蒲公英提取物質量標準論文

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1儀器與試藥

1.1儀器Waters高效液相色譜儀（Waters515高壓泵，microliterTM#702型手動進樣針，Waters2487紫外檢測器，Empower數據處理系統），SIGMA3K15型離心機，MettlerToledoAG135型電子天平。

1.2試藥蒲公英藥材由亳州濟人藥業有限公司提供，咖啡酸和綠原酸對照品購于中國藥品生物制品檢定所。硅膠G（青島海洋化工廠），甲醇為色譜級，磷酸和磷酸二氫鈉為分析純，水為超純水。其他試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1定性鑒別

2.1.1供試品溶液的制備取蒲公英提取物1g，加甲醇20ml，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml使溶解，濾過，濾液用醋酸乙酯振搖提取2次，10ml/次，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2對照品溶液的制備取咖啡酸對照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液。另取綠原酸對照品，加甲醇制成每毫升含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3薄層層析吸取上述3種溶液各6μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸丁酯－甲酸－水（7∶2.5∶2.5）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢測。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件色譜柱為AgilentHypersilODS柱，（5μm，4.6mm×250mm）；流動相為甲醇－磷酸鹽緩沖液（pH4.0）：（23∶77），檢測波長323nm，柱溫25℃，流速為1.0ml/min。靈敏度：1.0AUFS；理論塔板數按咖啡酸峰計算應不低于3000，咖啡酸峰與其他峰能達到基線分離，且出峰時間適宜，峰形較好。

2.2.2對照品溶液的制備分別精密稱取在110℃干燥至恒重的綠原酸和咖啡酸對照品各2.5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得0.025mg/ml的對照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備取蒲公英提取物干粉0.5g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加含5％甲酸的甲醇溶液50ml，密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，取出，放冷，再稱定重量，用含5％甲酸的甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，離心，取上清液，用微孔濾膜（0.22μm）濾過，濾液置棕色量瓶中，即得。

2.2.4線性關系考察分別精密稱取在110℃干燥至恒重的綠原酸和咖啡酸對照品各2.5mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，再用甲醇逐級稀釋得0.05，0.025，0.0125，0.00625，0.003125mg/ml5個不同濃度的對照品溶液，分別進樣10μl，測定其峰面積，然后分別以綠原酸和咖啡酸的濃度為橫坐標，5次測定峰面積的均值為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為綠原酸：Y＝3×107X-24923,R2=0.9995；咖啡酸：Y＝5×107X+8862.3,R2=0.9999。實驗結果表明綠原酸和咖啡酸的濃度在0.003125～0.05mg/ml范圍內均與所測得的相應峰面積呈良好的線性關系。

2.2.5精密度實驗精密吸取對照品溶液10μl進樣，重復進樣6次。按上述色譜條件測定綠原酸的峰面積分別為735557，723229，730246，735043，720147，724230，RSD＝0.89％。咖啡酸的峰面積分別為1255324，1275697，1267064，1270335，1292704，1243824，RSD＝1.33%。結果表明本方法的精密度良好。

2.2.6穩定性實驗精密吸取供試品溶液，按上述色譜條件，每隔1h進樣1次，共進樣6次。綠原酸峰面積分別為505928，506310，510911，515970，518800，510034，RSD＝1.01％。咖啡酸的峰面積為798944，797559，803781，811651，820222，816674，RSD＝1.17％。結果表明，綠原酸和咖啡酸的峰面積在5h內無明顯變化，供試品溶液穩定性好。對照品及供試品色譜圖見圖1~2。

2.2.7重復性實驗取同一批樣品，平行實驗6次，測得綠原酸含量為1.775，1.734，1.808，1.750，1.788，1.75，RSD＝1.52％。咖啡酸含量為1.606，1.583，1.628，1.567，1.613，1.601，RSD＝1.36％。結果表明，在同一條件下，6次測得樣品綠原酸含量及咖啡酸含量一致，本方法重復性好。

圖1對照品色譜圖（略）

圖2供試品色譜圖（略）

2.2.8回收率實驗采用加樣回收法，精密稱取已知含量的樣品6份，每份0.5g，分別精密添加綠原酸對照品1.8mg和咖啡酸對照品1.6mg，按“2.2.3”的方法制成供試品溶液，各取10μl進樣，測定綠原酸和咖啡酸的含量。計算平均回收率分別為98.89％和99.65％，RSD分別為1.05％和1.34％。實驗結果表明，本方法回收率好。

2.2.9樣品含量測定按“2.2.3”項的方法制備樣品，用上述方法對以下不同批次樣品進行含量測定。結果見表1。

表1蒲公英提取物中綠原酸和咖啡酸含量測定結果（略）

3討論

有人以單獨的咖啡酸或綠原酸為指標，對蒲公英藥材或制劑進行質量評價［4，7］。蒲公英提取物與蒲公英藥材的化學成分及含量有所不同。為了更好地評價蒲公英提取物，本實驗在前人研究的基礎上同時以綠原酸和咖啡酸為指標，對蒲公英提取物進行質量標定。

本法參考了《中國藥典》2005年版Ⅰ部蒲公英中咖啡酸的測定方法，并新加入了綠原酸作為檢測指標，考慮同時以咖啡酸和綠原酸作為檢測指標，本實驗在原有的檢測條件下做了若干改進，獲得較好的效果，能有效控制蒲公英提取物質量。

【參考文獻】

［1］徐為公,徐鵬.中藥提取物的國際化策略［J］.中藥研究與信息,2005,7（10）:34.

［2］KatrinSchütz,ReinholdCarle,AndreasSchieber.Taraxacum－Areviewonitsphytochemicalandpharmocologicalprofile［J］.JournalofEthnopharmacology,2006,107:313.

［3］W.Kisiel,B.Barszcz.FuthersesquiterpenoidsandphenolicsfromTaraxacumofficinale［J］.Fitoterapia,2000(71):269.

［4］周小平,趙厚民.RP-HPLC法測定蒲公英中綠原酸含量［J］.江蘇藥學與臨床研究,2006,14（3）:211.

［5］晏媛,許重遠,陳志良,等.高效毛細管電泳法測定蒲公英中咖啡酸的含量［J］.中藥材,2004,24(2):100.

［6］國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部［S］.北京:化學工業出版社,2005:244.

［7］盛曉靜,劉薇.復方公英片質量標準研究［J］.中成藥,2006,28（12）:1853.

【摘要】目的以綠原酸和咖啡酸為定量指標，建立蒲公英提取物的質量標準。方法采用薄層色譜法（TLC）為蒲公英提取物制定定性鑒別方法；采用高效液相色譜（HPLC）法測定其中的綠原酸和咖啡酸含量。結果綠原酸在0.003125~0.05mg/ml與峰面積具有良好的線性關系，R2=0.9995。咖啡酸在0.003125~0.05mg/ml與峰面積具有良好的線性關系，R2=0.9999。綠原酸和咖啡酸平均回收率分別為98.89％和99.65％，RSD分別為1.05％和1.34％。結論建立的方法簡便、準確、可靠，可作為控制該藥品的質量標準。

【關鍵詞】蒲公英提取物綠原酸咖啡酸質量標準高效液相色譜