柴胡有效成分提取分析論文

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1儀器與試藥

1.1儀器

島津LC-20A高效液相分析儀（SPD-20A紫外檢測器）；752紫外分光光度計（上海精密儀器科技有限公司）；RE52-86A旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠）；METTLERAE240電子分析天平（瑞士）。

1.2試藥柴胡藥材購于河南省藥材公司，經本院陳隨清教授鑒定為傘形科植物柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥根；柴胡皂苷a對照品自制，經峰面積歸一化法測定含量為：99.91%；乙腈為色譜純；水為雙重蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2方法

2.1單因素實驗

分別以藥材浸漬溫度、浸漬時間、料液體積比、蒸餾液收集量等為因素，在不同水平下進行單因素實驗，篩選出影響柴胡揮發油提取的主要因素和水平，同樣分別以乙醇濃度、pH值、柴胡皂苷提取時間、料液體積比等為因素，在不同水平下進行單因素實驗，篩選出影響柴胡皂苷提取的主要因素和水平。從而為正交實驗設計提供依據。

2.2揮發油的提取和測定方法隨機稱取50g柴胡干燥粗粉，置于500ml圓底燒瓶中，采用水蒸氣蒸餾法在不同條件下提取柴胡揮發油，收集蒸餾液，加3%丙二醇搖勻，精密量取上述蒸餾液2ml兩份，一份置5ml容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，作為樣品液，另一份置蒸發皿中，置水浴上蒸干，殘渣用蒸餾水溶解，轉移至5ml容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻，作為空白。用752紫外分光光度計在277nm波長處測定蒸餾液中揮發油的吸收度。

2.3柴胡皂苷的提取取提取揮發油后的藥渣，濾干，置于500ml圓底燒瓶中，在不同條件下回流提取柴胡皂苷，過濾得濾液，減壓低溫濃縮成每毫升含0.5g柴胡的濃縮液，備用。

2.4柴胡皂苷a含量測定

2.4.1色譜條件大連伊利特C18(4.6mm×250mm,5μm)；流動相為乙腈-水37∶63；流速1ml/min；檢測波長208nm；柱溫35℃；進樣量20μl。

2.4.2對照品溶液的制備精密稱取柴胡皂苷a對照品5.09mg，加甲醇溶解并定容至10ml，搖勻，配成0.509mg/ml對照品溶液，冷藏備用。

2.4.3供試品溶液的制備取上述濃縮液10ml減壓蒸干，加20ml甲醇溶解殘渣，過濾得濾液。再取2ml濾液至10ml容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，冷藏備用。

2.4.4線性范圍考察精密吸取對照品儲備液2.0，6.0，10.0，14.0，18.0μl，在“2.4.1”項下色譜條件下進樣測定，記錄峰面積，以峰面積積分值Y為縱坐標，對照品溶液進樣量X（μl）為橫坐標，進行線性回歸（n=5），得線性回歸方程為Y=209413.7X－162379.4，線性范圍為0.9720～9.635μg，相關系數為r=0.9997，線性關系良好。

2.4.5精密度實驗

精密吸取對照品20μl，在“2.4.1”項下色譜條件下重復進樣5次測定，記錄峰面積，RSD為1.5%（n=5），表明精密度良好。

2.4.6穩定性實驗

將供試品溶液在室溫下貯存，在“2.4.1”項下色譜條件下，分別于0，2，4，6，8h進樣測定，記錄峰面積，RSD為2.0%，表明樣品在8h內穩定。

2.4.7重復性實驗

精密稱取同一批樣品5份，按供試品溶液處理方法制備樣品溶液，在“2.4.1”項下色譜條件下重復進樣測定5次，記錄峰面積，RSD為2.1%（n=5）。

2.4.8樣品測定精密吸取20μl樣品溶液，在“2.4.1”項下色譜條件下進樣測定，記錄峰面積，計算各樣品中柴胡皂苷a的含量。

2.5正交實驗以柴胡蒸餾液中揮發油的吸收度和柴胡皂苷a的含量為檢測指標，參照單因素實驗結果，分別以藥材浸漬溫度、揮發油收集量、柴胡皂苷提取時間、柴胡皂苷提取溶劑料液比等主要因素及不同水平進行L9(34)正交設計，篩選最佳工藝。正交實驗因素和水平見表1。表1正交實驗因素及水平（略）

3結果

3.1浸漬溫度對揮發油提取效果的影響分別在30，40，60，80℃溫度下浸漬6h，料液比1∶6，提取1次，考察浸漬溫度對揮發油提取效果的影響。測得吸收度依次為：0.303，0.984，0.758，0.587。由測定結果可知，在40℃下浸漬吸收度達到最大。且變化顯著，所以浸漬溫度應選在40℃左右。

3.2浸漬時間對揮發油提取效果的影響在40℃下，分別浸漬0，2，4，6，8h，料液比1∶6，提取1次，考察浸漬時間對揮發油提取效果的影響。測得吸收度依次為：0.470，0.559，0.650，0.940，0.722。由測定結果可知，浸漬6h吸收度最大，浸漬4h和8h吸收度相當。

3.3料液比對揮發油提取效果的影響料液比分別為1∶5，1∶6，1∶8，1∶10，提取1次，考察料液比對揮發油提取效果的影響，測得吸收度依次為：0.316，0.443，0.337，0.258。由測定結果可見，料液比1∶6吸收度最大。且變化顯著。

3.4揮發油收集量對揮發油提取效果的影響分別收集100，200，300ml蒸餾液，考察揮發油收集量對揮發油提取效果的影響，測得吸收度依次為：0.454，0.507，0.596。由測定結果可知。隨著收集量的增多，吸收度逐漸增大，但增加趨勢不顯著。

3.5乙醇濃度對柴胡皂苷提取效果的影響分別以95%，75%，60%，45%乙醇，料液比為：1∶6，提取柴胡皂苷。考察不同乙醇濃度對柴胡皂苷提取效果的影響，柴胡皂苷a含量依次為：0.20%，0.15%，0.12%，0.12%。由測定結果可知，柴胡皂苷提取率隨乙醇濃度的降低而降低。在95%乙醇濃度時最大。且變化較顯著。因此選用95%乙醇提取。

3.6pH值對柴胡皂苷提取效果的影響分別用0，5%，10%，15%的氨水95%乙醇液提取皂苷。考察pH值對柴胡皂苷提取效果的影響，柴胡皂苷a含量依次為：0.20%，0.25%，0.24%，0.24%。由測定結果可知，堿性乙醇提取效果比較好，含5%～10%氨水95%乙醇條件下提取液中柴胡皂苷a變化不顯著，因此選用含5%氨水。

3.7提取時間對柴胡皂苷提取效果的影響用95%乙醇分別在0.5，1，2，3h提取皂苷。考察提取時間對皂苷提取效果的影響。柴胡皂苷a含量依次為：0.20%，0.25%，0.20%，0.20%。由測定結果可知，提取1h時提取率最大。提取時間再長提取率就逐漸下降。

3.8料液比對柴胡皂苷提取效果的影響在10，8，6，5，3倍不同料液比條件下回流提取柴胡皂苷。考察料液比對柴胡皂苷提取效果的影響。柴胡皂苷a含量依次為：0.15%，0.15%，0.20%，0.21%，0.14%。由測定結果可知，料液比為在5～6倍時提取率最大。

3.9正交實驗結果與分析因柴胡中的揮發油和柴胡皂苷a均為有效成分，權重應相等。則規定吸收度中最大值0.945及柴胡皂苷a含量中最大值0.33%為100，其余值對應比較，兩項加和后平均得綜合評分值。結果見表2，方差分析見表3。表2正交實驗結果與分析（略）表3誤差分析（略）

由表2和表3可知，柴胡揮發油收集量的極差最大，其次是料液比和柴胡皂苷提取時間，故對于柴胡提取效果影響的大小順序為B>D>C>A，由于A和C影響不顯著，故綜合考慮，選擇最佳提取方案為A1B1C1D3，即40℃浸漬，收集100ml揮發油，8倍量含5%氨水的95%乙醇提取1h。

3.10最佳方案的驗證實驗取50g柴胡粗粉置500ml圓底燒瓶中，在最佳提取條件下提取。重復兩次。結果見表4。表4驗證實驗結果（略）

由表4可見，采用優化最佳工藝提取有效成分柴胡揮發油和皂苷，其揮發油吸收度和柴胡皂苷a的含量都較高，且工藝條件穩定可靠，重復性好。

4討論

柴胡揮發油和柴胡皂苷為柴胡的主要有效成分，兩者的提取是較為矛盾的。據文獻資料，柴胡皂苷在6h內穩定，而要完全提取揮發油則要較長時間。這將導致柴胡皂苷的分解、降解等一系列不穩定的反應，使柴胡皂苷的含量降低。因此要同時兼顧揮發油和柴胡皂苷的提取，可考慮采用水蒸氣蒸餾法提取柴胡揮發油，采用堿性醇提工藝代替傳統的水提工藝提取柴胡皂苷。且在提取過程中發現，柴胡皂苷a受熱容易分解，隨著加熱時間增長，含量逐漸減少，因此在各加熱環節，如提取，濃縮，干燥過程中應盡量采用低溫，以減少柴胡皂苷a的損失。

中藥成分復雜,應綜合考慮各有效成分的性質及其在制備過程中的變化,以保證制劑的質量和療效。據文獻資料，柴胡中含柴胡皂苷a大約在0.2%～0.4%，從本實驗最佳工藝提取液中測得柴胡中柴胡皂苷a的含量為0.32%，因此本工藝提取效果較好。至于揮發油的含量，各種文獻所得結果不盡相同，甚至相差10倍以上，由于藥材的原因，如藥材部位、采收時間、產地等的影響難以衡量，因此本實驗在不影響揮發油提取的前提下還兼顧了柴胡皂苷a的提取，從而為柴胡的提取提供可靠的依據和參照。

【參考文獻】

［1］國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京:化學工業出版社，2005：562.

［2］楊云.天然藥物化學成分提取分離手冊（修訂版）［M］.北京:中國中醫藥出版社,2002:612.

【摘要】目的確定柴胡有效成分提取的最佳工藝。方法以柴胡中揮發油吸收度和柴胡皂苷a的含量為指標，采用單因素實驗篩選主要因素和水平，再以正交實驗篩選柴胡有效成分提取最佳工藝。結果最佳工藝參數為40℃溫浸，收集相當于藥材2倍量蒸餾液，繼用8倍量含5%氨水的95%乙醇回流1h提取柴胡皂苷，可使揮發油吸收度達0.941，柴胡皂苷a的含量達0.32%。結論該工藝為柴胡有效成分的提取提供了可靠依據，且工藝條件穩定可靠，重復性好。

【關鍵詞】提取工藝柴胡皂苷a揮發油正交實驗