佛手的產地分析論文

導語：佛手的產地分析論文一文來源于網友上傳，不代表本站觀點，若需要原創文章可咨詢客服老師，歡迎參考。

1材料

1.1藥物收集17批不同產地佛手藥材(主產地或商品，藥材來源見表1)，經廣州中醫藥大學程怡教授鑒定;對照品檸檬油素、67二甲氧基香豆素、5羥基7甲氧基8異戊烯基香豆素、6羥基7甲氧基香豆素均為作者從川佛手植物中提取分離得到，橙皮苷由生物藥品制品檢定所提供(將它們依次編號為化合物1～5)，經波譜分析鑒定結構，歸一化法計算其質量分數為98%以上。

1.2主要試劑與儀器美國DIONEXSUMMITP680高效液相色譜儀(四元梯度泵，CHROMELEONTM數據處理軟件系統);甲醇、乙腈為色譜純(美國Dikma公司，色譜用);水為自制超純水;乙酸乙酯、甲醇、乙醇(廣州化學試劑廠，提取用)均為分析純。

2方法與結果

2.1流動相及梯度洗脫條件的選擇化合物3～5結構中均含有酚羥基，化合物1、2中含有含氧基取代，因而它們在分析時很容易產生拖尾，使峰變寬，分離度下降，因此要選擇偏酸性的流動相，這樣才能減少色譜峰的拖尾，改善峰形,提高峰形的對稱程度。在比較了甲醇-冰醋酸水系統和乙腈-冰醋酸水洗脫系統色譜分離效果后，最終選擇乙腈-冰醋酸水洗脫系統，并通過多次對比試驗確定了最佳的梯度洗脫系統。在乙腈-冰醋酸水梯度洗脫系統中，樣品中化合物1～5能得到基線分離，而且色譜的對稱性都很好。表1佛手藥材的來源

樣品號樣品來源產地采收期規格購買日期F1吉林省片2005.05.04F2天津市絲2005.04.29F3昆明市云南片2005.04.25F4浙江金華市尖峰大藥房連鎖有限公司淅江金華(廣東苗)片2005.04.18F5秦皇島市唐人醫藥商場廣西2004.03.10片2005.05.08F6秦皇島市唐人醫藥商場廣東2004.07.05片2005.05.08F7河北祺新中藥顆粒飲片有限公司廣東2004.7～8片2005.03.20F8河北祺新中藥顆粒飲片有限公司廣西片2005.03.20F9河北祺新中藥顆粒飲片有限公司河北2004.7～8片2005.03.20F10四川樂山市中藥材市場四川洪雅2004.7～8片2005.04.20F11四川樂山市中藥材市場四川沐川2004.7～8片2005.04.20F12四川成都市荷花池市場四川滬縣片2005.04.26F13四川成都市荷花池市場四川合江片2005.04.26F14黑龍江三棵針藥材市場廣東片2005.03.15F15黑龍江三棵針藥材市場廣西片2005.03.15F16廣州清平藥材市場廣東肇慶片2005.05.08F17廣州清平藥材市場廣東德慶片2005.05.17

2.2檢測波長的選擇化合物1、2、4、5均為簡單香豆素類化合物，其中化合物1、4于217nm及315～330nm(loge4.2)處可見2個強吸收峰，同時在250～270nm(loge3.8～3.9)處有1個弱吸收峰(見圖1)。但化合物2、5為6，7二氧代香豆素，它們有230nm、340～350nm2個強吸收峰，同時有260nm、300nm2個相等強度的次強峰，它們表現出了類似的紫外吸收曲線，在230nm附近有1個最大吸收峰。化合物1和2在210nm附近有最大吸收，但因為是末端吸收，故吸收波長分別確定為327nm、230nm。化合物3為二氫黃酮苷，所以呈現出典型二氫黃酮類化合物的2個吸收帶(帶Ⅰ和帶Ⅱ)，即具有強的帶Ⅱ吸收(270～295nm)，而帶Ⅰ以肩峰或低強度吸收峰出現。結果見圖1。

2.3色譜條件KromasilC18分析柱(250mm×4.0mm，5μm);流動相為A(乙腈)5g/L冰醋酸水溶液。線性梯度洗脫時間程序：0～3min，A的比例為5%;3～8min，A的比例由5%升高到10%;8～48min，A的比例由10%升高到27%;48～63min，A的比例由27%升高到55%;63～68min，A的比例由55%升高到100%;68～75min，A的比例為100%。體積流量：1mL/min;檢測波長：檸檬油素為327nm，6，7二甲氧基香豆素為230nm，橙皮苷為290nm，5羥基7甲氧基8異戊烯基香豆素為212nm，6羥基7甲氧基香豆素為229nm;柱溫30℃;分析時間為75min。對照品和樣品的色譜圖見圖2。

2.4樣品溶液的制備

2.4.1對照品溶液的制備精密稱取檸檬油素、6，7二甲氧基香豆素、橙皮苷、5羥基7甲氧基8異戊烯基香豆素、6羥基7甲氧基香豆素對照品適量，溶于甲醇配制成濃度依次為2.04、0.60、0.64、0.62、0.30mg/mL的對照品溶液，備用。

2.4.2供試品溶液的制備精密稱取佛手藥材粉末(過80目篩)1.5g于索氏提取器中，加體積分數75%乙醇70mL，提取4h，濾過，蒸干，殘渣以甲醇溶解并定容至10mL，微孔濾膜濾過，備用。

2.5線性關系的考察

分別精密吸取標準溶液，注入高效液相色譜儀，以進樣量X(μg)為橫坐標，峰面積Y為縱坐標繪制標準曲線，結果見表2。

2.6精密度試驗精密吸取對照品溶液，連續進樣5次，測定5個對照色譜峰的峰面積，并計算其sR值，測得sR在0.47%～2.69%范圍內。

2.7重現性試驗取同一批號供試品5份，按2.4.2表2樣品線性關系項下方法制備供試品溶液，以2.3項下色譜條件測定各色譜峰峰面積的sR值，測得sR在1.21%～4.47%范圍內。

2.8穩定性試驗取同一份供試品溶液，分別在0、2、4、6、10h進樣，結果測得各色譜峰峰面積的sR范圍在0.36%～3.17%。

2.9加樣回收率試驗精密稱取已知檸檬油素、6，7二甲氧基香豆素、橙皮苷、5羥基7甲氧基8異戊烯基香豆素、6羥基7甲氧基香豆素含量的供試品粉末(80目)，定量加入檸檬油素、6，7二甲氧基香豆素、橙皮苷、5羥基7甲氧基8異戊烯基香豆素、6羥基7甲氧基香豆素對照品適量，按2.4.2項下方法進行制備操作，測定各化合物的加樣回收率，測得加樣回收率范圍為95.47%～103.69%。

2.10含量測定精密吸取樣品溶液20μL連續進樣2次，測定峰面積，計算化合物1～5的含量，測定結果見表3。表3佛手樣品中化學成分含量測定結果

2.11主成分分析

在數據分析工作中，常常需要將很復雜的數據集簡化，即將P個指標所構成的P維系統簡化為一維系統。主成分分析能設法將原來眾多具有一定相關性的指標(比如P個指標)，重新組合成一組新的互相無關的綜合指標來代替原來的指標。若從主成分的觀點來討論這個問題，主成分分析所構成的第一主分量正是這一問題的答案，它提供了自身的權重系數。

主成分分析(principalcomponentanalysis)是一種將多個變量通過線性變換以選出較少個重要變量的多元統計分析方法，又稱主分量分析。在實際課題中，為了全面分析問題，往往提出很多與此有關的變量(或因素)，因為每個變量都在不同程度上反映這個課題的某些信息。但是，在用統計分析方法研究這個多變量的課題時，變量個數太多就會增加課題的復雜性。人們自然希望變量個數較少而得到的信息較多。在很多情形，變量之間是有一定的相關關系的，當兩個變量之間有一定相關關系時，可以解釋為這兩個變量反映此課題的信息有一定的重疊。當變量較多時，在高維空間中研究樣本的分布規律就更復雜。主成分分析采取一種降維的方法，找出幾個綜合因子來代表原來眾多的變量，使這些綜合因子盡可能地反映原來變量的信息量，而且彼此之間互不相關，從而達到簡化的目的[10～12]。

本研究對不同產地佛手中5種生物活性成分進行含量測定，并采用SPSS統計軟件進行主成分分析，其結果見表4～6、圖3、4。表4特征值(λ)表由表4和圖3得知，從特征值的大小來看，λ1=1.856，λ2=1.341，λ3=1.135，而其他遠小于1;從貢獻率來看，λ1的貢獻率最大為37.111%，而λ2、λ3的貢獻率相差不大，約為20%多，其他的貢獻率較小;從累積貢獻率來看，取前3個特征值時，累積貢獻率為86.629%，大于80%，故取前3個為主成分(因子)。由表5可以看出，第1主成分(因子1)主要反映了來自原始指標化合物1(檸檬油素)和化合物4(5羥基7甲氧基8異戊烯基香豆素)的信息，第2主成分(因子2)主要反映了來自原始指標化合物3(橙皮苷)和化合物5(6羥基7甲氧基香豆素)的信息，第3主成分(因子3)主要反映了來自原始指標化合物2(6，7二甲氧基香豆素)的信息。表5公共因子載荷矩陣表對佛手進行主成分分析，發現λ1對確定最佳產地貢獻度最大，達到37.111%，是主要因子。從表6可看出，F16最佳，包含了5種主要化學成分的最佳綜合信息。

綜上所述，根據各個主成分的得分進行綜合分析評價，可以把F16(廣東肇慶)確定為最佳產地樣品，這樣就為多指標確定最佳產地提供了新的模式。表6公共因子得分表注：Y(i，1)代表樣品的主成分得分，i代表原始指標測定值的個數，1代表因子1。如果Y(i，1)數值大，就說明i產地的因子1所體現的原始指標的含量就高，反之則低。

3討論

3.1樣品中化合物1～5色譜峰的確定從圖2可以看出樣品的色譜峰數目比較多，加上測定的化合物數量較多而且有的相隔很近，如化合物2和3的色譜峰及化合物1和4的色譜峰，因此，除采用保留時間對比和加入對照品觀察強度變化這些常用的方法外，還進一步通過對比標準品和樣品相應色譜峰的紫外吸收曲線來進一步確定了化合物1～5所對應的色譜峰。我們分別對比了對照品和樣品中化合物1～5的紫外吸收曲線(見圖1)，可以發現對照品中各化合物分別與樣品中相對應色譜峰有相同的紫外吸收曲線，據此就可以更加準確地判斷最終確定的色譜峰是要檢測的化合物。圖1化合物1～5的紫外吸收曲線

3.2含量直觀分析本研究采用HPLC法建立了同時測定佛手藥材中4種香豆素類化合物和1種黃酮類化合物含量的方法，該法簡便、快速、準確，可用于大批量佛手藥材的質量評定。

通過對佛手中多種成分進行含量分析，不僅了解了相關化學成分在不同產地佛手藥材中的含量或分布，還可以借此去控制和評價藥材的質量。本含量分析實驗中，在保證佛手中待測成分分離度的情況下，通過調整梯度洗脫條件，使其他色譜峰也得到了較好的分離。從圖2所示的樣品色譜圖可以看出，在文中的色譜條件下，絕大部分色譜峰都得到了基線分離。這為今后佛手指紋圖譜的建立打下了很好的基礎。

本實驗中，分別對不同產地佛手進行了含量測定，結果表明，所測的5個化合物在樣品中的含量有較大的差異。從表3所示的含量測定結果可以直觀地看出，佛手中檸檬油素含量高于其他成分，且6，7二甲氧基香豆素只在F12樣品中測得，在其他樣品中均未測得。佛手中5羥基7甲氧基8異戊烯基香豆素含量低，在F11和F17樣品中未測得。6羥基7甲氧基香豆素含量極低，在多個樣品中均未測得。圖2所示的樣品色譜圖也顯示了上述特點，從該圖中還可以看出62min左右色譜峰(檸檬油素峰)明顯高于其他成分色譜峰。以上分析表明，本實驗條件下建立的色譜圖，能夠反映不同產地的藥材在品質上的差別。

3.3主成分分析本文對不同產地佛手進行主成分分析后發現，λ1對確定最佳產地貢獻度最大，達到37.111%，是主要因子，根據各個主成分的得分進行綜合分析評價，廣東肇慶產佛手最佳，包含了5種主要化學成分的最佳綜合信息。

中藥材有效成分含量的高低，即中藥材的內在品質，直接影響著中藥材、中成藥和中藥飲片的質量和臨床療效。以往在中藥材的生產和產地加工過程中，往往只注重中藥材的產量、生產效益和藥材的外形質量，而對藥材有效成分的積累動態和藥材的內在品質卻很少重視。藥材質量包括內在質量和外觀性狀，所以中藥材最佳產地應是能提供有效成分含量最高，外觀性狀如形、色、質地、大小等最佳的藥材產地。

佛手中生物活性成分的形成和積累同樣與生物環境有關。僅以佛手中的單一成分判斷佛手的優劣是不全面的。檸檬油素在佛手藥材中含量較高，而且現代藥理實驗證明檸檬油素為佛手藥材的主要有效成分之一[13-14]，所以將檸檬油素與其他成分作為佛手藥材質量評價的指標，研究和探討影響佛手藥材品質的各種因素，對提高和穩定佛手藥材質量具有重要意義。因此，中藥材的最佳產地應考慮其生物活性成分含量，再結合其產率及功效進行綜合分析，以生物活性成分絕對最大含量或最大生物效價為基本原則，確定最佳產地，以保證藥物能發揮最大的療效。

【參考文獻】

[1]南京中醫藥大學.中藥大辭典(上冊)[M].第2版.上海：上海科學技術出版社，2006：1597.

[2]藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：人民衛生出版社，2005：141.

[3]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草(精選本)(上冊)[M].上海：上海科學技術出版社，1996：985.

[4]金曉玲，徐麗珊，何新霞.佛手醇提取液的藥理作用研究[J].中國中藥雜志，2002，27(8)：604.

[5]黃玲，鄺棗園，張敏.佛手多糖對免疫低下小鼠細胞因子的影響[J].現代中西醫結合雜志，2000，9

【摘要】[目的]分析不同產地佛手中生物活性成分分布規律，探索佛手最佳產地的優選方法，以確定最佳產地。[方法]采用三維高效液相色譜法，梯度洗脫，測定17批不同產地佛手中5種生物活性成分(檸檬油素、67二甲氧基香豆素、橙皮苷、5羥基7甲氧基8異戊烯基香豆素、6羥基7甲氧基香豆素)的含量，并對其進行主成分分析。[結果]所建模式合理，具有一定的可行性和可靠性，為探討佛手最佳產地提供了一種新的方法。[結論]佛手最佳產地以廣東肇慶為最佳。

【關鍵詞】佛手/化學主成分分析色譜法高壓液相