巴洛沙星有關物質管理論文

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【摘要】目的采用RP-HPLC法測定巴洛沙星的有關物質。方法使用SMTC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流動相為乙腈-0.4%十二烷基硫酸鈉溶液(47：53)［用枸櫞酸（1.5mol/L）調pH值至3.0］，檢測波長為295nm，流速為1.0ml/min。結果巴洛沙星與各有關物質在上述色譜條件下能有效地分離。結論該方法結果準確、操作簡單、靈敏度高、專屬性強，適用于巴洛沙星的有關物質測定。

【關鍵詞】巴洛沙星；反相高效液相色譜法

StudyondeterminationofrelatedsubstancesinbalofloxacinbyRP-HPLC

【Abstract】ObjectiveThereversedphasehighperformanceliquidchromatographymethodwasestablishedtodeterminetherelatedsubstancesinbalofloxacin.MethodsThecolumnisSMTC18(250mm×4.6mm×5μm).Themobilephaseiscompoundsolutionofacetonitrileand0.4%laurylsodiumsulfate(47：53)［adjustedpHto3.0bycitricacid(1.5mol/L)］，thedetectionwavelengthis295nm，theflowrateis1.0ml/min.Balofloxacianandalloftherelatedsubstancescanbeseparatedefficientlywiththisdetermineationoftherelatedsubstancesinbalofloxacin.ThecolumnisSMTC18(250mm×4.6mm，5μm).Themobilephaseiscompoundsolutionofacetonitrileand0.4%laurylsodiumsulfate(47：53)［adjustedpHto3.0bycitricacid(1.5mol/L)］，thedetectionwavelengthis295nm，theflowrateis1.0ml/min.ResultsBalofloxacianandalloftherelatedsubstancescanbeseparatedefficientlywiththiscondition.Themethodisaccurate，simple，rapidandexclusive.ConclusionItcouldbeusedfordeterminationofrelatedsubstancesinbalofloxacin.

【Keywords】balofloxacin；reversedphasehighperformanceliquidchromatography

巴洛沙星(balofloxacin)系由日本中外制藥株式會社與韓國Choongwae公司共同開發的氟喹諾酮類抗菌藥，于2002年首次在韓國上市［1～2］。對革蘭陽性菌、革蘭陰性菌及厭氧菌具有廣譜抗菌活性，對細菌具有選擇性抑制作用，體外抗菌活性是環丙沙星、氧氟沙星和洛美沙星的4～16倍［3］；與托氟沙星和司帕沙星類似［4］。由于巴洛沙星在其母核的8位引入了一甲氧基，使其不僅增加了對革蘭陽性菌的抗菌活性，而且避免或減少光過敏或光毒性及細胞毒性［5］。巴洛沙星是以羧酸乙酯為起始原料，先和三乙酸硼反應生成螯合物Ⅰ，再和3-甲胺基哌啶二鹽酸鹽縮合反應得螯合物Ⅱ，然后水解制得。該路線是目前制備巴洛沙星的最優路線［6］。測定巴洛沙星的有關物質常用液相色譜法，俞紅等［7］報道，用流動相為0.05mol/L檸檬酸-乙腈（60：40）［三乙胺調pH=4］的反相液相色譜法測定主要中間體羧酸乙酯在巴洛沙星中的含量。本實驗通過摸索新的色譜條件，采用乙腈-0.4%十二烷基硫酸鈉溶液為流動相的高效液相色譜法，能同時測定了巴洛沙星的合成中間體羧酸乙酯、螯合物Ⅰ及螯合物Ⅱ。該方法簡單準確、分離效果好，對巴洛沙星的質量控制具有明顯的實用價值。巴洛沙星及各中間體的結構式如圖1所示。

1實驗部分

1.1儀器與試劑高效液相色譜儀—Waters515泵；2487紫外檢測器。巴洛沙星樣品自制，樣品批號：20041015、20041020、20041024；對照品自制，含量：99.7%；羧酸乙酯（江陰市永達化工有限公司），螯合物Ⅰ、螯合物Ⅱ均自制；乙腈為色譜純試劑，其他試劑均為分析純試劑。

1.2實驗溶液的制備供試品溶液：取巴洛沙星（批號：20041024）約10.2mg，置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；中間體溶液：取羧酸乙酯14.0mg、螯合物Ⅰ11.3mg、螯合物Ⅱ10.3mg，分別置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得；混合溶液：取供試品溶液及各中間體溶液各1份，混合，即得。

1-巴洛沙星；2-羧酸乙酯；3-螯合物Ⅰ；4-螯合物Ⅱ1.3色譜條件色譜柱：SMTC18柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動相：乙腈-0.4%十二烷基硫酸鈉溶液(47：53)［用枸櫞酸（1.5mol/L）調pH值至3.0］；檢測波長：295nm；流速：1.0ml/min；柱溫：室溫；進樣量：20μl。

2結果與討論

2.1測定波長的選擇分別稱取巴洛沙星及各中間體適量，分別加乙腈溶解制成每1ml中約含6μg的溶液，照分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄ⅣA)，在200～400nm的波長處掃描，結果顯示巴洛沙星在295nm處吸收最強，且其他中間體在295nm附近有較大的吸收，故選擇295nm為本品有關物質測定的檢測波長。

2.2色譜柱及流動相的選擇色譜柱：(1)DiamonsilTMC18柱（5μm，4.6mm×200mm）；(2)KromasilC18柱（5μm，4.6mm×200mm）；(3)SMTC18柱（5μm，4.6mm×250mm）。流動相：(1)參照中國藥典2000年版二部沙星類藥物有關物質測定，采用流動相：乙腈-0.05mol/L枸櫞酸溶液(20：80)［用三乙胺調pH值至3.5］；(2)乙腈—0.4%十二烷基硫酸鈉溶液（47：53）［用枸櫞酸（1.5mol/L）調pH值至3.0］。

采用上述不同的色譜柱和流動相進行實驗，結果表明：采用色譜柱(1)或(2)及流動相(1)，雖然主峰出峰時間適中且峰形較好，但各中間體在此流動相中50min都未見出峰；采用色譜柱(1)或(2)及流動相(2)，樣品及各中間體出峰時間適中，但峰拖尾嚴重；采用色譜柱(3)及流動相(2)，樣品及各中間體出峰時間適中，且峰形較好。所以選擇采用色譜柱(3)及流動相(2)來檢測本品的有關物質。

2.3系統適用性試驗取1.2項溶液各20μl分別注入液相色譜儀進行測定，并記錄色譜圖，測定結果見表1及圖2。試驗結果表明：巴洛沙星與各中間體在上述色譜條件下能有效地分離。

2.4專屬性試驗取供試品溶液9ml，加1.0mol/L鹽酸溶液1ml，置水浴(60℃)中放置12h，加1.0mol/L氫氧化鈉溶液調節溶液的pH至中性，再加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為酸破壞溶液；取供試品溶液9ml，加1.0mol/L氫氧化鈉溶液1ml，置水浴(60℃)中放置12h，加1.0mol/L鹽酸溶液調節溶液的pH值至中性，再加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為堿破壞溶液；取供試品溶液9ml，加30%過氧化氫1ml，置水浴(60℃)中放置12h，再加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為氧化破壞溶液。經強酸、強堿、強氧化破壞試驗，結果表明：在此色譜條件下，各降解產物峰與主峰均能達到基線分離。

2.5最低檢出量取巴洛沙星對照品及各中間體適量，分別用流動相逐級稀釋后進樣，當信噪比為3：1時，測得巴洛沙星、羧酸乙酯、螯合物Ⅰ、螯合物Ⅱ的最低檢出量分別為1.12×10-2ng、0.272ng、2.016ng、0.208ng。

2.6溶液的穩定性試驗取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、12h測定，測得溶液在12h內的平均峰面積為99497023.7，RSD為0.35%，說明本品溶液基本穩定。結果見表2。

2.7有關物質的測定各取3批巴洛沙星供試品適量，分別加流動相溶解并稀釋制成每1ml中含巴洛沙星約為0.1mg的溶液，按1.3色譜條件檢查有關物質，結果見表3及圖3。實驗結果表明：3批供試品有關物質結果均小于1.0%。

【參考文獻】

1AlksneL.BalofloxacinChoongwae.CurrOpinInvestigDrugs，2003，4：224-229.

2廖斌，叢欣，廖清江.2002年世界上市的新藥.藥學進展，2003，27（3）：190-193.

3ItoT，OtsukiM，NishinoT.InvitroantibacterialactivityofQ-35，anewfluoroquinolone.AntimicrobAgentsChemother，1992，36：1708-1714.

4NakaneT，NakajimaC，MitsuhashiS.Invitroantibacterialactivityofbalofloxacin.NipponKagakuRyohoGakkaiZasshi，1995，43（S-5）：1-9.

5MarutaniK，MatsumotoM，OtableY，etal.Reducedphototoxicityofafluoroquinoloneantibacterialagentwithamethoxygroupatthe8positioninmiceirradiatedwithlong-wavelengthUVlight.AntimicrobAgentsChemother，1993，37（10）：2217-2223.

6劉明亮，劉秉全，孫蘭英，等.巴洛沙星的合成.中國醫藥工業雜志，2004，35(7)：385-388.

7俞紅，戴真南，繆玉山，等.用RP-HPLC法測定巴洛沙星中間體含量的方法學研究.現代醫學，2004，32（2）：85-87