新病理制片技術研究論文

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【關鍵詞】病理學；病理制片；病理診斷

病理學檢查對臨床診斷、疾病鑒別診斷、預后判斷都有重要意義，對于某些疾病的診斷、研究更是具有決定性的作用。而一張高質量的病理切片對于疾病的病理診斷起著不可忽視的決定性作用。近2年,筆者在使用自動組織脫水機過程中，對脫水劑、透明劑、浸蠟劑使用等進行了改進，對實驗步驟和操作方法等細節方面進行了改良，提高了切片的染色效果和整體質量，明顯降低脫片率，從而提高石蠟切片質量。并且在一定程度上減少了試劑揮發對人體和環境造成的傷害與污染。現將操作方法介紹如下。

1操作方法

1.1固定甲醛固定液，其滲透性強，固定均勻，使組織縮小，適合大多數組織固定。

1.2脫水脫水劑乙醇。乙醇脫水的初始濃度為80%,避免乙醇濃度過低而增加脫水時間或乙醇濃度過高致組織發脆而影響切片。溫度對乙醇滲透脫水的影響很大，主要是指無水乙醇。當室內溫度>30℃時組織內水分子與乙醇之間運動加快,可縮短組織脫水時間。當室內溫度<10℃時組織內水分子與乙醇之間運動變慢,組織脫水時間就要延長。為此我們在用自動脫水機對組織脫水時，對最后二缸無水乙醇，根據溫度變化調整脫水時間，一般在2h左右。

1.3透明組織透明劑以二甲苯為佳，因為它與脫水劑和石蠟兼容性較好，對組織染色影響小，特別在免疫組織化學酶標記中對抗原的破壞較小。脫水機上應用二缸試劑，總的透明時間控制在20～30min(一般缸10min，二缸15min為好)。

1.4在脫水機上一般用三缸蠟，第一缸蠟必須含有一定比例二甲苯(指新配制石蠟時用)，以便石蠟能漸進地置換出透明劑，時間可控制在1h左右。第二缸蠟和第三缸蠟可用純蠟以便把組織中二甲苯全部置換出，總時間可在3h以上，浸蠟溫度應與蠟的熔點相同。另外，要注意第三缸石蠟熔點必須與包埋的石蠟熔點相同。為了保持第三缸石蠟純度可1～2月調換1次，更換時可將第一缸石蠟倒掉，把第二、第三缸分別移做第一、第二缸石蠟，只更新第三缸石蠟即可。在使用自動組織脫水機時，一定要對脫水機內試劑使用情況有所了解，做到定期更換試劑，以確保組織制片質量，使脫水機處理組織達到最佳狀態。

1.5切片要求切片的第一步必需粗切。粗切的厚度大約在60～100μm左右，質地較硬的組織或較小的組織應再薄一些，粗切致組織全部暴露后，才進行細切。細切至組織塊表面均勻一致。切片厚度一般為3～5μm。切片的要求是完整、薄、均勻。切下的片膜其大小形狀應與組織塊一致，切片的不完整，常會將重要病變遺漏，導致誤診、漏診。在切片放蠟塊時，應注意組織包埋的方向，組織的層次、纖維、肌肉等的走向應與切片刀平行。

1.6展片與撈片展片水溫應在42℃～47℃之間，這主要和包埋蠟的熔點有關，水溫過高，會引起組織細胞散片，水溫過低，切片皺摺無法攤平。包埋蠟中如有二甲苯，也會造成石蠟溶解現象。撈片時玻片要干凈，要選擇那些完整、無皺摺的切片，粘貼于玻片中1/3和下1/3的中間。

1.7烤片和脫蠟烤片，一般在60～65℃烤片0.5～1h左右，溫度過高，會引起切片細胞收縮；時間太短(少于20min)，容易造成脫片。脫蠟也相當重要，如果脫蠟不干凈,切片不易著色或著色不勻，所以，脫蠟用的二甲苯要經常更換，一般用3道二甲苯，每500ml液體，處理5000張切片后更換1次為宜。

1.8染色蘇木素染色時間要根據染料的新舊、溫度、切片的類型而定，一般為3～5min。經水略洗后，用鹽酸酒精分化，分化程度必須用顯微鏡控制。染色理想的切片在顯微鏡下應是：細胞核與細胞漿應藍紅相映，鮮艷美麗；核漿對比明顯，核膜及核染色質顆粒清晰可見。

1.9脫水和封片(方法略)

2小結

用以往方法(組織經10%甲醛固定后直接用手動脫水)所做的384例快速石蠟切片中，有69例切片不完整、染色較差，占18%；用改進后的方法所做的248例石蠟切片中僅有10例切片不完整、染色稍差，占4%；操作所用時間縮短，提高了病理制片的質量。