插人尿道，用力刮尿道壁，盡量取上皮細胞，以免因取材不當造成假陰性。按試劑盒說明進行處理。陽性結果可診斷支原體感染。因大部分非淋菌性尿道炎的病原菌，主要是解脈支原體，人型支原體也是性傳播疾病的病原菌。如試劑盒只是檢測解脈支原體的，陰性結果也不能排除其它支原體感染。

2、肺炎支原體

肺炎支原體以青少年發病為多見，臨床中約有80%慢性氣管炎患者合并肺炎支原體感染。臨床表現為非典型肺炎，以發熱、頭痛、咽喉痛、肌肉酸痛為主。支原體肺炎占肺炎的20%，在人群密集處可達50%。感染過程中可從胸水、血液、腦脊液等分離到病原菌。如作培養，菌落5天~14天后才出現，也可用血清方法檢測，其它方法的敏感性不高，PCR法擴增特異基因序列快捷敏感。標本采集:痰、痰咽拭子、肺及支氣管盜洗液等標本送檢。標本的處理及擴增按試劑盒說明操作。陽性結果可作為診斷依據。

四、PCR檢測嗜肺軍團

菌嗜肺軍團菌是一種具有高度爆發性流行性呼吸道疾病，通過空氣傳播進人肺臟。臨床表現多種多樣，高發于夏秋季節。肺炎是軍團軍感染的最常見疾病，起病突然，伴高熱不適，干咳無痰。有痰后，伴有炎癥，革蘭氏染色不能說明是什么菌感染。肺部以外的癥狀通常是意識模糊及腹瀉。軍團菌易感人群是免疫力低下的人。易感因素有吸煙、慢性心血管癥、腎衰竭、免疫性疾病或治療引起的，因器官移植，使用了大劑量類固醇治療的患者。標本采集:痰、氣管分泌物、胸水和血液。按說明操作處理標本。陽性結果可作為診斷依據。