火麻仁油對小鼠皮膚影響綜述

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火麻仁為桑科植物大麻的干燥成熟種子。具有潤腸通便，滋養(yǎng)補虛的功效，常用治療老年虛性便秘和習(xí)慣性便秘。《神農(nóng)本草經(jīng)》云其“味甘、平。主補中益氣，肥健不老”。現(xiàn)代藥理研究表明，火麻仁可以從多個方面發(fā)揮抗衰老的作用［1-2］。皮膚的衰老是整體衰老的直觀反映、是估價機體年齡的第一個指標(biāo)，中醫(yī)學(xué)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)均有論述論及皮膚老化和毛發(fā)變白與衰老關(guān)系最密切，因此研究藥物對皮膚老化指標(biāo)的影響也是評價該藥物抗衰老作用的重要指標(biāo)之一［3-5］。火麻仁的傳統(tǒng)應(yīng)用的記載，如《太平圣惠方》中就有“神仙服大麻子益駐顏色變鬢發(fā)延年不老方”的記載;《日華子》曰火麻仁:“補虛勞……長肌肉，益毛發(fā)，去皮膚頑痹……”。為進一步深入和更全面的研究和闡明火麻仁的抗衰老作用和機制，本文采用現(xiàn)代藥理學(xué)方法研究了火麻仁油對皮膚老化的影響，以探討火麻仁的整體抗衰老效應(yīng)，為開發(fā)、利用火麻仁，研制防治老年病和抗衰老相關(guān)產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)。

1材料

1.1藥物

火麻仁藥材，經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院中藥資源鑒定教研室陳隨清教授鑒定為桑科植物大麻CannabisstativaL．的干燥成熟種子;七寶美髯丸由佛山德眾藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字Z44022830，批號04007)。火麻仁油由上述火麻仁生品去皮后冷榨制得(出油率為21.65%，比重為0.907g•mL－1)。

1.2試劑

超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒，批號20050525;脂褐質(zhì)Lpf試劑盒，批號20050523，丙二醛(MDA)試劑盒，批號20050523;羥脯氨酸(Hyp)試劑盒(堿水解法)，批號20050528;考馬斯亮藍試劑盒，批號20050523。上述試劑均購自南京建成生物工程研究所。天狼星紅，批號20040823，上海華碩精細化學(xué)品有限公司(Chroma進口分裝);D-半乳糖，批號20030926，上海恒信化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn);三聚乙醛、冰乙酸、甲醛溶液、乙醇等均為市售分析純。

1.3儀器

JY6001型電子秤(上海精科公司天平儀器廠)，F(xiàn)A200KA型分析天平(上海精密電子儀器有限公司)，LD4-2型離心機(北京醫(yī)用離心機廠)，D2kw-C型恒溫水浴鍋(北京市光明醫(yī)療儀器廠)，UV-2201分光光度計，日本島津公司;RT-MR2100勻漿機，SwitzerlandKINEMATICAAG公司。1.4動物昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半，購自河南省醫(yī)學(xué)實驗動物中心(編號2003LA－014.合格證號410115)。

2方法

2.1動物分組及給藥

小鼠根據(jù)性別和體重，隨機分成6組，每組10只，雌雄分籠飼養(yǎng)，分別是:空白對照組(生理鹽水組)、模型對照組(D-半乳糖組)、火麻仁油高、中、低劑量組(12.0，6.0，3.0mL•kg－1)、七寶美髯丸(陽性對照)組(4g•kg－1)。空白對照組每天頸背部sc生理鹽水(用量為10mL•kg－1)，1h后ig給予空白對照劑(取1mL吐溫-80和0.5gCMC-Na，加生理鹽水至100mL用量為20mL•kg－1)。其他5組每只小鼠按10mL•kg－1sc1%D-半乳糖水溶液，1h后各給藥組小鼠按20mL•kg－1ig給與不同劑量試驗藥物，連續(xù)42d。實驗過程中，每5d各鼠稱重記錄1次，每日觀察小鼠的皮毛色澤、飲食、飲水、大小便、精神活動情況等。末次給藥2h后處死小鼠，取標(biāo)本，進行各項指標(biāo)的測定。

2.2皮膚樣本的處理

將小鼠處死立即剝皮膚，留取1g待測含水量用;其余迅速用5%硫化鈉溶液脫毛后即用清水沖洗干凈。取背部皮膚0.5cm×0.5cm大小，迅速放入10%中性甲醛液中固定，擬作組織切片進行組織形態(tài)學(xué)觀察;余皮膚取下后迅速冰凍保存，擬作皮膚組織勻漿及測定皮膚羥脯氨酸之用。各指標(biāo)所選取材部位相同。

2.3指標(biāo)測定

2.3.110%皮膚勻漿的制備取脫毛皮膚組織0.5g，經(jīng)預(yù)冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和其他結(jié)締組織，濾紙拭干，稱重，量筒量取該組織塊9倍質(zhì)量預(yù)冷生理鹽水，用勻漿機制成10%組織勻漿(在低溫環(huán)境中使組織細胞完全破碎，顯微鏡下觀察內(nèi)容物全部游離在液相中)。

2.3.2各項指標(biāo)的測定測皮膚勻漿中Lpf，SOD，MDA，Hyp含量或活力，均根據(jù)測試盒所附方法、步驟測定。

2.3.3皮膚中水分含量的測定采用烘干法按2.3的方法取1g左右皮膚，精密稱取濕重后置烘箱中，于80℃烘干12h，稱其干重，計算皮膚含水量。

2.3.4皮膚組織病理學(xué)形態(tài)觀察取小鼠脫毛皮膚，固定于10%的甲醛溶液中，脫水、石蠟包埋、切片。HE染色法染色，于光鏡下觀察表皮及真皮厚度、毛孔及毛囊的狀態(tài)變化。

2.3.5統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)分析采用SPSS13.0軟件包，計量資料數(shù)據(jù)以x珋±s表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1對衰老模型小鼠皮膚組織勻漿中SOD，MDA，Lpf的影響與空白對照組相比，模型組小鼠皮膚勻漿中SOD活力均顯著下降(P＜0.01)，MDA、Lpf均顯著升高(P＜0.01)，說明造模成功。火麻仁油高、中劑量組、七寶美髯丸組小鼠皮膚勻漿中SOD活力增高(P＜0.01或P＜0.05)。火麻仁油高劑量組、七寶美髯丸組的MDA，Lpf以及中劑量組的MDA含量均顯著降低(P＜0.01，或P＜0.05);火麻仁油低劑量對以上指標(biāo)影響不明顯。見表1。

3.2對衰老模型小鼠皮膚勻漿中Hyp和皮膚含水量的影響與空白對照組相比，模型組小鼠皮膚勻漿中Hyp、皮膚含水量均顯著減少(P＜0.01)。與模型組小鼠相比，火麻仁油高、中劑量組、七寶美髯丸組小鼠皮膚勻漿中Hyp、皮膚含水量均顯著提高(P＜0.01，或P＜0.05);火麻仁油低劑量對皮膚含水量及Hyp含量的影響不明顯。見表2。

3.3皮膚組織病理學(xué)形態(tài)觀察空白對照組:各鼠取背部相同部位皮膚經(jīng)HE染色，光鏡下可見小鼠皮膚形態(tài)正常，表皮的基底層、棘細胞層、顆粒層及角質(zhì)層界限清楚，真皮位于表皮下面，此層內(nèi)有血管、汗腺、毛囊和皮脂腺等;經(jīng)特殊染色后觀察可見小鼠皮膚真皮膠原纖維束細長，染呈紅色，胞體豐富，排列成束狀，緊密，呈波紋狀，彈力纖維略細長，數(shù)量豐富，呈波紋或呈鉤狀，染呈紫黑色，排列均勻、緊密，纏繞于膠原纖維束中間，于毛囊周圍呈環(huán)形排列。見圖1。亞急性衰老模型組:經(jīng)HE染色，光鏡下可見皮膚組織生長受到障礙，真皮層明顯變薄，毛囊與皮脂腺數(shù)量銳減;經(jīng)特殊染色后觀察可見膠原纖維層減少，排列疏松，部分彈力纖維明顯斷裂，排列紊亂，少部分彈力纖維分布于環(huán)繞毛囊周圍，呈環(huán)形排列，其總數(shù)量明顯稀少。見圖1。火麻仁油高劑量組:可見小鼠皮膚生長良好，毛囊數(shù)較亞急性衰老模型組明顯增加;膠原纖維束一般，呈波紋狀排列還緊密，彈力纖維著色深染。散在于真皮區(qū)域內(nèi)和環(huán)繞毛囊周圍的彈力纖維總數(shù)量較正常小鼠減少。見圖1。火麻仁油中劑量組:試驗小鼠皮膚真皮厚度略有增加，毛囊數(shù)增加不明顯;膠原纖維和彈力纖維情況與火麻仁油高劑量組相似。見圖1。火麻仁油低劑量組:真皮厚度、毛囊數(shù)未見明顯增加;膠原纖維和彈力纖維情況與火麻仁油高劑量組相似。見圖1。七寶美鬢丸組:真皮厚度和毛囊數(shù)較亞急性衰老模型組均有增加;膠原纖維束中度粗細，呈波紋狀排列，不甚緊密，彈力纖維著色淺染，總數(shù)量較空白對照組呈減少趨勢。見圖1。

4討論

火麻仁是同時具有補益與潤下作用的傳統(tǒng)中藥，本課題組前期采用鵪鶉、小鼠、家蠶等多種動物模型研究了火麻仁的抗衰老作用［8-10］，表明火麻仁對實驗動物的循環(huán)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)的功能或作用有顯著促進或改善作用，也表現(xiàn)出顯著延長家蠶壽命的作用［11］。研究結(jié)果提示火麻仁具有延緩衰老作用，并可能與其良好的抗氧化和清除自由基活性有關(guān)［2，9-10］。根據(jù)中醫(yī)“藏居于內(nèi)，形見于外”的論點，說明皮膚衰老與內(nèi)臟的衰老以及整體衰老具有密切的相關(guān)性，皮膚的衰老指標(biāo)可以作為說明機體整體衰老特征之一［12］，皮膚的狀態(tài)往往作為估價機體年齡的第一個指標(biāo)［13］。現(xiàn)代研究表明超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和脂褐素(Lpf)等是直接關(guān)切生物體內(nèi)“氧化”損害與“抗氧化”的相關(guān)指標(biāo)［14-15］，而它們有可能是引起或延緩諸如皮膚衰老、皮膚褐斑的關(guān)鍵因素［16-18］。皮膚中羥脯氨酸(Hyp)和水分的含量常常是評價皮膚狀態(tài)的重要指標(biāo)，其中Hyp大量存在于皮膚的膠原蛋白和彈性蛋白中，膠原蛋白和彈性蛋白都具有一定的防老化和促再生作用，共同維持著皮膚的光滑性、柔順性和彈性，因此常用皮膚中Hyp含量來作為皮膚衰老的指標(biāo)［19］。火麻仁油中不飽和脂肪酸的含量高達90%以上，具有良好的清除自由基和抗氧化作用［1］，同時這些必需脂肪酸極易滲入皮膚表層甚至深層，增強表皮細胞的水合和保濕作用，減少經(jīng)皮水分損失［20］;其潤下通便作用則能及時排出腸道內(nèi)的諸多毒素，同樣有助于清除體內(nèi)自由基，而通過排除腸道毒素也有助于防治一些皮膚疾患［21］。本文觀察了火麻仁對亞急性衰老模型小鼠皮膚相關(guān)指標(biāo)的影響，結(jié)果表明它能夠提高皮膚內(nèi)SOD活性、清除過氧化物、改善蛋白質(zhì)代謝、提高皮膚含水量以及改善皮膚的形態(tài)功能等，有很好的抗衰老作用，本研究豐富了火麻仁油抗衰老的理論內(nèi)涵，并為它的實際應(yīng)用提供了參考依據(jù)。