半乳糖致衰老小鼠學習記憶論文

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【摘要目的觀察枸杞對D-半乳糖所致衰老小鼠學習記憶的影響。方法建立D-半乳糖致衰老小鼠模型，跳臺實驗檢測其學習記憶能力，同時測定其大腦乙酰膽堿酯酶(AchE)活性，用黃嘌呤氧化酶法測定大腦超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥法測定大腦丙二醛(MDA)含量，觀察小鼠服用枸杞汁后上述指標變化。結果和D-半乳糖模型組比較，各實驗組均可提高小鼠的學習記憶能力(P＜0.05或P＜0.01)，顯著增加D-半乳糖所致衰老小鼠大腦SOD活性、降低MDA含量(P＜0.05或P＜0.01)，可顯著升高大腦AchE活性(P＜0.05，或P＜0.01)。結論枸杞能改善D-半乳糖所致衰老小鼠的學習記憶功能，其機制可能和枸杞的抗氧化自由基功能有關。

【枸杞

阿爾茨海默病(AD)是一種漸進性神經退行性疾病，其發病有增加的趨向〔1〕。枸杞(Fructuslycii)是我國傳統的藥材，它含有豐富的營養成分和藥理活性成分。現代醫學已證實，枸杞可調節免疫、延緩衰老和清除自由基等功能。本實驗采用D半乳糖所致衰老小鼠模型，探究AD小鼠學習記憶能力、腦組織乙酰膽堿酯酶(AchE)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的變化及枸杞對這些指標的影響，并分析其功能機制，為臨床應用提供理論依據。

1材料和方法

11試驗動物及分組昆明小鼠雄性75只，體重(24g±2)g(包頭醫學院動物室)。隨機分為5組，每組15只，即對照組，D-半乳糖模型組，低、中、高3個枸杞汁劑量組。飼養過程中對照組和模型組各死亡3只，枸杞汁劑量組各死亡2只。

12藥物和儀器枸杞(包頭市奇力康醫藥公司)。D-半乳糖(上海源聚生物科技有限公司，批號030406)。AchE試劑盒、SOD試劑盒、MDA試劑盒(南京建成生物工程探究所)。752C紫外-可見分光光度計、721型分光光度計(上海第三分析儀器廠)。STT-2型跳臺儀(中國醫科院藥研所)；德國來卡2135型切片機、加樣器(上海偉業有限公司)。離心機(北京醫用離心機廠)；混勻器(上海偉業有限公司)。

13D-半乳糖模型及給藥方法除對照組給予生理鹽水外，其他組每日均腹腔注射012g/(kgbw)的D半乳糖，給藥體積10ml/(kgbw)。枸杞組同時灌胃給予高劑量(15g/ml)、中劑量(075g/ml)、低劑量(0375g/ml)，對照組和模型組灌胃給予等容積的生理鹽水，連續6周。枸杞汁制備摘要：以枸杞子總體積的5倍量自來水冷浸3h，微沸1h×2次，合并濾液，文火濃縮制成，無菌條件下裝瓶，置4℃冰箱備用。

14方法

141跳臺實驗造模后灌胃至4周后1h開始跳臺實驗［2］。

142AchE、SOD、MDA的測定小鼠腦組織AchE活性用試劑盒方法；SOD活力采用黃嘌呤氧化酶法；MDA含量采用(TBA)法；腦組織蛋白質定量采用考馬斯亮藍(CBB-SDS)法。

15統計分析采用SPSS100軟件進行t檢驗。

2結果

21枸杞對小鼠跳臺成績的影響(表1)D半乳糖所致模型組，無論學習成績和記憶成績，和對照組比較，模型組小鼠的錯誤次數明顯增多(P＜001)，學習成績的反應期明顯延長(P＜001)，記憶成績的潛伏期明顯縮短(P＜001)；和模型組比較各給藥組小鼠學習記憶障礙有明顯的改善(P＜005或P＜001)；各用藥組間比較以枸杞汁中劑量功能最為明顯，但枸杞汁低、中、高劑量組間差異無統計學意義(P＞005)。

22枸杞對小鼠大腦AchE、SOD、MDA各項指標的影響(表2)對實驗組D半乳糖致小鼠腦組織AchE活性測定結果表明，模型組小鼠大腦中AchE減少，和對照組比較，差異有統計學意義(P＜001)，表明D半乳糖所致模型組，可以損傷膽堿能神經元，引起小鼠學習記憶障礙。和模型組比較，各給藥組可顯著升高D半乳糖所致的AchE活性下降(P＜005或P＜001)并基本達到對照組水平；模型組小鼠大腦中SOD活力明顯降低，MDA含量明顯增多，給予枸杞汁后可明顯提高SOD活性、降低MDA含量。

表1枸杞對小鼠學習記憶的影響（略）

注摘要：和對照組比較，aP＜001；和模型組比較，bP＜005,cP＜001

表2枸杞對小鼠腦組織AchE、SOD、MDA的影響（略）

注摘要：和對照組比較,aP＜001；和模型組比較,bP＜005,cP＜001

3討論

膽堿能系統是正常認知功能中最為重要的神經遞質系統，引起AD的生理生化機制目前還不清楚，和衰老致癡呆相關的因素很多〔3〕，AchE的異常可能是引起AD的一個重要因素。D半乳糖致小鼠腦組織AchE活性明顯下降〔4〕，單胺氧化酶活性明顯升高。AD患者大腦皮層內膽堿乙酰基轉移酶、AchE活性均下降〔5，6〕。已知膽堿能系統和學習記憶關系密切，Ach為促學習記憶的神經遞質，而AchE是降解Ach的酶，AchE活性降低，間接說明膽堿能功能衰退，故D-半乳糖致小鼠腦組織AchE活性下降，提示其中中樞膽堿能功能發生障礙，從而使學習記憶能力下降。本探究結果支持此結論。本探究結果顯示，枸杞能減輕由D半乳糖對小鼠腦的脂質過氧化損傷，枸杞可以明顯提高小鼠腦SOD活力，降低MDA含量。其功能機制可能是，機體自由基防御體系包括酶促體系和非酶促體系，酶促體系如SOD，可有效清除機體自由基；非酶體系是具有抗氧化活性的物質，如維生素E、維生素C、黃酮類、β-胡蘿卜素等。枸杞子每百克含維生素E2646mg，維生素C214mg，β-胡蘿卜素196mg，黃酮類物質500mg，復合枸杞多糖721mg〔7〕。探究結果表明，枸杞能增強D-半乳糖致衰老小鼠的學習記憶功能，可能和枸杞具有調節中樞膽堿能神經系統和抗脂質過氧化功能有關。

【參考文獻

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