化學(xué)成分及質(zhì)量控制方法研究

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1密蒙花的化學(xué)成分

密蒙花化學(xué)成分豐富，研究者采用HPLC、UV、TLC、GC-MS等分析出密蒙花中主要含有黃酮類、揮發(fā)油類、苯乙醇苷類、三萜類、生物堿類等化學(xué)成分[3-6]。其中，蒙花苷和苯乙醇苷類成分常被認(rèn)為是密蒙花的主要有效成分，現(xiàn)分述如下。1.1黃酮類成分。黃酮類物質(zhì)屬于低分子天然植物成分，是自然界中存在的酚類物質(zhì)，具有抗炎、抗菌、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力的作用。蔣紅芝[7]、熊勇等[8]采用乙醇溶液提取密蒙花中的總黃酮成分，通過正交試驗對乙醇濃度、浸提時間、浸提溫度等因素進(jìn)行考察，總黃酮提取率為13%~15%。潘喬丹等[9]對總黃酮提取方法進(jìn)一步優(yōu)化，通過靜態(tài)試驗和動態(tài)試驗比較了不同型號樹脂的純化作用，得干膏中總黃酮純度為71.31%。李教社等[10]用色譜等方法從密蒙花花蕾中分離得到了8種黃酮類化合物，并通過波譜解析確定它們的結(jié)構(gòu)依次為刺槐素、芹菜素、木犀草素、密蒙花新苷、蒙花苷、木犀草素-7-O-蕓香糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷以及秋英苷。鄭暢[11]等又從中分離出芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-蕓香糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-4’-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-(2’-α-L-鼠李糖基)蕓香糖苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷等黃酮類成分。Xie等[12]研究表明，密蒙花中還具有松果菊苷、刺槐黃素等黃酮類成分。陳蘭英[13]等對不同生境、不同部位密蒙花黃酮類化合物進(jìn)行測定，結(jié)果表明在林緣環(huán)境下密蒙花黃酮類化合物質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，且密蒙花不同部位的蒙花苷、木犀草素和芹菜素質(zhì)量分?jǐn)?shù)均表現(xiàn)為盛開花要顯著高于花蕾、莖和葉。自中國藥典2005年版以來，密蒙花中蒙花苷的含量就被當(dāng)做質(zhì)量檢測指標(biāo)來評價密蒙花藥材及制劑的質(zhì)量，一般其含量不得<0.5%[1,14-15]。1.2揮發(fā)油類成分。密蒙花中含有大量的揮發(fā)油類成分。張?zhí)m勝等[16]采用水蒸氣蒸餾法從密蒙花中提取揮發(fā)油，用GC-MS對其揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，鑒別出密蒙花揮發(fā)油中27種化學(xué)成分，占揮發(fā)油總量的72.41%。其中棕櫚酸(14.7%)、6,10,14三甲基-2-十五烷酮(12.92%)、二十一烷(6.15%)、二十七烷(3.28%)，紫丁香醇D(1.18%)等。結(jié)果表明烷烴類化合物含量最高，其次是酯類，還有一些醇類化合物等。劉和等[17]以密蒙花為原料，并應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜-數(shù)據(jù)系統(tǒng)(GC/MS/DS)技術(shù)，分析密蒙花不同部位揮發(fā)油主要成分，得到干葉精油中主要成分為醇、酸、烷等3類化合物，而干花精油中主要成分包括醇、醚、酮、酸、醛、烷等6類化合物。龍春焯等[18]也采用GC-MS/MS技術(shù)來分析密蒙花精油中的化學(xué)成分，得到其主要成分為芳樟醇(9.01%)、橙花叔醇(1.39%)等，它們是密蒙花具有清香氣味的主要成分，多用來配置日用的花香香精。1.3苯乙醇等苷類成分。苯乙醇苷類化合物具有抗菌、抗炎、抗腫瘤等多種藥理作用，其中以抗菌活性最為顯著[19]。李教社等[20]從密蒙花中提取到4個苯乙醇苷類化合物，利用光譜法等鑒定分別為毛柳苷、毛蕊花苷、異毛蕊花苷和仙人球苷。李秀蘭等[21]也從密蒙花中分離出毛蕊花糖苷和仙人球苷。朱露等[22]對10個不同場地的22批密蒙花藥材進(jìn)行分析，均從中分離得到了毛蕊花苷，且研究表明各地市售密蒙花藥材中毛蕊花苷的含量較高，平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.89%。目前，已從密蒙花中分離得到種苯乙醇苷類化合物[23]，分別是毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷、肉蓯蓉苷F、紫葳新苷Ⅱ、荷包花苷、仙人球苷、連翹酯苷B、安哥羅苷A、毛柳苷、6β羥基毛蕊花苷、金石蠶苷和地黃苷等。除此之外，Xie等[12]從密蒙花中還提取出西紅花苷III。1.4萜類成分。萜類成分主要包括三萜及其皂苷、單萜和環(huán)烯醚萜。萜類成分具有廣泛的生物活性，如抗炎、抗菌、抗病毒等。余東蕾等[24]從密蒙花中分離得到3個萜類化合物分別為羽扇豆醇乙酸醋(lupeolacetate)、cycloeucalenol、chondrillasterol。王邠等[25]就密蒙花中抗菌消炎成分，用色譜法對花蕾的親脂性化學(xué)成分就行研究，得到了3個三萜類化合物，分別為齊墩果-13(18)-烯-3-酮、δ-香樹脂醇、大戟烷-8,24-二烯-3-醇乙酸酯。1.5其他成分。除了上述成分外，密蒙花中還有許多其他化學(xué)成分。鄒澄等[26]從密蒙花中分離鑒定出了其色素成分藏紅花苷、甘露醇等化學(xué)成分。穆俊等[27]對密蒙花多糖中的單糖組分進(jìn)行了GC分析，密蒙花多糖主要由肌醇、鼠李糖、阿洛糖、核糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖和木糖8種單糖構(gòu)成，同時分離鑒別出香草酸、半乳糖醇、α菠甾醇等化合物。Xie等[12]從密蒙花中分離得到生物堿類成分N1,N5,N10-三(對香豆酰)亞精胺，是密蒙花中除黃酮、苯乙醇苷類、三萜及其皂苷類等化合物外發(fā)現(xiàn)的又一類化合物。

2密蒙花的分析方法

2.1密蒙花的鑒別。畢煥新等[28]對密蒙花進(jìn)行理化鑒別實驗，采用密蒙花乙醇提取液與三氯化鐵試液反應(yīng)顯污綠色或墨綠色，與鹽酸和鎂粉反應(yīng)得到淡黃棕色泡沫，研究者進(jìn)一步對密蒙花乙醇提取液進(jìn)行處理后置于紫外燈下觀察得到密蒙花顯黃綠色熒光。蒲宇紅等[29]通過觀察多批次密蒙花藥材總結(jié)出了密蒙花性狀包括形狀、表面、花蕾、花萼、花冠、雄蕊、質(zhì)地、氣味等8個方面的特征，隨后又對其分別進(jìn)行TLC和光譜鑒別。結(jié)果表明，TLC中密蒙花在Rf值為0.80與0.64處有2個藍(lán)色斑點，光譜鑒別中密蒙花在(326±3)，(275±2)，(266±2)，(218±3)nm處有最大吸收峰。朱露[30]收集了22批密蒙花藥材以毛蕊花苷、蒙花苷為對照品建立密蒙花TLC定性鑒別法，結(jié)果表明所測樣品與對照品相應(yīng)位置上斑點清晰，分離效果好，展開后Rf值適中。2.2密蒙花的檢查。朱露[30]對密蒙花藥材進(jìn)行“水分”“灰分”限量研究，結(jié)果表明密蒙花水分含量<10%，灰分<8%有利于藥材的保存和療效。范麥妮[31]研究密蒙花對Pb的吸收能力，結(jié)果表明密蒙花對鉛有一定的耐性和較強(qiáng)的吸收能力。隨著Pb處理濃度的增加，植物體內(nèi)的Pb含量呈線性增加,且在植物體內(nèi)的分布規(guī)律是葉子<莖<根系。2.3含量測定。王軍憲等[3]采用HPLC對11批次密蒙花中的蒙花苷進(jìn)行含量測定，得到蒙花苷平均回收率為97.02%(RSD為1.5%，n=4)。劉進(jìn)懷等[32]采用HPLC測定降糖明目顆粒中蒙花苷的含量，得到蒙花苷平均回收率和RSD分別為99.40%，1.59%。韓澎等[33]采用RP-HPLC測定密蒙花中毛蕊花苷的含量，得到平均回收率為100.71%(RSD=1.41%，相關(guān)系數(shù)為0.999)。研究者又用同樣方法測定了10個不同產(chǎn)地的密蒙花藥材中毛蕊花苷的含量，結(jié)果在0.79%~2.30%。王曉靜等[34]建立HPLC多波長法測定密蒙花中4個化合物(毛蕊花糖苷、蒙花苷、木犀草素、芹菜素)的含量，證實了HPLC可在同一色譜條件下利用不同檢測窗口實現(xiàn)多類組分及多個成分的同時測定。許龍等[4]建立HPLC測定8個不同產(chǎn)地密蒙花藥材中蒙花苷、木犀草素、芹菜素的含量，且四川簡陽產(chǎn)密蒙花總黃酮含量最高。李玉美等[6]采用水蒸氣蒸餾法提取，用GC/MS進(jìn)行分析，按峰面積歸一化法計算得到了密蒙花中多個揮發(fā)性化學(xué)成分的相對含量。潘喬丹等[35]采用超聲波提取密蒙花多糖，并用苯酚硫酸比色法測定密蒙花多糖含量為190.8mg•g1。張小曼等[36]以水為介質(zhì)，對密蒙花進(jìn)行微波處理，能夠得到黃色素類成分。2.4浸出物。由于中藥有效成分并不明確，難以進(jìn)行精確定量，因而采用浸出物來反映中藥材的質(zhì)量情況。然而，自中國藥典1963年版首次收錄密蒙花藥材以來，歷版中國藥典及地方標(biāo)準(zhǔn)未見“浸出物”項。僅有《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)第六期》(簡稱“香港標(biāo)準(zhǔn)”)收載了該項，可能由于密蒙花種化學(xué)成分溶解性比較復(fù)雜，因而同時規(guī)定了水溶性浸出物和醇溶性浸出物。同時，有關(guān)于密蒙花浸出物的研究報道較少。2.5指紋圖譜(特征圖譜)。中藥指紋圖譜的建立有助于補(bǔ)充和提高中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)以及控制原料與成品的一致性，減少批間差異。韓澎等[37]運用RP-HPLC測定了10個不同產(chǎn)地密蒙花商品藥材，建立中藥密蒙花指紋圖譜。經(jīng)過分析，密蒙花的HPLC指紋圖譜可以有效控制其內(nèi)在質(zhì)量。楊勝遠(yuǎn)等[5]對密蒙花中黃色素進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)密蒙花黃色素在pH3~9.18范圍內(nèi)隨著pH值升高，328nm和435nm處的2個峰逐漸向371nm處移動匯集形成新的特征峰，預(yù)期這一特性可作為密蒙花的指紋圖譜用于對密蒙花植物或密蒙花黃色素的鑒別。

3密蒙花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)狀

對現(xiàn)行的國內(nèi)外密蒙花標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢索，目前僅有我國具有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。對不同標(biāo)準(zhǔn)的檢驗項目依據(jù)名稱、來源、性狀、鑒別、檢查、浸出物、含量測定等進(jìn)行梳理，比較不同檢測項目的要求，見表1。

4密蒙花質(zhì)量控制存在的問題

4.1性狀描述的不同。性狀鑒別屬于我國醫(yī)藥學(xué)寶庫中積累了的豐富傳統(tǒng)鑒別方法。地方標(biāo)準(zhǔn)多與中國藥典中描述較接近，部分老版標(biāo)準(zhǔn)描述較為簡單(如山東省中藥炮制規(guī)范1990版)。中國藥典與香港標(biāo)準(zhǔn)相比，主要區(qū)別在于密蒙花的長度、花蕾的長度與直徑，香港標(biāo)準(zhǔn)在這方面要求相對寬泛一些。這就涉及到中藥規(guī)格等級標(biāo)準(zhǔn)的問題，只有構(gòu)建具有國際水平的質(zhì)量等級標(biāo)準(zhǔn)才能確保中藥產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定與安全，進(jìn)而為建立統(tǒng)一、科學(xué)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。4.2鑒別項的不足。目前密蒙花的鑒別項較為單薄，多數(shù)為顯微鑒別或理化鑒別。雖能解決部分日常問題，然而面對偽品等質(zhì)量問題又顯得不足。TLC、UV等色譜、光譜方法可以為密蒙花的真?zhèn)舞b別及質(zhì)量評價提供了技術(shù)支持[38]，同時不斷更新現(xiàn)有的鑒別項內(nèi)容(如顯微鑒別)[28]，引進(jìn)新技術(shù)、新方法(如微性狀鑒別等[39])可以更好地補(bǔ)充鑒別項的不足，提高鑒別項的應(yīng)用。4.3檢查項嚴(yán)重缺乏。檢查項是確保中藥用藥安全的重要內(nèi)容。隨著環(huán)境問題的愈演愈烈，重金屬污染、農(nóng)藥殘留等問題層出不窮。加之，由于運輸、貯藏不當(dāng)?shù)染壒剩幉囊桩a(chǎn)生霉菌毒素等問題。從表1中可知，除了香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)外，其他標(biāo)準(zhǔn)均缺少安全性檢查項目(如水分、霉菌毒素、重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留等)，不能確保密蒙花臨床用藥安全，因而增加質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中檢查項迫在眉睫。有必要對這類藥材進(jìn)行安全性抽樣評價，找出可能易出的問題，并基于此制定合理的安全檢查項。4.4浸出物需補(bǔ)充。密蒙花具有豐富的藥理藥效作用，其有效成分并不明確，難以進(jìn)行精確計量。中藥多采用湯劑，以浸出成分進(jìn)行服用，故而可參考香港標(biāo)準(zhǔn)制定的浸出物項進(jìn)行補(bǔ)充。并通過調(diào)研密蒙花的煎藥溶劑，制定相應(yīng)的(醇溶性、水溶性)的浸出物標(biāo)準(zhǔn)。4.5含量測定項需完善。目前，密蒙花的含量測定項基本選用蒙花苷作為指標(biāo)成分，單一指標(biāo)成分難以反應(yīng)中藥材的質(zhì)量，構(gòu)建“多指標(biāo)含量”或“有效成分群”的測定方法是完善含量測定項，提高檢測方法專屬性的可參考途徑之一。揮發(fā)油是密蒙花的重要組成部分，然而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)均未對其進(jìn)行考察，未來可采用水蒸氣蒸餾法等方法對密蒙花的揮發(fā)油的測定進(jìn)行補(bǔ)充。4.6指紋(或特征)圖譜的建議。指紋(或特征)圖譜具有整體性與模糊性的特征，可以作為中藥的鑒別與含量測定方法，已廣泛運用于中藥制劑提取物的質(zhì)量評價分析。未來是否可以構(gòu)建密蒙花指紋(或特征)圖譜用以完善質(zhì)量控制與評價體系值得進(jìn)一步研究與探索，但指紋(或特征)圖譜在中藥整體性評價中的運用價值是毋庸置疑的。

5結(jié)語

中醫(yī)藥的傳承與發(fā)展需要質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的保障，然而過高、難度大的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)又增加了企業(yè)單位的檢驗難度與負(fù)擔(dān)，不利于行業(yè)的健康發(fā)展。只有對質(zhì)量控制進(jìn)行深入研究，找出質(zhì)量控制的關(guān)鍵點與不足，才能找準(zhǔn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的思路。基于這些關(guān)鍵點與不足，通過“替代標(biāo)準(zhǔn)品法”與“整體評價”等新理念[40-41]，制定科學(xué)、簡便、實用的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(即“淺出標(biāo)準(zhǔn)”)，從而實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化發(fā)展。

作者:楊東方 胡云飛 丁倩倩 周建理 單位:山西藥科職業(yè)學(xué)院