復(fù)方芩E涂膜劑的制備與質(zhì)量控制

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摘要:目的制備復(fù)方芩E涂膜劑，并對其質(zhì)量進行控制。方法以聚乙烯醇－124為成膜材料，按藥劑學(xué)原理制備復(fù)方芩E涂膜劑，建立質(zhì)量控制方法并對主成分含量測定方法進行了方法學(xué)驗證。結(jié)果制備工藝合理、簡單，質(zhì)量控制方法可行，制劑質(zhì)量穩(wěn)定，對家兔皮膚無刺激。結(jié)論符合涂膜劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和要求，可供臨床應(yīng)用。

關(guān)鍵詞:黃芩苷;涂膜劑;放射性皮炎;高效液相色譜;質(zhì)量控制

復(fù)方芩E涂膜劑是我院在復(fù)方芩E乳膏的基礎(chǔ)上研制的制劑。臨床上用于預(yù)防腫瘤患者放射治療引起的放射性皮炎。放射性皮炎是腫瘤患者放療后皮膚最重要的不良反應(yīng)，且發(fā)生率高［1］，發(fā)生嚴(yán)重放射性皮炎的患者往往會放棄放療。復(fù)方芩E涂膜劑制備工藝簡單、質(zhì)量可控，物理性質(zhì)穩(wěn)定，臨床應(yīng)用時易涂布、不易脫落，使用方便，并且克服了乳膏容易污染衣物等缺點。我院臨床上使用復(fù)方芩E涂膜劑預(yù)防腫瘤患者放療引起的放射性皮炎，療效比較滿意［2］。

1儀器與試藥

高效液相色譜儀:SP－1000，檢測器:SP－100UV(美國Spectra－Physics公司);復(fù)方芩E涂膜劑(本院制劑室，批號:150621、150701、150720);黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110715－200815);維生素E對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100062－200608);黃芩苷(兗州市大禹制藥有限責(zé)任公司，批號:20110301);維生素E(DSMSwizerland，批號:H20110053);聚乙烯醇－124(西安天正藥用輔料有限公司，批號:20131012);丙二醇(湖南爾康制藥有限公司，批號:20110801);月桂氮酮(西安藻露堂康復(fù)醫(yī)藥有限公司，批號:20130610);二甲基亞砜(遼寧省本溪市輕化工研究所實驗廠，批號:20100606);乙醇(河北建寧藥業(yè)有限公司，批號:121016);甲醇和冰醋酸為色譜純，其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2．1處方組成與制備方法2．1．1處方組成黃芩苷30g，維生素E30g，聚乙烯醇－124100g，丙二醇50mL，月桂氮酮60mL，冰片20g，二甲基亞砜100mL，乙醇適量，純化水適量，共制成1000g。2．1．2制備方法先取聚乙烯醇－124，加入5～7倍純化水浸泡膨脹后，置水浴上加熱，使其完全溶解，備用。取黃芩苷、維生素E，溶于二甲亞砜、丙二醇中，加月桂氮酮，攪拌，再緩慢加入上述溶液不斷攪拌，加冰片、乙醇、純化水適量至1000g。2．2一般質(zhì)量控制2．2．1性狀本品為淡黃色、半透明、黏稠狀液體。2．2．2膜劑外觀本品為半流體，淡黃色，具有特異氣味，在皮膚上可均勻涂布，約3～5min即可凝固成有韌性，能夠緊附于皮膚的薄膜，薄膜表面光潔，容易揭脫。2．2．3鑒別2．2．3．1黃芩苷取本品3．0g，水浴蒸干，加甲醇5．0mL溶解作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1mL含0．5mg的溶液，作為對照品溶液。再取處方中不含黃芩苷的其他組分，照前法制成陰性對照液。照薄層色譜法［《中國藥典》2015年版(四部)通則0502］試驗，吸取上述3種溶液各2μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無熒光斑點。2．2．3．2維生素E取本品5．0g，加無水乙醇10mL，攪拌均勻后過濾，取濾液加硝酸2mL，搖勻，于75℃加熱約15min，溶液顯橙紅色。2．2．4刺激性實驗取體重為2．0～2．5kg的健康家兔10只，雌雄不限，剃光家兔背部兩側(cè)毛約8cm2，取復(fù)方芩E涂膜劑2g，分別均勻涂在家兔背部左右剃毛處兩側(cè)，于1、2、4、6、12、24、48、72h后觀察皮膚反應(yīng)。結(jié)果涂藥部位無紅疹、水皰等皮膚異常反應(yīng)。2．2．5其他檢查應(yīng)符合《中國藥典》2015年版涂膜劑項下有關(guān)的各項規(guī)定。2．3含量測定2．3．1色譜條件維生素E含量測定色譜條件:色譜柱:ODS－C18(4．6mm×200mm，5μm);流動相:甲醇;紫外檢測波長:285nm;流速:1．0mL•min－1;進樣量:20μL;柱溫:室溫。黃芩苷含量測定色譜條件:色譜柱:ODS－C18(4．6mm×200mm，5μm);流動相:甲醇－水－冰醋酸(46∶54∶1);紫外檢測波長:274nm;流速:2．0mL•min－1;進樣量:20μL;柱溫:室溫。2．3．2溶液的配制2．3．2．1對照品溶液的配制精密稱取維生素E對照品0．0499g，置50mL量瓶中，加無水乙醇溶解并定容，得質(zhì)量濃度為0．998g•L－1的維生素E對照品溶液;精密稱取60℃干燥6h的黃芩苷對照品0．0250g，置50mL容量瓶中，50%甲醇溶解定容，得質(zhì)量濃度為0．500g•L－1黃芩苷對照品溶液。2．3．2．2供試品溶液、陰性對照品溶液的配制精密稱取復(fù)方芩E涂膜劑0．1g，加70%甲醇適量，超聲提取(功率250W，頻率50kHz)15min，加甲醇定容至100mL容量瓶中，搖勻，微孔濾器(0．22μm)濾過，續(xù)濾液作為供試品溶液。按處方比例配制缺少維生素E的制劑，制成不含維生素E的陰性對照品溶液;同法配制缺黃芩苷的制劑，制成不含黃芩苷的陰性對照品溶液。2．3．3方法學(xué)考察2．3．3．1專屬性考察分別取對照品、供試品、陰性對照品溶液，按“2．3．1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖。圖1、圖2示待測成分與其他物質(zhì)分離良好，分離度大于1．5，黃芩苷和維生素E的保留時間分別為9．5min和12．5min，陰性對照品溶液色譜在待檢測成分相應(yīng)位置未出現(xiàn)干擾峰，表明制劑中其他輔料對待測成分無干擾。A．對照品溶液;B．樣品溶液;C．陰性對照品液1．黃芩苷圖1黃芩苷含量測定專屬性考察HPLC圖A．對照品溶液;B．樣品溶液;C．陰性對照品液2．維生素E圖2維生素E含量測定專屬性考察HPLC圖2．3．3．2線性關(guān)系考察分別精密吸取維生素E對照品溶液1．0、2．0、3．0、4．0、5．0mL，置10mL容量瓶中，加無水乙醇定容，得到不同梯度的對照品溶液(0．0998、0．1996、0．2994、0．3992、0．4990g•L－1)5個，按“2．3．1”項下色譜條件測定，記錄維生素E峰面積，以峰面積(A)對質(zhì)量濃度(C，g•L－1)進行線性回歸，得回歸方程A=33．2702C+0．1762，r=0．9994(n=5)。結(jié)果表明，在0．998～4．990g•L－1范圍內(nèi)維生素E進樣濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系。分別精密吸取黃芩苷對照品溶液0．5、1．0、2．0、3．0、4．0mL，置10mL容量瓶中，加無水乙醇定容，制得不同梯度的對照品溶液(0．0250、0．0500、0．1000、0．1500、0．200g•L－1)5個，按“2．3．1”項下色譜條件測定，記錄黃芩苷的峰面積，以峰面積(A)對質(zhì)量濃度(C，g•L－1)進行線性回歸，得回歸方程A=6．924×106C－6．136×104，r=0．9994。結(jié)果表明，黃芩苷進樣濃度在0．0250～0．2000g•L－1內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。2．3．3．3精密度試驗取維生素E高(0．4990g•L－1)、中(0．2994g•L－1)、低(0．1996g•L－1)3個對照品溶液，于1d內(nèi)連續(xù)進樣5次，和連續(xù)5d分別進樣，考察日內(nèi)精密度和日間精密度。結(jié)果日內(nèi)精密度RSD＜1．30%(n=5)，日間精密度RSD＜1.65%(n=5)。取黃芩苷高(0．1500g•L－1)、中(0．1000g•L－1)、低(0．0500g•L－1)3個對照品溶液，于1d內(nèi)連續(xù)進樣5次，和連續(xù)5d分別進樣，考察日內(nèi)精密度和日間精密度。結(jié)果日內(nèi)精密度RSD＜1．36%(n=5)，日間精密度RSD＜2．74%(n=5)。2．3．3．4溶液穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，室溫放置0、6、12、24h，按“2．3．1”項下色譜條件分別進樣測定峰面積。結(jié)果維生素E峰面積的RSD=1.48%，黃芩苷峰面積的RSD=1．53%，表明在24h內(nèi)供試品溶液質(zhì)量穩(wěn)定。2．3．3．5重復(fù)性試驗取批號為150621的樣品5份，制備供試品溶液并進樣，記錄峰面積。維生素E峰面積的RSD=1．75%(n=5)，黃芩苷峰面積的RSD=1．88%(n=5)。2．3．3．6加樣回收試驗精密稱取已知含量的復(fù)方芩E涂膜劑(批號:150621)適量，精密稱定，分別精密加入維生素E、黃芩苷對照品適量，按樣品測定方法分別測定維生素E、黃芩苷含量并計算回收率。結(jié)果平均回收率分別為98．75%、99．91%。2．3．4樣品含量測定取復(fù)方芩E涂膜劑樣品3批(批號:150621、150701、150720)，供試液品溶液按“2．3．2”項下制備，按“2．3．1”項下色譜條件進樣測定，計算維生素E和黃芩苷的含量。結(jié)果維生素E和黃芩苷含量分別為標(biāo)示量的100．72%、99．38%、98．56%和100．80%、98．17%、99．50%。

3討論

3．1制備工藝聚乙烯醇－124是一種水溶性高分子化合物，由聚醋酸乙烯醇解而成，平均聚合度為2400～2500［3］，成膜性、柔軟性和吸濕性均良好，是涂膜劑中應(yīng)用最廣泛的成膜材料之一［4］。采用聚乙烯醇－124為成膜材料的復(fù)方芩E涂膜劑具有良好的成膜性能，涂布于患處后，溶劑能迅速揮發(fā)形成薄膜;丙二醇為增塑劑，可以增加膜的柔韌性，起膜方便;月桂氮酮為透皮吸收劑，有報道表明6%月桂氮酮對黃芩苷經(jīng)皮滲透作用最強［5］;黃芩苷在水中極微溶解［6］，所以將其溶于萬能溶劑二甲亞砜中，提高了制劑的含量均勻度。3．2質(zhì)量控制參照文獻［7－10］，采用高效液相色譜法分別測定黃芩苷、維生素E的含量。特別是在選擇流動相系統(tǒng)時，驗證了多種不同類型和比例的流動相系統(tǒng)，分別以甲醇－水－冰醋酸(46∶54∶1)、甲醇為流動相，得到最佳的系統(tǒng)分離效果，該質(zhì)量控制方法專屬性好、回收率高、重復(fù)性好、保留時間適當(dāng)，制劑中相關(guān)輔料對測定結(jié)果無干擾。應(yīng)用這種方法作為質(zhì)量控制方法是可行的。

作者:宋冷梅 姜宏 宋征 李保院 單位:濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院

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